徐州医科大学实验动物中心
- 作品数：23 被引量：37H指数：3
- 相关作者：朱孝荣陈仁金胡安康朱裕华吴连连更多>>
- 相关机构：东南大学基础医学院扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 胰岛素样生长因子-1对缺氧心肌细胞凋亡的作用
- 2022年
- 目的:研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对缺氧心肌细胞凋亡的作用。方法:培养原代心肌细胞,并通过α-actin鉴定细胞纯度。实验分为正常组、缺氧组、IGF-1处理组共三组,缺氧组细胞在更换无血清培养基培养24h后被置于缺氧培养箱缺氧培养24h,IGF-1处理组在缺氧模型前1h给与IGF-1。通过TUNEL染色检测各组细胞凋亡率,蛋白免疫印迹检测凋亡蛋白caspase3的表达变化。结果:缺氧后心肌细胞出现显著的凋亡,TUNEL凋亡率显著升高(P<0.05),caspase3蛋白表达显著升高(P<0.05),IGF-1处理可以降低TUNEL凋亡率(P<0.05)和caspase3蛋白表达(P<0.05)。结论:IGF-1可以抑制缺氧心肌细胞的凋亡。
- 吴连连胡安康
- 关键词：胰岛素样生长因子-1心肌细胞缺氧凋亡
- 银杏内酯A对大鼠全脑缺血／再灌注损伤的影响及其机制研究
- 2016年
- 目的探讨银杏内酯A对全脑缺血／再灌注大鼠脑组织损伤的保护作用及其相关机制。方法采用四动脉结扎法构建大鼠全脑缺血／再灌注模型。将大鼠随机分为假手术组（sham组）、缺血／再灌注组（I／R组）和缺血／再灌注给药组（GA组）。观察银杏内酯A对各组大鼠神经功能缺损评分（NDS）、脑梗死面积、脑组织内超氧化物歧化酶（SOD）活力及丙二醛（MDA）含量的影响。结果全脑缺血／再灌注6h后，银杏内酯A能明显降低大鼠NDS分值，减少脑梗死面积，降低脑组织内MDA含量，同时提高SOD活性。结论银杏内酯A能显著改善大鼠全脑缺血／再灌注后的脑神经功能，减轻缺血／再灌注对大鼠脑组织的损害，具有一定的脑保护作用。
- 袁凤刚郝艳玲张春辛陈永刚
- 关键词：银杏内酯A超氧化物歧化酶丙二醛
- 雷帕霉素通过诱导细胞自噬调控调节性T细胞的分化及功能被引量：1
- 2016年
- 目的探究雷帕霉素Treg细胞的调控作用是否与细胞自噬有关。方法取小鼠脾脏,经研磨后用细胞分选试剂盒分选细胞。细胞经抑制剂或干扰分子处理改变细胞自噬水平。通过流式细胞术检测Treg细胞的生成比例。结果抑制自噬Treg细胞生成比例显著下降。结论细胞自噬参与调控Treg细胞功能。
- 陈全刚陈仁金袁红花
- 关键词：TREG细胞雷帕霉素细胞自噬
- 外源性胰岛素样生长因子-1对老年小鼠认知功能的影响被引量：7
- 2017年
- 目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对老年小鼠认知功能的影响机制。方法给予老年C57/BL6小鼠侧脑室注射IGF-1,Western blot检测胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)蛋白的表达,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)荧光染色标记海马齿状回增殖的细胞,尼氏染色标记海马齿状回神经元,用Morris水迷宫实验和跳台实验评定老年小鼠学习记忆能力。结果 Western blot检测显示,IGF-1组老年小鼠海马中IGF-1R表达与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Brd U染色结果显示,IGF-1组海马Brd U阳性细胞数与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。尼氏染色结果显示,IGF-1组神经元细胞数与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。水迷宫实验结果显示,经过训练后,IGF-1组老年小鼠的逃避潜伏期短于对照组,穿过平台的次数与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。跳台实验结果显示,与对照组比较,IGF-1组老年小鼠的基础错误次数减少,而潜伏期延长(P<0.05)。结论老年小鼠注射IGF-1后,其认知功能有一定改善,IGF-1可以提高老年小鼠认知功能。
- 吴连连袁红花朱孝荣
- 关键词：胰岛素样生长因子-1老年鼠5-溴脱氧尿嘧啶核苷水迷宫
- 稳定表达小鹅瘟病毒VP3基因的293T细胞系构建
- 2023年
- 为构建稳定表达鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)VP3基因的293T细胞系,利用PCR技术扩增GPV的VP3基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1-GPV-VP3,再将其转染至293T细胞,并利用博来霉素(zeocine)进行药物压力筛选。结果表明,获得的293T细胞系能够高效表达VP3蛋白,这为小鹅瘟病毒VP3蛋白的生物学功能的深入研究以及鹅细小病毒抗体检测方法的建立提供良好的生物材料。
- 乔丹丹刘婷隽陈全刚胡安康
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因真核表达载体293T细胞
- TM6SF1基因在肺腺癌细胞中的作用
- 2023年
