暨南大学抗体工程研究中心
- 作品数：37 被引量：148H指数：7
- 相关作者：李志清闻一鸣徐金亭李雨辰吕思更多>>
- 相关机构：广东医科大学基础医学院更多>>
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- 人N端脑钠肽前体(NT-ProBNP)单抗制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：5
- 2016年
- 目的获得人脑钠肽前体N端(NT-pro BNP)的高亲和力、高特异性的抗体,建立双抗体夹心ELISA法检测人血浆中NT-pro BNP。方法通过Discovery Studio4.0软件预测抗原表位,合成其表位肽偶联载体蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术获得分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株,制备腹水型单抗。通过SDS-PAGE、ELISA等方法对获得的抗体性质进行鉴定,建立了双抗体夹心ELISA检测方法,并对120例临床血液样本中NT-pro BNP进行快速检测。结果获得6株能稳定分泌抗人NT-Pro BNP抗体的杂交瘤细胞株,其中4株单抗的腹水型效价高于1×10^(-6)。共筛选出4对能双抗夹心ELISA配对的抗体,其中Ab1与Ab5具有较高的灵敏度和较大的线性范围,其亲和力分别为1.0×10^(10)L/mol与5.9×109L/mol,检测线性范围:300~9 600 pg/ml。样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为97.5%(78/80),阴性检出率为100%(40/40)。结论筛选获得1对高亲和力、高特异性的配对抗体,建立了双抗体夹心ELISA的检测方法,亦为新的快速免疫学检测方法的建立奠定了基础。
- 刘诗琴黄建芳谈思怡邵晨晨向军俭
- 关键词：双抗体夹心ELISA
- bFGF单抗联合紫杉醇抑制MCF-7及MCF-7紫杉醇耐药株(MCF-7/Taxol)增效作用的分子机制
- 2016年
- 目的研究bFGF单抗联合紫杉醇（Taxol）抑制MCF-7细胞增殖、诱导细胞凋亡的分子机制;探讨bFGF单抗联合Taxol对耐药株MCF-7/Taxol的增效作用及机制。方法 CCK-8法检测bFGF单抗联合Taxol对MCF-7及MCF-7/Taxol增殖抑制率;流式细胞术检测二者联合对MCF-7、MCF-7/Taxol的凋亡作用;Western blot检测MCF-7及MCF-7/Taxol相关信号通路蛋白的表达变化。结果 CCK-8法检测结果显示bFGF单抗联合Taxol作用MCF-7、MCF-7/Taxol后对其增殖抑制率分别提高了13.40%~36.50%、9.56%~26.87%,联合能加强对细胞抑制作用。流式细胞术结果显示bFGF单抗联合Taxol作用MCF-7、MCF-7/Taxol后PI、FITC双阳性率分别提高了17.10%~23.20%、22.00%~22.70%,表明联合能加强对凋亡作用。Western blot结果显示MCF-7、MCF-7/Taxol中MabD9＋Taxol组能明显下调Raf-1、p-Erk、p-STAT3、Bcl-2、Caspase3,并上调p-JNK、Bax、cleavedCaspase3、cleaved PARP,其中Raf-1在MCF-7/Taxol中表达量较MCF-7明显下降。结论本研究揭示了bFGF单抗联合Taxol抑制MCF-7的如下机制：加强对Erk/MAPK通路的抑制,并加强上调p-JNK,下调p-STAT3的表达量,引起Bcl-2表达量下调,Bax表达上调,Caspase3、cleaved Caspase3、cleaved PARP表达变化引起细胞凋亡。且耐药株除具类似的抑制机制外,其Raf-1下调更加明显。
