河北医科大学实验动物学部
- 作品数：272 被引量：741H指数：14
- 相关作者：尤红煜刘军须徐增年胡拥军侯洁更多>>
- 相关机构：北京协和医学院比较医学中心中国疾病预防控制中心营养与食品安全所吉林农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金“九五”国家科技攻关计划河北省卫生厅医学科学研究重点课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白Loop1、Loop2基因的克隆与表达
- 2007年
- 腺病毒主要的中和抗原表位位于六邻体蛋白Loop1、Loop2上,目前的研究主要集中在人腺病毒,犬传染性肝炎病毒(即犬腺病毒Ⅰ型)尚未见报道。本次研究参考Genebank发表的基因序列设计引物,提取ICHV基因组DNA,分别PCR扩增六邻体蛋白(Hexon)的Loop1、Loop2基因片段,用T4酶连接在一起,克隆入原核表达载体pET28a中,测序显示本室保存病毒分离株Loop1与CLL株、RI261株和TorontoA26/61株核苷酸序列同源性分别为100%、100%和83.8%;Loop2与CLL株、RI261株和TorontoA26/61株核苷酸序列同源性分别为88.1%、88.1%和99.3%,推导的氨基酸序列同源性分别为93.6%、93.6%和98.6%。转化BL21工程菌,实现了重组Loop蛋白在大肠杆菌中的高效表达,分子质量约为36kDa,并且利用镍柱纯化重组蛋白,纯度达95%以上。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,以间接ELISA法测定血清抗病毒抗体效价达1:320以上,western blot鉴定免疫血清与ICHV特异性结合。本实验为建立新的犬传染性肝炎病毒基因工程产品奠定了良好的基础。
- 郑龙王俊霞李丽敏张霞张焕铃尤红煜
- 关键词：犬传染性肝炎病毒
- α-生育酚琥珀酸酯通过线粒体诱导肿瘤细胞凋亡的研究
- 2010年
- α-生育酚琥珀酸酯(α-tocopheryl succinate,α-TOS)是一种有潜力的细胞凋亡诱导剂,可以诱导人类以及小鼠多种肿瘤细胞凋亡。α-TOS进入细胞后,特异性进入线粒体内,替代结合在线粒体内膜复合体Ⅱ上的辅酶Q,引起线粒体活性氧(re-active oxygen species,ROS)的产生,随后由ROS促使细胞质中的凋亡相关蛋白Bax形成由二硫键连接的二聚体,这些二聚体结合到线粒体的外膜(mitochondrial outer membrane,MOM)上,形成通道,促使线粒体内的细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)从这些通道穿过,转位到细胞质中,级联激活位于细胞质中的caspase,引起细胞凋亡。本文就α-TOS诱导肿瘤细胞凋亡的线粒体途径进行综述。
- 谢英王秀芳
- 关键词：肿瘤线粒体细胞凋亡
- 清洁级小鼠的科学饲养和管理
- 通过介绍KM小鼠和BALB/C小鼠的繁殖方法和饲养管理经验,探讨清洁级小鼠的科学饲养和质最控制.
- 王莉刘军须王瑜冯旭蔡月花
- 关键词：动物模型科学饲养繁殖技术
- 5种垫料物质的细胞毒性研究被引量：20
- 2003年
- 目的 研究松木、麦秸、玉米秸、玉米芯和国外商品垫料 5种垫料物质的细胞毒性作用。方法 将五种垫料物质的丙酮提取物按 1、3、5、10、2 0和 4 0mg/ml的终浓度梯度加入到H2 2 _H2 D8细胞中 ,培养 72h后用考马斯亮蓝法测定细胞的总蛋白量 ,计算细胞的半数致死量 (LD50 ) ;用MTT法测定H2 2 _H2 D8细胞在 4 92nm的吸光度值(A4 92 ) ,计算细胞的相对增值率 ,用 6级毒性分类法进行毒性分级。结果 松木的LD50 <5mg/ml,麦秸、玉米秸、国外商品垫料的LD50 <2 0mg/ml,玉米芯的LD50 >4 0mg ml。麦秸和商品垫料的细胞毒性为 2～ 3级 ,松木的细胞毒性2～ 5级 ,玉米秸的细胞毒性为 1～ 3级 ,玉米芯的细胞毒性为 1～ 2级。在垫料提取物浓度为 5mg/ml、10mg/ml时 ,麦秸组的A4 92 值显著低于玉米秸组和商品垫料组的A4 92 值 (P <0 0 5 ) ,而玉米秸组和商品垫料组相比无显著差异(P >0 0 5 ) ;在浓度为 2 0mg/ml、4 0mg/ml时 ,王米秸组的A4 92 值大于麦秸组和商品垫料组的A4 92 值 (P <0 0 5 ) ,麦秸组和商品垫料组相比差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 松木的细胞毒性最大 ,玉米芯的细胞毒性作用最小 ,玉米秸、国外商品垫料、麦秸三种物质均显示有细胞毒性作用 ,但它们的毒性显著低于松木 ,高于玉米芯。