- 目的:探讨TM6SF1基因在肺腺癌细胞中的作用。方法:通过GEPIA数据库分析TM6SF1基因在肺腺癌及正常组织中的表达情况;细胞增殖实验检测过表达TM6SF1后,A549细胞的增殖情况;细胞划痕实验检测过表达TM6SF1后,A549细胞伤口愈合情况;Transwell细胞实验检测过表达TM6SF1后,A549细胞侵袭和迁移情况。结果:通过GEPIA数据库分析得知,与正常组织相比,TM6SF1在肺腺癌中的表达降低,差异有统计学意义(^(*)P<0.05,^(**)P<0.01,^(***)P<0.001),且高表达TM6SF1组生存期更长。另外,TM6SF1与细胞增殖相关的核抗原Ki-67具有负相关性。过表达TM6SF1后,A549细胞的增殖,侵袭和迁移都受到抑制,差异有统计学意义(^(*)P<0.05,^(**)P<0.01,^(***)P<0.001),且下调细胞中信号(PI3K/Akt)通路相关激酶的表达。结论:TM6SF1基因在肺腺癌中可能作为抑癌因子。
- 刘婷隽
- 关键词：肺腺癌细胞增殖迁移
- 雷夫尼特诱导非小细胞肺癌铁死亡被引量：1
- 2023年
- 目的探究雷夫尼特诱导非小细胞肺癌(NSCLC)铁死亡的机制。方法将A549细胞分为4组:对照组及7.5、15、30μmol/L雷夫尼特组。雷夫尼特处理组采用相应浓度的雷夫尼特处理24 h,对照组采用DMSO处理。采用RNA测序法分析雷夫尼特处理后A549细胞基因变化,KEGG途径富集分析筛选雷夫尼特抑制NSCLC的可能通路。采用实时定量PCR和Western blot在mRNA和蛋白质水平验证雷夫尼特处理后铁死亡途径相关蛋白的变化。采用试剂盒检测雷夫尼特处理后细胞氧化应激水平的变化。结果KEGG途径富集分析表明,失调基因主要参与补体和凝血级联、抗坏血酸和醛糖代谢、铁死亡等途径,其中铁死亡途径相关基因有23个。雷夫尼特处理后,GPX4、SLC7A11、SLC40A1基因mRNA表达较对照组显著下调(P<0.05),ACSL4、HOMX1基因mRNA表达显著上调(P<0.05)。此外,GPX4、SLC40A1、FTH1蛋白表达量显著降低(P<0.05),ACSL4蛋白表达量显著上升(P<0.05)。氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)活性和还原型谷胱甘肽(GSH)含量较对照组显著下降(P<0.05),丙二醛(MDA)含量显著增高(P<0.05)。结论雷夫尼特可能通过铁死亡途径参与调节NSCLC。
- 刘婷隽
- 关键词：非小细胞肺癌氧化应激
- GST-CBX2-1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达被引量：3
- 2017年
- 目的:构建GST标签的CBX2-1融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达,纯化出表达蛋白。方法:以CBX2-1全长为模板,构建3对引物,将CBX2-1PCR扩增成3段,通过XhoⅠ和NotⅠ酶切位点将其定向插入p GEX-4T-3载体中,并转化E.coli DH5ɑ,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序坚定正确后,转入E.coli BL21中,经IPTG大量诱导表达,SDSPAGE电泳和Western blot鉴定,运用GST pull down方法纯化3段蛋白。结果:酶切电泳及测序结果证明,原核表达质粒GST-CBX2-1 3个载体构建成功,用Western blot方法证实了GST-CBX2-1-1(1-288),GST-CBX2-1-2(259-600),GST-CBX2-1-3(601-1596)融合蛋白的表达,并成功纯化出3段蛋白。结论:成功构建了GST-CBX2-1-1,GST-CBX2-1-2,GST-CBX2-1-3原核表达载体,证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达与纯化,为进一步研究CBX2-1各结构域的功能提供了前提基础。
- 刘婷隽洪泽辉胡安康
- 关键词：蛋白纯化
- 兔病毒性出血症3C基因荧光表达载体的构建及其在293 T细胞中的表达
- 2016年
- 目的：构建EGFP与3C融合表达的真核表达质粒，为研究RHDV 3C蛋白在病毒感染中的作用提供基础。方法 RHDV 3C基因的片段经过反转录成cDNA，纯化的PCR产物经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后克隆到pEG-FP－C1载体，构建EGFP与3C融合表达的真核表达质粒。 pEGFP－C1－3C真核表达载体转染293T细胞，24 h后荧光显微镜检测及Western blot检测EGFP－3C融合蛋白表达情况。结果24 h后荧光显微镜及Western blot检测表明RHDV 3 C基因全长编码序能够成功插入到pEGFP－C1载体。结论 EGFP－3 C融合表达质粒能够被成功构建，从而有助于探索RHDV 3C蛋白在RHDV感染过程中的功能，为深入探讨RHDV的防治提供基础。
- 刘鹏陈全刚袁红花张锦萍吴连连胡安康陈仁金朱孝荣
- 关键词：兔病毒性出血症病毒真核表达载体
- SNCA和GBA在帕金森病中相互作用研究进展被引量：8
- 2019年
- 帕金森病(PD)是神经系统退行性疾病,病因和发病机制尚不清楚。PD相关基因(如SNCA、GBA、LRRK2、SCARB2、LAMP3、RAB29/RAB7L1、MAPT、GAK、SREBF1和GPNMB等)突变增加散发性PD罹患率。α-突触核蛋白基因SNCA和β-葡萄糖脑苷脂酶基因GBA突变是PD遗传危险因素,但二者在PD中的相关性还有待阐明。
- 郭丽丽王咏王莹尚冰清耿德勤韩旭峰牛海晨
- 关键词：帕金森病
