中国医学科学院北京协和医学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室
- 作品数：10 被引量：44H指数：3
- 相关作者：冷文川刘涛董杰陈岚杜应莲更多>>
- 相关机构：中国农业大学动物医学院南方医科大学生物技术学院生物技术系暨分子免疫学研究所南方医科大学生物技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家公益性行业科研专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 肠道病毒71型3C蛋白表达后细胞蛋白质组差异分析
- 2011年
- 目的利用蛋白质组学技术研究肠道病毒71型(EV71)编码3C蛋白对宿主细胞蛋白表达的影响。方法在293T细胞中瞬时过表达EV71 3C蛋白,应用双向荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)检测3C表达后293T细胞中蛋白的差异。选取表达水平有明显变化的蛋白用Western blot进行验证。结果在293T细胞中过表达3C蛋白后,可引起5个蛋白表达水平发生明显改变,其中4个蛋白表达上调,1个蛋白(HSPA4)表达下调。Western blot验证表明过表达3C可降低HSPA4的表达,HeLa细胞中HSPA4表达为对照的46.8%±10.1%(P<0.05)。结论过表达EV713C蛋白可引起细胞内蛋白表达差异。
- 雷晓波孙振民刘新蕾任丽丽王健伟
- 关键词：肠道病毒EV71蛋白质组差异
- 严重传染病防治基础研究被引量：4
- 2005年
- 传染病是严重危害人类健康的主要疾病之一.目前,传染病在发病率和死亡率方面仍居人类疾病的首位.据世界卫生组织报道,全球平均每年有1 700多万人死于各类传染病,占总死亡人数的1/3.全球每年分别死于急性呼吸道传染病、腹泻、结核、疟疾、乙型肝炎、艾滋病和麻疹等传染病的人数均达百万以上.世界卫生组织数次向全球发出警告:"我们正处在一场传染性疾病全球危机的边缘,没有哪一个国家可以逃避这场危机,也没有哪一个国家可以对此高枕无忧".经济全球化、城市化、交通现代化和人口老龄化等为传染病的流行提供了有利条件,导致传染病的流行正在全球复活.居高不下的传染病发病率,不断涌现的新发、突发传染病等给全球社会稳定和经济发展带来极大破坏.世界各国政府均格外重视传染病的预防与控制.
- 金奇
- 关键词：急性呼吸道传染病世界卫生组织人类疾病传染性疾病乙型肝炎
- 用安德森空气生物采样器采集病毒气溶胶的研究被引量：18
- 2010年
- 目的以表达绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的重组腺病毒(rAdvGFP)为模式病毒,进行气溶胶的主动发生实验和模拟剧烈吹打、振荡混匀等操作,利用安德森采样器进行气溶胶的采集,以建立简单易行的病毒气溶胶采集检测体系。方法用气溶胶发生器模拟模式病毒的气溶胶主动发生,分别在距离发生器管口0、10和20cm处放置采样器及培养皿,在气溶胶发生30s时开始采集,共采集5min。在模拟吹打操作中,将10ml病毒液置于50ml离心管中,用微量移液器反复吸取吹打病毒液;在模拟振荡操作中,将10ml病毒液置于50ml离心管中盖紧,以振荡器最大速度涡旋振荡1min,立即打开管盖采集2min,然后盖紧再重复振荡30s后开盖继续采集。两种模拟操作均在距离管口0和10cm处放置采样器及培养皿,各采集5min。收集各采样器及培养皿中的液体,利用阳离子聚合物聚凝胺浓缩后用PCR方法检测病毒核酸,并接种人胚肾293细胞进行病毒的培养,在荧光显微镜下观察GFP蛋白的表达。结果模拟气溶胶主动发生时,将置于距发生器管口0、10和20cm的采样器和培养皿中的采集液接种细胞均可观察到绿色荧光,并可检测到病毒核酸。模拟剧烈吹打时,置于0cm处的培养皿内可检测到病毒,而置于0cm、10cm处采样器和10cm处培养皿中均未检测到病毒。在剧烈振荡模拟试验中,在距离管口0cm的采样器和培养皿中均可检测到病毒,在置于10cm处的采样器中未检测到病毒,在置于10cm处的培养皿中可检测到病毒。结论利用rAdvGFP模式病毒和安德森采样器初步建立了病毒学实验气溶胶收集检测体系,对模拟危险操作感染性材料所产生的气溶胶做出危险评估,为制定病毒学实验操作规范提供了依据。
