广州医学院实验医学研究中心
- 作品数：153 被引量：325H指数：9
- 相关作者：彭燕陈耀勇吕景礼张金栋郑国兵更多>>
- 相关机构：广州医学院第一附属医院第一临床学院广州呼吸疾病研究所广州医学院第一附属医院第一临床学院中国科学院广州地球化学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程电子电信更多>>
- mtHSP70/HSV-TK双基因真核共表达质粒的构建
- 2011年
- 目的构建结核杆菌热休克蛋白70(mycobacterium tuberculosis heat-shock proteins 70,mtHSP70)和自杀基因单纯疱疹病毒-胸苷激酶(herpes simplex virus-thymidinekinase,HSV-TK)双基因真核共表达质粒pCMV-mtHSP70-IRES-TK。方法登录Genbank查询HSV-TK和mtHSP70基因mRNA序列,应用引物设计软件DNA club分别设计扩增HSV-TK和mtHSP70基因全长cDNA的特异引物。以pcDNA3-TK质粒或mtHSP70质粒DNA为模板,分别采用各自的引物,用prime STAR HS DNA Polymerase进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),获得HSV-TK和mtHSP70基因cDNA片断,连接到T载体pMD18-T上,转化大肠杆菌TG1后用HSV-TK和mtHSP70基因的特异引物进行菌落PCR,确定含有阳性mtHSP70或HSV-TK重组质粒并将阳性pMD18T-TK重组质粒和pMD18T-mtHSP70重组质粒进行上、下游测序,测序结果与基因序列进行同源比较。选定正确的质粒用于HSV-TK和mtHSP70基因的亚克隆,构建质粒PCMV-mtHSP70-IRES-TK,所得阳性克隆摇菌后少量提取质粒,分别用NotⅠ单酶切及EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切进行酶切鉴定。结果构建的pCMV-mtHSP70-IRES-TK质粒分别用NotⅠ单酶切及EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切进行酶切鉴定,酶切产物电泳见特异酶切图谱,确定为重组质粒pCMV-mtHSP70-IRES-TK。结论本实验为后续研究mtHSP70/HSV-TK双基因的协同抗肿瘤作用奠定了实验基础。
- 曾曙光刘启才王素文徐平平章锦才张积仁
- 关键词：真核表达免疫治疗肿瘤
- 脑梗塞恢复期患者进行健身球运动的经颅多普勒观察
- 1998年
- 目的：探讨健身球运动对脑梗塞恢复期神经功能的恢复作用。方法；应用经颅多普勒（TCD）监测30例脑梗塞恢复期患者用患侧和健侧上肢及30例正常对照组分别进行2分钟的健身球运动。结果：对侧大脑中动脉（MCA）平均血流速度（Vm）增加分别为10．4±5．1％；9．7±2．7％；11．3±4．9％。患侧上肢运动时，同侧MCA的Vm增加10．5±4.6％，分别与健侧上肢（1．7±3．7％）及正常对照组（1．8±4．5％）比较，P＜0．01。结论：脑梗塞恢复期用患侧上肢进行健身球运动，双侧MCA的Vm增加，有助于神经功能恢复，也证实了TCD可作为评价脑血流量改变的有效手段。
- 崔一山柳息洪
- 关键词：经颅多普勒脑梗塞平均血流速度健身球运动
- 香烟烟雾暴露对大鼠肺组织Wnt3a和β-catenin蛋白表达的影响
- 2012年
- 目的探讨香烟烟雾暴露对大鼠肺组织Wnt3a和β-catenin蛋白表达的影响。方法20只雌性SD大鼠，按随机数字表分为对照组和模型组，每组10只。模型组大鼠被动吸入香烟烟雾，每天2次，每次45min；对照组大鼠不接触香烟烟雾。100d后处死动物，光镜下观察肺组织的病理形态学改变，免疫组化法检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Wnt3a和β-catenin蛋白表达，并测定2组大鼠支气管平滑肌厚度。结果模型组大鼠肺组织呈现慢性炎性反应和肺气肿样改变，小气道壁及平滑肌层增厚明显。α-SMA主要表达于气道和血管的平滑肌层。模型组支气管平滑肌厚度高于对照组[（3．06±0．62）μm比（1．86±0．43）μm，P〈0．05]。Wnt3a和β-catenin主要表达于支气管上皮细胞和肺泡上皮细胞。模型组与对照组支气管上皮细胞Wnt3a蛋白表达分别为74．54±4．14、89．24±3．