- 邵晨晨黄建芳谈思怡刘诗琴向军俭
- 关键词：紫杉醇MCF-7
- 凡纳滨对虾次要过敏原肌质钙结合蛋白的质谱鉴定及免疫交叉反应被引量：5
- 2012年
- 目的:质谱鉴定凡纳滨对虾相对分子质量(Mr)为21 000的次要过敏原组分肌质钙结合蛋白(SCP),分析它与其他虾、蟹等甲壳类过敏原的免疫交叉反应,以阐明SCP可作为甲壳类食物过敏原检测、检验及脱敏的标准过敏原物质。方法:运用MALDI-TOF/TOF-MS鉴定凡纳滨对虾Mr为21000的过敏原组分,利用软件BLAST、ClustalW分析甲壳类食物中该蛋白的氨基酸序列同源性,同时用纯化的21 000过敏原免疫小鼠制备其特异性多克隆抗体,通过该抗体与其他8种甲壳类食物蛋白粗提液的Western blot法结果分析该过敏原的免疫交叉反应。结果:质谱鉴定结果显示,凡纳滨对虾21 000过敏原为肌质钙结合蛋白;氨基酸序列同源性分析显示其与斑节对虾、中国对虾、克氏原螯虾、细趾小龙虾、褐虾的SCP序列一致性为81%～100%;Western blot结果显示,针对SCP的特异性多克隆抗体与凡纳滨对虾、刀额新对虾、斑节对虾、口虾蛄、罗氏沼虾、克氏原螯虾、远海梭子蟹、锈斑鲟、中华绒螯蟹粗提液在SCP对应的21 000左右处均有反应条带。结论:凡纳滨对虾Mr为21 000的次要过敏原为肌质钙结合蛋白,其氨基酸序列与多种甲壳类具有很高的同源性以及较强的免疫交叉反应。
- 王彩霞黄建芳向军俭孙一帆吕思郭洁
- 关键词：质谱分析甲壳类
- 凡纳滨对虾新过敏原烯醇化酶的鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的:鉴定凡纳滨对虾分子量为47 kD过敏原的性质。方法:采用丙酮沉淀法提取凡纳滨对虾总蛋白,通过SDS-PAGE、11例虾过敏患者血清IgE的Western blot分析凡纳滨对虾中过敏原组份,运用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(Matrix-Assisted laser desorption ionization/time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定凡纳滨对虾47 kD未知过敏原组分。结果:通过SDS-PAGE电泳证明所提取的凡纳滨对虾总蛋白组分完全。Western blot结果显示,凡纳滨对虾至少有14种与阳性血清反应的组分,其中,55%的虾过敏患者Ig E与分子量为47 kD的蛋白分子发生特异性反应,质谱分析结果显示47 kD蛋白为烯醇化酶。结论:烯醇化酶是凡纳滨对虾的一种新的过敏原。
- 谈思怡黄建芳孙一帆郭成斌向军俭
- 关键词：凡纳滨对虾烯醇化酶质谱WESTERNBLOT
- 免疫磁珠富集技术进展被引量：14
- 2013年
- 免疫磁珠富集技术，是以磁性微球作为固相表面，结合免疫学方法建立起的一门具有重要应用前景的样品富集手段。具有磁性的微颗粒通过结合特定抗体，在液相中能特异性地与相应抗原结合，依靠磁场的作用力快速地使所需样品量得到大大的浓缩。由于免疫磁珠富集法具有快速及特异性强的特点，在_一十余年的发展中，已广泛应用于分离及浓缩特定细胞、微生物、蛋白质和核酸片段等肉眼难以观察或样品中含量不高的物质。
- 闻一鸣徐金亭向军俭
- 关键词：磁性微球免疫学方法微颗粒微生物
- PD-L1单抗的制备及其在抗肿瘤免疫应答中的作用
- 目的：制备PD-L1的mAb并应用于肿瘤检测与抑瘤研究。方法：应用杂交瘤细胞技术制备PD-L1的mAb并用腹水方式产生大量PD-L1 mAb;用Western-blot方法检验制备的PD-L1 mAb与人肿瘤细胞裂解液中...