- 陈岚车红任丽丽王健伟
- 关键词：空气微生物学病毒学安全管理生物气溶胶
- 38kD抗原特异TCR基因修饰T细胞的抗结核抗原活性研究
- 2012年
- 抗原特异T细胞受体(Tcell receptor,TCR)基因修饰T细胞已被应用于肿瘤、病毒感染过继免疫治疗研究,取得了鼓舞人心的结果,但在结核上未见报道.本研究利用结核分枝杆菌38kD抗原刺激人CD4+,CD8+T细胞,通过分析刺激前后T细胞TCR互补决定区3(complementarity determining region 3,CDR3)谱型,从CD4+,CD8+T细胞中分别筛选出38kD抗原特异的TCR Vα11,Vβ8和Vα3,Vβ8基因家族T细胞,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增获得其α,β链全长基因并插入逆转录病毒载体,构建重组载体pMX-β8-IRES-α11-GFP(pβ8α11)和pMX-β8-IRES-α3-GFP(pβ8α3),分别转染初始CD4+,CD8+T细胞,检测其体外抗结核抗原活性.结果显示,TCR基因修饰的CD4+,CD8+T细胞均表达外源性TCR,不仅能特异性识别抗原,且介导免疫效应功能,表明结核抗原特异TCR基因修饰的T细胞具有应用于多药耐药结核患者过继细胞免疫治疗的可能.
- 罗微张笑冰黄永塔郝佩佩姜振民温茜周明乾马骊
- 关键词：结核分枝杆菌T细胞受体基因修饰
- BST-2抑制HIV-1病毒样颗粒释放的研究
- 2011年
- BST-2是最近发现的可以抑制成熟HIV-1(human immunodeficiency virus,HIV)病毒颗粒从哺乳动物细胞表面释放的宿主因子,随之发现其也可以抑制多种包膜病毒的释放。本研究采用密码子优化的表达HIV-1 gag和gag-pol蛋白的质粒所形成的病毒样颗粒作为研究对象,观测BST-2对这两种病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)的释放抑制情况及其作用机制。结果发现,瞬时表达和稳定表达的BST-2均可以显著抑制病毒样颗粒从哺乳动物细胞释放,同时发现这两种病毒样颗粒(gag/gag-pol)的释放都可以被BST-2抑制;而且,HIV-1中Vpu蛋白可以拮抗BST-2抑制HIV病毒样颗粒释放的作用,另外,通过化学试剂和酶学方法处理,确证BST-2可以被包装进病毒样颗粒中。
- 杜应莲胡斯奇庞晓静岑山金奇郭斐
- 关键词：人类免疫缺陷病毒
- 丙型肝炎病毒受体研究进展
- 2011年
- 丙型肝炎病毒（HCV）是丙型肝炎的主要致病因子，目前全球至少有1．7亿人感染HCV。HCV感染具有高度慢性化特点，高达50％～80％的感染者由于不能有效清除体内病毒而发展为慢性感染，以及肝硬化和肝细胞癌，对人类的生活质量构成严重威胁。HCV属黄病毒科单股正链RNA病毒，基因组全长9．6Kb，共编码包括包膜糖蛋白E1、E2在内的十种蛋白。
- 程敏杨威
- 关键词：受体病毒入侵
- 以腺病毒为模式分析影响病原微生物2种常用灭活方法可靠性的因素被引量：3
- 2009年