02；肺泡上皮细胞Wnt3a蛋白表达分别为91．97±2．50、110．46±3．85，组间比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。模型组与对照组支气管上皮细胞胞质β-catenin蛋白表达分别为86．97±4．87、103．18±3．77；支气管上皮细胞胞核β-catenin蛋白表达分别为95．75±3．91、116．12±5．76；肺泡上皮细胞胞质β-catenin蛋白表达分别为106．24±4．57、128．81±3．96；肺泡上皮细胞胞核β—catenin蛋白表达分别为125．44±4．89、152．90±4．10，组间比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论香烟烟雾可诱导大鼠肺组织Wnt3a和β-catenin蛋白表达匕调。
- 邹威凤胡国平李冰冉丕鑫
- 关键词：慢性阻塞性WNT蛋白质类气道重构
- PI3K/AKT抑制剂联合放射对CNE-1细胞Ku70、Ku80表达的影响
- 2012年
- 目的:分析体外研究磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)信号转导通路抑制剂(LY294002)联合放射对鼻咽癌细胞CNE-1Ku70、Ku80mRNA表达的影响,探讨PI3K/AKT抑制剂影响放射敏感性的机制。方法:体外培养人鼻咽癌细胞CNE-1,取指数生长期细胞分为四个实验组:对照组(A)、单纯放射组(B)、单纯药物组(C)、加药联合放射组(D);RT-PCR检测各组Ku70、Ku80mRNA的表达水平。结果:RT-PCR结果显示,放射后Ku70mRNA的表达增高,而抑制剂LY294002单纯作用CNE-1细胞后Ku70mRNA的表达水平无改变,但联合放疗后,可以降低放射后的Ku70mRNA的表达水平(P<0.05);本实验中Ku80mRNA的表达水平在各实验组中未观察到明显改变。结论:LY294002联合放疗可抑制Ku70表达,通过减少CNE-1细胞DNA损伤后的再修复影响放射敏感性。
- 翁成荫刘国龙关明媚彭燕李宝秀毛海波
- 关键词：鼻咽癌PI3K/AKT抑制剂
- TCD对脑梗死恢复期患者进行运动的观察
- 脑梗死患者神经功能恢复的机理非常复杂。因此,对其机理的基础研究日趋深入, 本文应用经颅多普勒(TCD)观察脑梗死恢复期患者进行健身球运动的脑血流动力学改变,探讨健身球运动对脑梗死恢复期神经功能的恢复作用及其机理。
- 崔一山柳息洪
- 文献传递
- 尾加压素Ⅱ促兔肺动脉平滑肌细胞增殖及机理探讨被引量：10
- 2004年
- 目的探讨尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,U-Ⅱ)对兔肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的作用及机理。方法采用植块法培养家兔PASMCs,以MTT测定和[3H]-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入法观察U-Ⅱ对PASMCs增殖的影响,加入不同浓度的几种细胞内信号转导阻断剂,观察对U-Ⅱ效应的影响。结果U-Ⅱ(10-9mol/L-10-7mol/L)浓度依赖地促进PASMCs的A值增加及[3H]-TdR掺入,以10-7mol/LU-Ⅱ的作用最明显,A值和[3H]-TdR掺入量分别较对照组高429%和685%(P<005)。10-10mol/LU-Ⅱ对PASMCs增殖无作用。尼卡地平、W7、H7、PD98059在一定浓度范围内(10-7mol/L-10-5mol/L)均可以浓度依赖地抑制U-Ⅱ诱导的PASMCs的A值增加及[3H]-TdR掺入增加。在浓度为10-5mol/L时,其抑制作用最明显,A值的抑制率分别为423%、196%、232%和105%(P<005),[3H]-TdR掺入量的抑制率分别为466%、98%、217%和147%(P<005)。结论U-Ⅱ具有较强的促PASMCs增殖的作用,其诱导PASMCs增殖是通过Ca2+、CaM、PKC、MAPK来介导的。
- 彭公永何志义刘启才李冰钟南山冉丕鑫
- 关键词：肺动脉血管
- 经颅多普勒对脑梗死恢复期患者运动的脑血流研究
- 目的:探讨健身球运动对脑梗塞恢复期神经功能的恢复作用。方法:应用经颅多普勒(TCD)监测30例脑梗塞恢复期患者患侧和健侧上肢及30例正常对照组分别进行2分钟的健身球运动。结果:对侧大脑中动脉(MCA)平均血流速度(Vm)...
