燕山大学环境与化学工程学院生物技术与工程系
- 作品数：61 被引量：258H指数：8
- 相关作者：韩增胜林洪羽刘俊乐李轶更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学动物科技学院河北农业大学动物科技学院河北大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金河北省秦皇岛科技局转基因动物生产基因工程药物研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 四氧嘧啶致小鼠糖尿病模型中体重与剂量关系的研究被引量：12
- 2007年
- 目前，糖尿病已严重威胁人类健康，其发病率已占世界人口的5％，并呈逐年上升趋势。四氧嘧啶（alloxan）是一种有效的致高血糖模型的化学药物，但研究者普遍反映建模的成功率不高，存在小剂量无效、大剂量致死的现象。燕山大学生物工程实验室经过多次重复试验发现，四氧嘧啶剂量与体重存在相关性。为了找出四氧嘧啶剂量与体重的规律性而设计了此次试验，以摸索适合不同体重小鼠糖尿病模型的最佳建模剂量。
- 刘智华李青旺高大威李瑛刘红军冯涛
- 关键词：四氧嘧啶小剂量糖尿病体重小鼠
- 转基因羊乳中重组人乳铁蛋白的分离工艺研究被引量：2
- 2008年
- 支旭勃李青旺冯波肖波韩增胜范玉生张婷
- 关键词：人乳铁蛋白转基因技术羊乳铁结合蛋白
- 四氧嘧啶与链脲佐菌素诱导小鼠糖尿病模型的效果比较被引量：76
- 2006年
- 用相同总剂量的四氧嘧啶1次给药和2次给药及较大剂量链脲佐菌素1次给药3种方法诱导小白鼠糖尿病模型,多次测定血糖,体重等糖尿病相关指标,以确定糖尿病模型建立的最佳方法。结果表明,四氧嘧啶建模率为91．94％,高于链脲佐菌素建模率(66．7％)(P<0．05);四氧嘧啶建模组的死亡率为15％及体重下降率为 18．1％,均高于链脲佐菌素建模组(死亡率3．3％,体重下降率12．0％)(P<0．05);四氧嘧啶连续2次小剂量给药的建模效果优于1次性大剂量给药。两种药物比较,虽然四氧嘧啶的建模率高于链脲佐菌素,但其对建模小鼠的损害亦明显大于链脲佐菌素,建模时连续小剂量给药,并于4．5～5 h后灌胃质量分数50％葡萄糖,可以降低死亡率, 提高建模率。
- 杨润军李青旺赵蕊
- 关键词：糖尿病动物模型四氧嘧啶链脲佐菌素葡萄糖
- 人乳铁蛋白腺病毒载体的构建及细胞表达被引量：1
- 2008年
- 将人乳铁蛋白基因与腺病毒基因组骨架质粒重组,在293细胞中包装重组腺病毒颗粒,获得真核细胞表达的载体pAd-hLTF。以pcDNA3X为模板,PCR扩增hLTF基因,腺病毒穿梭载体pshuttle-cmv与hLTF重组为pshuttle-cmv-hLTF;再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组为pAd-hLTF质粒;脂质体法将重组pAd-hLTF质粒转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒颗粒。Western blot和ELISA法测定细胞中hLTF基因的表达。结果表明,pAd-hLTF质粒转染293细胞后,7～10d后,获得细胞裂解液,将细胞裂解产物再次接种新鲜的293细胞,3～5d后,80%以上的细胞变圆、膨胀、漂浮。Western blot和ELISA结果显示,上清液中有hLTF基因的表达,为重组人乳铁蛋白的体外表达及其功能分析奠定了基础。
- 韩增胜李健高大威李青旺
- 关键词：腺病毒载体重组蛋白质
- 天冬氨酸激酶(AK)编码基因的克隆及其序列分析
- 2004年
- 用PCR方法从谷氨酸棒杆菌突变株ZL9601基因组中扩增获得了天冬氨酸激酶(AK)编码基因,并对该基因编码区(1263bp)进行了序列分析。结果表明:本文扩增的AK基因编码与文献报道的序列基本一致,通过与不同作者克隆的AK基因序列进行比较,同源性最高达99 7%,最低达97 2%。这些碱基的差异均表现为碱基取代,多数碱基取代未引起编码氨基酸的改变,仅有少数碱基取代导致编码氨基酸的变化。由此可见,谷氨酸棒杆菌AK基因的碱基序列存在着多态性。
- 李秀锦仲飞
- 关键词：克隆谷氨酸棒杆菌
- GFP mRNA在树突状细胞中的转染及其影响因素分析被引量：7
- 2006年
- 目的:探讨绿色荧光蛋白(GFP)mRNA在树突状细胞(DC)中的转染及其影响因素。方法:选用gfp报告基因,在体外利用含T7RNA聚合酶的mMESSAGERNA转录试剂盒,合成含有帽子结构的GFPmRNA,通过酵母多聚A聚合酶加尾,制备结构完整的GFPmRNA。与此同时,从人的外周血液中分离单核细胞,并在体外经GM-CSF和IL-4刺激分化为DC。通过转染试剂介导将合成的GFPmRNA转染到DC内并使其表达。采用流式细胞术检测其转染效率和表达水平。结果:体外合成GFPmRNA,经转染试剂介导,实现了gfp基因在DC中的表达。不同的转染试剂、mRNA用量和细胞密度对mRNA的转染效率有较大的影响。采用Transmes-sengerTransfectionKit转染试剂,1μgGFPmRNA在200μLX-VIVO-15无血清培养基中的转染密度为2.5×109/L的DC,可获得较好的转染效果(转染效率达27%以上)。结论:在适当的条件下,通过mRNA转染DC可获得较高的转染效率。