- 刘福英王春梅刘军须蔡月花王俊霞
- 关键词：细胞毒性细胞培养存活率
- p53、CDK4基因引物扩增的cDNA-Biotin探针与4株克隆瘤细胞原位杂交
- 2004年
- 目的用p5 3、CDK4基因引物扩增的生物素标记的互补DNA(cDNA Biotin)探针 ,检测S2D9、H2D8、E2G8及L3E1 1克隆瘤细胞株中 p5 3、CDK4相关基因表达的差异。方法提取S2D9、H2D8、E2G8及L3E1 1克隆细胞总RNA ,分别用p5 3、CDK4基因引物经反转录聚合酶链反应 (reversetranscriptionpolymerasechainreaction ,RT PCR)扩增。扩增产物用 6 %聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,经银染显色后 ,切下 4个克隆细胞间有差异的条带 ,回收DNA再次扩增 ,扩增产物经纯化后用生物素标记 ,制成生物素标记的cDNA探针 ,再与 4株克隆瘤细胞涂片 ,做探针原位杂交。结果 4个克隆瘤细胞株的RNA与 2种引物RT PCR后 ,获得 2 2条可以进行克隆的cDNA ,取其中 1 1条经生物素标记成cDNA探针。这些探针多数与不同瘤细胞株杂交显示较明显差异。结论这些自制的cDNA
- 牛彦平王秀芳徐增年吕占军
- 关键词：克隆细胞分子探针原位杂交
- 三单位保存的艾氏腹水癌细胞株及克隆细胞蛋白质表达
- 2002年
- 目的 比较三个单位保存的艾氏腹水癌 (EAC)细胞株及克隆细胞的蛋白质表达。方法 对北京市肿瘤研究所 (北京 )保存的EAC进行克隆培养 ,从中选出 5株克隆 ;对武汉大学保种中心 (武汉 )、山东省医学科学院药物研究所 (山东 )及北京保存的EAC细胞株及 5株克隆细胞的SDS PAGE电泳图谱及免疫组化蛋白质分布进行了对比。结果 武汉、山东及北京保存的EAC的电泳条带数分别为 2 2、2 5及 2 8条 ,而克隆细胞E2G8为 2 6条带。三单位EAC瘤细胞对 5种抗体做免疫组化染色 ,与 1株抗体反应的阳性细胞比例均较高 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,与另 4种抗体反应的阳性细胞率差异有显著性 ;5株克隆细胞对 10种抗体作免疫组化染色 ,其中克隆细胞E2G8、E2F4与 7种抗体反应阳性 ,E2C6与 8种抗体反应阳性 ,E1G5、E2B5与 6种抗体反应阳性。克隆细胞一旦与某种抗体反应阳性 ,阳性细胞的比例即在 85 %以上。
- 徐增年李兴琴王秀芳吕占军刘福英刘军须
- 关键词：克隆细胞蛋白质
- Wistar大鼠高转移率肝癌模型
- 2015年
- 目的制备转移率较高的诱发性肝癌大鼠模型。方法取40只130~150 g雄性Wistar大鼠,按100 mg/kg腹腔注射二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine,DEN）,100 ppm N-亚硝基吗啉（N-nitrosomorpholine,NMOR）饮水,给大鼠用药。于给药2、4、10、12、14、20周后各取4只大鼠,对其肝脏、肺脏运用苏木精-伊红染色法（hematoxylineosin staining,HE）染色,同时对肝脏进行甲胎蛋白AFP免疫组化分析。结果模型大鼠从第2周起肝脏变黄,10周开始肝脏出现散在小结节,20周多个肝叶出现较大结节,且60%出现肺转移。结论此建模过程成功模拟了人类肝癌发展的三步曲：肝纤维化-肝硬化-肝癌,可作为人类肝癌良好的动物模型。
- 宋蕾王昭赵丽侯洁刘军须张焕铃刘树锋
- 关键词：肝癌模型WISTAR大鼠
- 玉米秸作为大鼠垫料对其生长发育及繁殖性能的影响被引量：14
- 2003年