- 目的以表达绿色荧光蛋白的重组腺病毒(rAdvGFP)为模式病毒,模拟实验室内利用次氯酸钠灭活含病毒废液和利用紫外线对生物安全柜台面进行消毒的实验室操作,并评价其可靠性及影响因素。方法终浓度为0(阳性对照)、0.5%、0.2%、0.1%、0.05%的次氯酸钠溶液(0.5%、0.2%、0.1%、0.05%次氯酸钠组)分别与rAdvGFP溶液(1×106TCID50)混合后,将混合液原液与混合液的1:10～1:105倍比稀释液分别接种人胚肾293细胞,在荧光显微镜下观察GFP蛋白的表达。将rAdvGFP溶液(1×103TCID50)置于紫外灯下分别照射0(阳性对照)、15、30、60、120min(15、30、60、120min照射组),各组再按垂直照射高度的不同分为5、10、20、30、67cm亚组,照射后收集各组病毒液接种293细胞,在荧光显微镜下观察GFP蛋白的表达。实验均重复3次。结果各组次氯酸钠病毒混合液原液均造成细胞不同程度的损伤,其中0.5%次氯酸钠组混合液原液对细胞的毒性作用较强;稀释10倍后,除0.05%次氯酸钠组外,其余各浓度次氯酸钠组稀释液均导致细胞不同程度的死亡;稀释102倍后,仅0.5%次氯酸钠组稀释液仍对细胞具有毒性作用。荧光显微镜下观察显示,仅0.1%次氯酸钠组的1:10、1:102倍稀释液和0.05%次氯酸钠组的1:10、1:102、1:103倍稀释液接种细胞可见绿色荧光。紫外线照射后在荧光显微镜下观察显示,15min照射组的各亚组细胞均可见明显绿色荧光;30min照射组的20、30、67cm亚组与60、120min照射组的67cm亚组细胞仍可见绿色荧光。结论有效氯浓度须在0.2%以上、安全柜内1.12mW/cm2强度紫外线照射30min以上方能有效灭活重组腺病毒,建立实验室操作的可靠性评价技术体系并据此制定标准操作规程很有必要性。
- 任丽丽陈岚肖艳王健伟
- 关键词：腺病毒科
- 血管内皮生长因子受体KDR胞外区基因对裸鼠人膀胱癌生长的影响被引量：2
- 2001年
- 目的 研究血管内皮生长因子 (VEGF)受体KDR胞外区基因对肿瘤新生血管的抑制作用。方法 采用脂质体转染技术 ,将KDR胞外区基因的真核表达质粒pcDNA 3.1/KDRn7转入人膀胱癌EJ细胞 ,用G418筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞克隆 ,经固相结合实验筛选得到表达与VEGF特异结合的目的蛋白的细胞克隆 ,阳性细胞克隆进行了RT PCR鉴定。结果 鸡胚测活表明 ,EJ细胞表达rKDRn7的能抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管形成 ;表达rKDRn7的EJ细胞株对裸鼠人膀胱癌生长及血管生成明显抑制 ,实验组的微血管密度 (MVD)为 12± 4,阴性对照组 6 2± 11。结论 阻断VEGF/KDR信号传导途径能够抑制肿瘤新生血管的形成 ,延缓肿瘤的生长速度。
- 张志超曾革非张智清张立国曾荔郭应禄
- 关键词：膀胱肿瘤膀胱癌血管内皮生长因子受体
- 红色毛癣菌不同生长阶段的基因表达谱分析被引量：3
- 2011年
- 红色毛癣菌是最重要的浅表感染真菌.目前对红色毛癣菌分子和遗传学方面的研究还比较有限.应用cDNA芯片技术对红色毛癣菌不同生长阶段的基因表达谱进行了分析,获得了2044个在不同生长阶段差异表达的基因.聚类分析表明,这些基因可以分为3种不同的表达模式.本研究验证了先前的结论,即在红色毛癣菌中存在预储存的mRNA.对不同生长状态下转录谱和基因功能分析表明,糖酵解过程中的一些重要的酶具有相似的表达模式,说明在红色毛癣菌的生长过程中,这些酶可能具有共同的调控模式.同时,在红色毛癣菌生长过程中,一些参与诸如小GTPase调控、cAMP依赖的调控途径以及MAPK信号传导途径的基因表达也发生了变化.尽管这些基因和相关的调控途径在红色毛癣菌中的具体生物学功能还不清楚,但它们可能在其生长过程中起了调控作用.
- 徐星晔刘涛冷文川董杰薛颖杨汉春金奇
- 关键词：红色毛癣菌基因表达谱CDNA芯片
- 志贺菌研究进展被引量：14
- 2010年
- 志贺菌是革兰氏阴性、胞内兼性厌氧菌,它引起的志贺菌病对人类健康造成重大影响.全球每年有1.6亿病例,其中死亡110万.志贺菌可分为4个血清群:痢疾志贺菌、福氏志贺菌、鲍氏志贺菌和宋内志贺菌.各血清群代表株全基因组测序工作的完成,使得相关研究进入了全基因组时代.本文简要总结了志贺菌在基因组学、转录组学、蛋白质组学和结构生物学方面的研究进展.
- 彭俊平杨剑金奇
- 关键词：志贺菌基因组学转录组学蛋白质组学结构生物学
