徐州医学院药学院江苏省肿瘤生物治疗重点实验室 作品数:68 被引量:86 H指数:4 相关作者: 郑骏年 田卉 李圆 邸洁慧 底洁慧 更多>> 相关机构: 湖南中医药大学中西医结合学院 徐州师范大学生命科学学院 广东工业大学轻工化工学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省自然科学基金 江苏省高校自然科学研究项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 化学工程 更多>>
荷载hTERT基因double-shRNA溶瘤腺病毒对人前列腺癌DUl45细胞的杀伤效果 2018年 目的 构建荷载hTERT基因double-shRNA溶瘤腺病毒ZD55-double-hTERT,研究其对前列腺癌DUl45细胞的杀伤效果.方法 实时荧光定量PCR法检测对hTERT基因的mRNA表达的影响;Western blot检测对前列腺癌细胞hTERT、病毒E1A蛋白表达的影响;MTT法检测对细胞增殖的抑制作用;Hoechst-33342染色了解不同处理组对前列腺癌细胞凋亡的诱导作用.结果 成功包装病毒ZD55-double-hTERT;RT-PCR和Western blot结果显示:ZD55-double-hTERT组hTERT表达量明显减少,与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.05),所包装的病毒可以表达E1A蛋白.MTT结果显示:20MOI的各组病毒感染DUl45细胞72 h后,ZD55-double-hTERT组细胞存活率为(45.13±3.41)%,显著低于Blank组(81.60±3.31)%、ZD55-hTERT1组(70.51±4.69)%和ZD55-hTERT2组(76.93±1.63)%(P<0.05).Hoechst-33342染色结果显示:ZD55-double-hTERT(57.29±4.19)%与Blank(3.29±1.73)%、ZD55-hTERT1(23.14±3.56)%、ZD55-hTERT2(33.38±3.55)%相比,DU145细胞凋亡率明显增加(P<0.05).结论 荷载hTERT基因double-shRNA溶瘤腺病毒ZD55-double-hTERT与单靶点溶瘤腺病毒比较,对前列腺癌DUl45细胞hTERT基因的沉默作用增强,抑制增殖和促进凋亡的作用进一步提高. 孙方浩 郑骏年 魏晋 刘星 徐觉剑 陈伟 娄禄 张义静关键词:前列腺肿瘤 溶瘤病毒 微RNAS 基因 霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链结构类似多肽融合蛋白的制备 2012年 为了在大肠杆菌中表达霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)与胰岛素B链(9-23)肽段结构类似多肽(Ins B(9-23))的融合蛋白,使用基因工程方法构建了CTB与Ins B(9-23)的融合基因CTB-Ins B-X若干,并将融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET28a(+)中,获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌株经乳糖诱导后,其表达产物经过12%SDS-PAGE分析表明该菌株可以包含体形式表达融合蛋白,并制备得到纯度较高的重组蛋白。该重组蛋白的包含体经过变性、复性后,可以在体外自组装成五聚体结构。GM1-ELISA分析结果表明,重组蛋白在体外可以与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异性结合,表明该融合蛋白保持了CTB形成五聚体的生物活性。 杨洁 王华倩 熊祺琰 黄文睿 李泰明 吴洁 曹荣月 刘景晶关键词:霍乱毒素B亚单位 包含体 神经节苷脂GM1 合成血红素加氧酶-1-shRNA载体的实验研究 2011年 根据Genebank提供的大鼠HO-1(Hmoxl,血红素加氧酶-1)基因序列,参照RNA干扰序列设计原则,设计针对HO-1的4个RNA干扰序列,定向克隆至表达载体pGPU6-GFP-Neo中,最后采用BamH I和Pst I酶切凝胶电泳鉴定。鉴定结果显示成功合成了荷载HO-1-shRNA的表达载体。 宋远见 刘红芝 杨冬芝 张璞 刘志安 裴冬生 宗志敏 魏贤勇关键词:HO-1基因 SHRNA表达质粒 SATB1基因与细胞凋亡的研究进展 2012年 SATB1是一种组织特异性表达的核基质序列特异性结合蛋白,参与染色质高级结构的形成和组织特异性基因的表达调控,在免疫调节、肿瘤转移和凋亡方面发挥着重要的作用。本研究就SATB1基因与细胞凋亡的研究进展作一综述。 张宁 毛立军 温儒民关键词:SATB1 细胞凋亡 B1基因 组织特异性表达 序列特异性 特异性基因 细胞荷载溶瘤病毒 2011年 溶瘤病毒是一类仅在肿瘤细胞内特异增殖的新型病毒载体,具有高度的肿瘤靶向性和良好的转染率。局部注射溶瘤病毒治疗体表肿瘤已获得显著疗效,但全身应用后机体的免疫防御机制明显限制了溶瘤病毒的治疗效果。细胞荷载溶瘤病毒可能是克服这一瓶颈的有效策略,为治疗肿瘤提供了新的平台。 