- 目的 对比观察不同原料制成的垫料对SD大鼠繁殖性能及其仔鼠生长发育的影响 ,探讨以玉米秸为原料制作实验动物新型垫料的可行性。方法 测定使用玉米秸、卫生纸、刨花三种垫料时SD大鼠的繁殖性能指标及仔鼠体重变化 ,并进行比较分析。结果 出生仔数、初生窝重、初生重三个指标三组间比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;离乳率三组间差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,玉米秸组与卫生纸组差异有极显著性 (P <0 .0 1) ,玉米秸组最高 ,为99.79% ;三组之间胎次间隔差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,玉米秸组为 31.4 1d ;仔鼠生长发育指标 ,三组之间比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 玉米秸作为垫料时 ,SD大鼠能保持较高的繁殖性能 ,可以作为大鼠垫料使用。
- 蔡月花刘军须刘福英王莉冯旭徐增年
- 关键词：玉米秸垫料生长发育繁殖性能
- α-生育酚琥珀酸酯对乳腺癌细胞中IAPs家族蛋白表达的影响
- 2009年
- 目的检测α-生育酚琥珀酸酯(-αTOS)对MCF7和MDA-MB-453乳腺癌细胞增殖以及细胞中凋亡抑制蛋白家族(IAPs)表达的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定-αTOS对人乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-453增殖的抑制作用,细胞分别接种于96孔板后用浓度为51、0、255、0、75、1001、25和150μmol/L的-αTOS处理48 h后检测;细胞经50μmol/L、100μmol/L-αTOS处理122、4、48 h后,用RT-PCR的方法检测细胞内c-IAP1和c-IAP2 mRNA的转录水平;用Western Blot的方法检测c-IAP1和c-IAP2的蛋白质表达水平。结果-αTOS对人乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-453有显著的增殖抑制作用,并表现为剂量依赖性,-αTOS对MCF7和MDA-MB-453的IC50值(细胞半数死亡的药物浓度)分别为132μmol/L和74μmol/L;RT-PCR结果显示,-αTOS使两个细胞系的c-IAP1的转录水平显著下降,且呈时间依赖性;但对c-IAP2的转录水平没有明显影响;Western Blot的结果发现-αTOS使得这两种细胞系的c-IAP1蛋白质翻译水平也呈下降趋势,该结果与mRNA转录水平下降相一致,对c-IAP2蛋白质的表达几乎无影响。因此,α-TOS可能通过抑制c-IAP1蛋白的表达而抑制MCF7和MDA-MB-453乳腺癌细胞的生长增值,a-TOS有望开发成为新的预防和治疗乳腺癌的有效药物。
- 谢英吕占军段肖翠侯洁韩丽枝郭凤王秀芳
- 关键词：IAPS
- 地塞米松对小鼠H_(22)肿瘤生长及血管内皮生长因子表达的影响被引量：6
- 2003年
- 目的 探讨地塞米松对小鼠H2 2 肿瘤生长及血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。方法 BALB c小鼠皮下接种H2 2 肿瘤细胞 ,腹腔注射地塞米松 ,每天测肿瘤直径。用抗CD31单抗对肿瘤组织做免疫组化微血管计数。噻唑蓝法检测地塞米松对体外培养的H2 2 细胞和人脐静脉内皮细胞ECV 30 4增殖的影响。RT PCR法测定肿瘤组织和体外培养细胞的VEGFmRNA表达。结果 地塞米松可以显著抑制体内H2 2 肿瘤的生长 ,给药组肿瘤体积与对照组比较P <0 .0 5。给药组微血管计数和VEGFmRNA表达比对照组显著减少。体外实验中 ,随着地塞米松浓度的增加 ,ECV 30 4细胞的增殖率降低 ;H2 2 细胞中VEGFmR NA表达下降。结论 地塞米松可以显著抑制小鼠H2 2 肿瘤的生长。地塞米松对体内H2 2 肿瘤组织和体外H2 2 细胞的VEGFmRNA表达均有显著的抑制作用。地塞米松对肿瘤细胞VEGF表达的抑制作用可能是其抗H2 2 肿瘤及抗血管生成的一个重要原因。
- 翟羽吕占军
- 关键词：地塞米松小鼠H22肿瘤血管内皮生长因子抗肿瘤血管生成