- 崔一山柳息洪
- 关键词：经颅多普勒脑梗塞平均血流速度健身球运动
- 文献传递
- 探讨细胞不同初始接种密度对转染效率的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨不同初始接种密度对细胞转染效率的影响。方法:利用Lipofectamine 2000(Lipo)介导GCLC基因(γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位)及绿色荧光蛋白(GFP)表达载体转染大鼠肺泡上皮L2细胞,通过双萤光素酶报告基因系统检测萤光素酶活性值、荧光显微镜和流式细胞仪检测其GFP表达情况,来探讨细胞不同初始接种密度对转染效率的影响。结果:细胞初始接种密度不同,其转染效率也不同。结论:细胞不同初始接种密度对转染效率有显著性影响,转染细胞数适宜才能得到较高的转染效率。
- 洪玮付欣周问渠邹东霆李冰
- 关键词：脂质体转染效率绿色荧光蛋白
- siRNA沉默LBH基因促进人支气管上皮细胞周期进展被引量：2
- 2011年
- 目的:利用合成的小分子干扰RNA(siRNA)转染人支气管上皮细胞16HBE,观察LBH(limb-budand heart)基因表达下调对16HBE细胞周期及相关基因表达的影响。方法:脂质体2000转染靶向LBH基因的siRNA到16HBE细胞,荧光定量RT-PCR检测siRNA转染后LBH基因表达,流式细胞术检测LBH基因沉默后16HBE细胞周期的改变,荧光定量RT-PCR及Western blotting检测LBH基因沉默后细胞周期素E1和E2表达水平。结果:50 nmol/L siRNA转染16HBE细胞48 h后,LBH基因的表达水平只有对照组的14%;siRNA转染16HBE细胞48 h,其G1期细胞百分率比对照组减少9.28%,而S期细胞百分比增加14.08%;16HBE细胞在50nmol/L siRNA的转染后,细胞周期素E2的表达水平为对照组的2倍,而细胞周期素E1的表达没有发生明显改变。结论:靶向于LBH基因的siRNA能有效沉默16HBE细胞中LBH基因的表达,LBH基因的表达下调促进了16HBE细胞周期G1/S期的进展;细胞周期素E2的表达上调参与了LBH沉默导致的细胞周期G1/S期的进展。
- 刘启才王颖峰杨春祥李晓艳彭燕彭杰李冰李立
- 关键词：RNA干扰基因16HBE细胞细胞周期
- 酵母基因报道系统检测环境二恶英类似物的污染被引量：7
- 2004年
- 利用一套酵母基因报道检测系统 ,建立和标化了对二恶英类标准样品测定的方法 ,证明此系统可检测ng级的二恶英及其类似物 ,具有简单、快速的的特点 .对广州市区工业和生活污水排放较为集中的水体进行的测定显示 ,二恶英及其类似物在部分地区超标 ,而各区经处理的自来水均无超标污染 .对小鼠急性毒性实验的血清样品的测定同样证明系统能够测定未浓缩处理的复杂样本 ,具有一定的应用价值 .图 4参
- 黄莉王建华戴丽军刘寒英邱剑峰文端成冯媛瑜李冰
- 关键词：二恶英污染