- 仲飞仲振宇梁爽李秀锦
- 关键词：树突状细胞MRNAGFP基因转染
- 猪精液冷冻保存试验效果初报被引量：20
- 2005年
- 六种常温保存液对猪精液进行预处理后,再利用三种冷冻液进行冷冻保存试验,研究常温保存液和冷冻液对猪精液冷冻保存的影响及它们之间的配合效应,以冷冻-解冻后精子活力作为评定标准。结果表明:六种常温保存液对冻后精子的影响存在显著差异(P=0.003);三种冷冻保护液对冻后精子活力的影响无明显差异(P=0.585),但与常温保存液之间表现出明显的配合效应(P=0.0001),可能与常温保存液和冷冻液的成分及它们之间的相互关系有关。试验说明所选用的三种冷冻基础液对精子活力的影响不大,但与常温保存液配合后却能表现出很强的影响力;就单独分析两种因素对精子活力影响而言,常温保存液的预处理占主导地位。
- 李刚李青旺张树山王立强江中良胡建宏陈晓宇韩增胜夏凡
- 关键词：精液冷冻保存精子活力保存液常温猪精液
- 狐狸生长激素基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2009年
- 为制备重组狐狸生长激素(fGH),采用RT-PCR方法,从银狐垂体中扩增fGHcDNA基因,利用SnaBI和NotI位点将fGH基因插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K中α-因子信号肽的下游,构建成fGH基因的酵母分泌型表达载体pPIC9K/fGH,载体经SalI酶切线性化后,通过电转移将线性化的pPIC9K/fGH转化到组氨酸缺陷型酵母宿主菌GS115中。然后利用不含氨基酸的以葡萄糖为碳源的培养基(MD)和以甲醇为碳源的培养基(MM)筛选出组氨酸His+型和甲醇利用正型(Mut+)酵母重组体,再经G418加压筛选出高拷贝fGH基因的重组酵母,经摇瓶发酵培养和甲醇诱导使fGH进行分泌表达。结果表明本实验扩增的fGH基因序列与GenBank发表的序列基本一致,发酵液经SDS-PAGE和Western blotting检测证明构建的重组酵母能够分泌表达fGH,表达的fGH占发酵液总蛋白的34%,表达量达119mg/L发酵液。
- 李巍李秀锦仲飞靳慧君解民刘玉芝刘龙飞苏清洁
- 关键词：CDNA毕赤酵母分泌表达
- 白细胞介素-12对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用被引量：6
- 2012年
- 犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒重要的结构蛋白和抗原蛋白。利用VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为进一步提高VP2DNA疫苗的免疫应答水平,本研究在小鼠体内尝试了利用白细胞介素12(IL-12)基因表达载体提高VP2DNA疫苗的免疫应答水平。首先采用RT-PCR方法从小鼠脾淋巴细胞中分别扩增IL-12大亚基(P40)和小亚基(P35)cDNA基因;然后在真核表达载体pcDNA3.1A上通过引入内部核糖体进入位点(IRES)序列,分别将P40基因和P35基因插入到IRES序列的上下游,构建成IL-12(P40和P35双亚基)基因表达载体,pcDNA-P40-IRES-P35。将上述表达载体与本室构建的VP2表达载体通过磷酸钙方法转染HEK 293T细胞进行瞬时表达,以确定构建的表达载体能否介导相应基因在真核细胞中进行分泌表达。然后用VP2载体单免疫和VP2载体和IL-12载体共免疫方法对小鼠进行免疫(用pcDNA3.1A作为对照)。免疫后在特定时间通过ELISA方法检测小鼠血清抗VP2蛋白的抗体水平,并通过淋巴细胞增殖实验检测免疫后35d小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应。结果表明,扩增的小鼠IL-12P40和P35亚基基因与GenBank的参考序列基本一致。Western-blot检测结果表明,重组IL-12和VP2均能够在HEK293T细胞中进行分泌性表达。ELISA检测结果表明利用IL-2载体与VP2载体共免疫小鼠,其血清中抗VP2的抗体水平明显高于VP2载体单免疫组(P<0.01),抗体水平在第35天高达1:5120。淋巴细胞增殖试验结果表明,免疫小鼠的淋巴细胞刺激指数均明显高于对照组(P<0.01),VP2载体与IL2载体共免疫组的刺激指数明显高于VP2载体单免疫组(P<0.05)。由此可见,在小鼠体内,IL-12基因表达载体可明显提高CPV VP2基因疫苗的免疫应答水平。
- 潘素敏李秀锦仲飞柳新保韩冬梅王幸兴潘宏丽王微
- 关键词：IL-12细小病毒VP2基因DNA疫苗
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒受体及其抑制浆细胞样树突状细胞产生IFN-Ⅰ
- 通过实验表明PRRSV进人细胞不是简单的与细胞非特异性结合，而是一个受体介导的细胞内吞作用。而有研究表明IFN-a对增强细胞抵御PRRSV感染有重要作用。目前已鉴定出存在PRRSV受体有四个:硫酸乙酰肝素、唾液酸粘附素、...
- 王利月林洪羽张永红李秀锦仲飞
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒树突细胞
- 文献传递