徐尊佑 毛立军 陈家存关键词:溶瘤病毒 肿瘤 siRNA对胃癌细胞增殖抑制及其机制的探讨 被引量:1 2012年 目的:探讨siRNA对胃癌BGC823和MGC803细胞中Cullin1(Cul1)基因表达、细胞增殖的影响及其分子作用机制。方法:体外化学合成Cul1siRNA序列,在siLentFect Lipid Reagent介导下转染2种胃癌细胞。蛋白质印迹法检测Cul1、Cyclins和CDK抑制剂蛋白表达,CCK8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期。结果:转染Cul1siR-NA后胃癌BGC823和MGC803细胞中Cul1蛋白表达分别下调39%和84%,Cyclin D1下调59%和62%,Cyclin E下调47%和54%,而p27蛋白表达上调52%和23%,但p21蛋白表达无明显变化。Cul1干涉后24h2种胃癌细胞的增殖能力下降(P<0.01),48和72h下降更明显,P<0.01。Cul1干涉后3和6hG1期细胞比例较对照组下降缓慢(P<0.01),而Sub-G1期Cul1干涉组与对照组差异无统计学意义。结论:Cul1siRNA可有效的干涉胃癌BGC823和MGC803细胞中Cul1基因的表达,Cul1干涉后可能通过影响Cyclins和CDK抑制剂蛋白表达从而使细胞周期停滞在G1期,最终能明显抑制胃癌细胞的增殖。 雍红梅 白津 洪雯 郑骏年关键词:胃肿瘤 遗传学 PLCε对人骨肉瘤细胞迁移侵袭影响的实验研究 被引量:1 2014年 目的研究磷脂酶Cε(phospholipase C epsilon,PLCε)对人骨肉瘤细胞株U2OS迁移侵袭能力的影响。方法 siRNA干扰U2OS细胞PLCε的表达,应用CCK-8实验检测PLCε对细胞增殖能力的影响,以划痕实验、Transwell小室模型实验测定细胞迁移能力改变情况,以明胶酶谱实验测定细胞分泌基质金属蛋白酶MMP2的变化。结果体外合成特异性PLCε基因siRNA可明显抑制U2OS细胞中PLCε的表达;沉默PLCε后,U2OS细胞的增殖能力无明显变化,而划痕愈合能力、迁移活力较对照组细胞明显下降,其分泌MMP2的水平也明显下降。结论沉默PLCε可致人骨肉瘤细胞U2OS的迁移和侵袭能力下降。 吴金霞 曹文嘉 桑苗苗 郑骏年 裴冬生关键词:SIRNA 增殖 迁移 骨肉瘤 培高利特对脑缺血/再灌注损伤海马神经元HIF-1α表达的影响 2010年 目的研究培高利特(pergolide)对沙土鼠前脑脑缺血/再灌注(I/R)损伤海马CA1区神经元低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响。方法采用沙土鼠5 min I/R损伤模型。54只雄性沙土鼠随机分为3组:假手术组、I/R组、培高利特组。分别于再灌注第1、3、7天行免疫组织化学染色法,检测海马CA1区神经元HIF-1α的表达。结果假手术组沙土鼠海马CA1区HIF-1α有较弱的表达。与假手术组相比,I/R组海马CA1区再灌注1天HIF-1α的表达无明显改变(P>0.05);至再灌注3天及7天HIF-1α表达消失(P<0.01或P<0.05)。培高利特可显著诱导海马CA1区神经元中HIF-1α的表达,以再灌注1天表达最多(P<0.01),随再灌注时间的延长表达缓慢减少,至第7天仍有较高水平的表达(P<0.01)。结论培高利特可显著诱导脑I/R损伤后海马CA1区神经元HIF-1α的表达,可能是其脑保护作用的机制之一。 纵雪梅 许铁 曾因明 裴冬生关键词:培高利特 沙土鼠 壳聚糖纳米粒基因载体的制备和体外转染实验研究 被引量:3 2010年 目的制备基因载体壳聚糖纳米粒,研究其结构特征及其体外对细胞的转染活性。方法以复凝聚法制备壳聚糖-pDNA纳米粒;电镜测定其形态、粒径;凝胶电泳阻滞实验观察壳聚糖和pDNA的结合力;紫外可见分光光度计测定其负载力、负载率;体外转染入人胚肾细胞293T,荧光显微镜观察转染效率,CCK8法评价细胞毒性。结果壳聚糖-pGFP纳米粒多呈球形,直径为(132±48)nm;凝胶电泳阻滞实验示pGFP被完全包裹在纳米粒内;其负载力(LC)为(48.2±2.0)%,负载率(LE)为100%;体外转染实验证明壳聚糖-pGFP纳米粒能介导pGFP转染293T细胞并在细胞中表达绿色荧光蛋白;壳聚糖-pDNA抑制率(26.08±4.28)%。结论采用复凝聚法制备的壳聚糖-pDNA纳米粒可有效转染至细胞内,但有一定的细胞毒性。 王红梅 肖玉洁 韩正祥 高向阳 裴冬生 杜秀平关键词:壳聚糖 纳米粒 基因载体 转染 HL7702-HBX与HepG2-HBX细胞株的建立及鉴定 被引量:2 2010年 目的建立稳定、高效的HBx蛋白体外表达细胞株,以便进一步研究HBX基因和HBx蛋白的致癌作用及机理。方法建立HBX真核表达载体pcDNA3.1-HBX,通过脂质体介导将pcDNA3.1-HBX转染到人正常肝细胞株HL7702及人肝肿瘤细胞株HepG2中。结果 RT-PCR、蛋白质印迹及免疫荧光的实验结果显示,HBX基因在人正常肝细胞株HL7702及人肝肿瘤细胞株HepG2中得到了表达。结论成功构建了表达HBx蛋白的HL7702-HBX与HepG2-HBX细胞株,为进一步研究HBX基因和HBx蛋白的致癌作用及机制奠定了实验基础。 尤红娟 裴冬生 刘晓梅 汤仁仙关键词:HBX 细胞株 基因表达