- 冯沛然黄建芳向军俭郝代玲王敏珍
- 关键词：PD-L1单克隆抗体免疫治疗
- 抗人PD-L1单克隆抗体的制备及其应用被引量：5
- 2017年
- 目的:获得能应用于临床诊断以及阻断PD-L1与PD-1结合的抗人PD-L1单克隆抗体。方法:采用重组表达的人PD-L1蛋白免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术获得稳定分泌抗人PD-L1单抗的阳性细胞株,ELISA方法鉴定抗体的特异性、亲和力、亚型等方面特性;免疫印迹、间接免疫荧光方法对肿瘤细胞进行检测;肿瘤杀伤实验验证抗体阻断活性。结果:共获得2株抗人PD-L1单抗,抗体效价分别为1∶2.56×10~6和1∶3×10~5,亲和力分别为1.5×10~9L/mol和2.5×10~8L/mol,均与PD-L2蛋白无交叉反应。免疫印迹、间接免疫荧光证实抗体有诊断作用。杀伤实验显示抗体有阻断作用。结论:共获得两株稳定分泌高效价、高特异性的抗人PD-L1单抗的杂交瘤细胞株,能作为诊断抗体应用于肿瘤表型检测和预后有效性的评估。抗体的阻断功能可应用于联合CIK细胞免疫治疗。
- 冯沛然黄建芳王敏珍廖伟聪郝代玲向军俭
- 关键词：PD-L1单克隆抗体流式细胞术CIK细胞肿瘤诊断
- 直接竞争ELISA检测大米样品中的重金属镉被引量：17
- 2015年
- 目的直接竞争ELISA方法检测大米样品中重金属镉。方法用纳米Ti O2对微波消解处理的大米样品中的重金属镉进行富集,通过比较不同p H值和不同洗脱体积来优化纳米Ti O2富集方法,再用直接竞争ELISA检测重金属镉的含量。结果在p H为9时,纳米Ti O2对重金属镉有良好的吸附性,20 mg/ml的EDTA·2Na可将纳米Ti O2吸附的镉定量洗脱。用纯化后的镉单克隆抗体建立直接竞争ELISA检测方法,并进行灵敏度和特异性分析,其灵敏度（IC50）为19 ng/ml,检测限（IC10）为2.1 ng/ml,检测范围（IC20~IC80）为3.6~98.2 ng/ml。用优化后的直接竞争ELISA对富集洗脱后的镉溶液进行检测,检测效果满足国家检测标准。结论本研究对6份市售大米样品采用微波消解和富集,通过直接竞争ELISA检测其镉含量,所得结果与仪器法测定结果一致,可用于实际样品的快速检测。
- 刘艳梅钟辉黄建芳谈思怡刘诗琴邵晨晨向军俭
- 关键词：重金属镉单克隆抗体
- 人源性抗bFGF单链抗体表达载体的构建与酵母表达被引量：3
- 2012年
- 为了提高人源性抗bFGF抗体的表达量,从噬菌体抗体库筛选出的人源性抗bFGF抗体基因中亚克隆单链抗体(single chain fragment variable,ScFv)基因,并将其构建到酵母表达载体pPICZαA中。表达载体质粒经线性化后,电转化法转化至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达。表达产物经镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化,并检测其生物学活性。酶切鉴定结果显示人源性的酵母表达载体构建成功。SDS-PAGE和Western blot结果显示,抗bFGF单链抗体获得了高效表达,表达量可达124mg/L,目的蛋白大小为36 kDa左右。通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95%以上。ELISA结果显示纯化的目的蛋白可与bFGF特异性结合。CCK8检测结果显示,纯化的抗bFGF单链抗体可剂量依赖性地抑制人肺腺癌细胞株A549的增殖。研究结果表明在毕赤酵母中可获得人源性抗bFGF单链抗体高效表达,表达产物具有很好的生物学活性。
- 吕卫东杜超超王宏姜浩武劳学军宋其芳邓宁
- 关键词：BFGF单链抗体
- 抗体技术研究和应用
- 本文介绍了抗体技术的发现、发展应用的过程，介绍了抗体的作用模式和应用范围。现代抗体研究主要包括：1.抗体药物，A抗体人源化(人源性)、B抗体分子小烈化/抗体功能复合化、C.抗体技术多样化;2.抗体组(药)学;3.抗体的相...
- 向军俭
- 关键词：抗体技术抗体研究抗体药物
