广州医科大学实验医学研究中心
- 作品数：29 被引量：24H指数：2
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- 人肝细胞生长因子受体启动子荧光素酶表达载体的构建及活性测定
- 2013年
- 目的构建含人肝细胞生长因子受体(C-MET)启动子-223^+60区域的荧光素酶报告基因质粒,并测定其在卵巢癌细胞株中的活性。方法应用PCR法扩增获得含有人C-MET基因启动子-223^+60区域的DNA片段,将其连接至荧光素酶质粒pGL3-Basic中,得到pGL3-C-MET-Promoter重组质粒;经限制性内切酶酶切及测序得以鉴定;将该质粒转染4株卵巢癌细胞,检测细胞中荧光素酶的活性。结果双酶切及测序结果证实pGL3-C-MET-Promoter重组质粒插入片段序列正确,克隆的C-MET基因片段具有启动子活性,在卵巢癌细胞株OVCAR3细胞中的活性最高。结论成功构建了pGL3-C-MET-Promoter报告基因重组质粒,为进一步研究C-MET对卵巢癌生物学行为的影响奠定了基础。
- 李祯生秀杰孙曼汪志辉刘启才
- 关键词：肝细胞生长因子受体卵巢癌启动子
- 老年糖尿病肾病患者血浆差异蛋白的表达被引量：1
- 2017年
- 目的探讨老年糖尿病肾病(DN)与健康人群血浆差异蛋白的表达。方法选取老年DN患者10例(试验组),同期查体健康人群10例(对照组),采用荧光差异双向凝胶电泳(2D-DIGE)检测老年DN患者及健康志愿者血浆蛋白质组的表达情况,以差异表达1.5倍为截断值挑选蛋白质斑点并行质谱分析。结果应用老年DN患者及健康志愿者血浆成功构建差异表达双向凝胶电泳图谱,并分析筛选出33个差异表达斑点,通过质谱分析数据库比对鉴定出6种差异表达蛋白。结论 2D-DIGE技术可有效筛选老年DN相关特异蛋白,为进一步筛选DN血清标志物提供依据。
- 傅明捷王衍慧李静傅君舟黄玉宇黄萍赵路宁
- 关键词：糖尿病肾病血浆蛋白蛋白质组
- 葡萄球菌肠毒素A的真核共表达质粒的构建及其在喉癌Hep-2细胞来源exosomes中的锚定
- 目的 构建葡萄球菌肠毒素A (staphylococcal enterotoxin A,SEA)与锚定蛋白GPI的真核共表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI,转染喉癌Hep-2细胞,制备exosomes,...
- 田涵斋吉晓滨吴晓钟谢景华刘启才
- 关键词：葡萄球菌肠毒素A真核载体喉癌HEP-2细胞EXOSOMES脂质体转染法糖基化磷脂酰肌醇
- 新型芳基修饰的藤黄酸衍生物的合成及其抗肿瘤活性
- 以取代酚或羟基吡啶为原料,在无水碳酸钾存在下,与溴代醇发生威廉姆森醚合反应制得中间体——芳(杂环)氧基醇(2ak);2ak分别与藤黄酸通过光延反应合成了藤黄酸衍生物(3ak)。以DDC/HOSu为偶联剂,芳酸与3-氨基-...
- 张志佳黎金海陈美君黄雁赵路宁
- 关键词：藤黄酸结构修饰衍生物抗肿瘤活性
- 共表达人PUMA和HGF／NK4基因的重组腺病毒的制备及在胰腺癌细胞中的表达
- 2013年
- 目的制备同步表达HGF／NK4基因和PUMA基因的重组腺病毒，感染胰腺癌细胞后检测基因的有效表达。方法将PUMA基因和HGF／NK4基因以串联方式依次克隆至腺病毒穿梭载体，构建重组穿梭载体pAdTrack-PUMA-NK4，转化大肠杆菌BJ5183并在细菌内与腺病毒载体同源重组制备重组腺病毒载体pAd-PUMA-NK4。PacⅠ酶切后转染至HEK293细胞包装得到重组腺病毒。一定滴度的腺病毒感染人胰腺癌细胞株，荧光定量RT-PCR检测细胞中NK4和PUMA基因mRNA表达水平。结果双酶切重组pad-PUMA-NK4穿梭载体鉴定证实目的基因PUMA和HGF／NK4正确克隆；重组腺病毒载体经PacⅠ酶切得到特异的酶切产物转染HEK293细胞后成功包装出重组腺病毒；病毒感染胰腺癌细胞后3-9d内PUMA和NK4基因的表达水平较高，整体持续表达可维持2w。结论成功构建了同时表达NK4和PUMA基因的重组腺病毒载体并包装出相应的重组腺病毒颗粒，该腺病毒能有效感染胰腺癌细胞并高表达NK4和PUMA基因，这为进一步确定NK4和PUMA基因的功能及指导双基因联合治疗胰腺癌提供了理论依据和必要的材料。
- 黄柏强李二毛孔冠群黄志平
- 关键词：NK4PUMA胰腺癌
- 葡萄球菌肠毒素A与黑色素瘤抗原A3共表达真核质粒致敏小鼠淋巴细胞对喉癌细胞模型的影响被引量：1
- 2015年
- 目的观察真核质粒p MAGEA3-IRES-SEA免疫小鼠后,鼠脾淋巴细胞对喉癌细胞模型B16/MAGEA3的杀伤作用。方法将葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal endotoxin A,SEA)和喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(melanoma-associated antigen A3,MAGE-A3),构建成基因共表达的真核质粒p MAGEA3-IRES-SEA,用电转染的方法免疫BALB/C小鼠单侧股四头肌。末次免疫2周后,取脾分离淋巴细胞,与B16/MAGE-A3细胞共同培养,MTT法观察活化的淋巴细胞对B16/MAGE-A3的杀伤作用。结果 ptk-IRES-SEA、p IRES2-EGFP/MAGE-A3和p MAGEA3-IRES-SEA质粒组对B16/MAGE-A3细胞特异性杀伤率均高于空白质粒及生理盐水组(P<0.05);p MAGEA3-IRESSEA质粒组杀伤作用大于ptk-IRES-SEA、p IRES2-EGFP/MAGE-A3质粒组(P<0.05)。结论构建的p MAGEA3-IRES-SEA真核质粒可通过电转染的方式输入到小鼠体内,诱导特异性细胞免疫,可提高杀伤B16/MAGE-A3细胞的作用。为DNA疫苗接种途径、方法及抗喉癌疫苗的研究提供了实验依据。
- 李宁吉晓滨谢景华刘启才
- 关键词：喉癌葡萄球菌肠毒素A黑色素瘤抗原体内免疫
- 药理剂量维生素C体内抗流感病毒疗效研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨药理剂量维生素C（5～20mmoL／L）体内抗流感病毒A／CA／7／09（H1N12009）的作用及效果。方法BALB／c小鼠感染流感病毒A／CA／7／09后接受维生素C溶液皮下注射或经口灌胃，对照组为等量生理盐水，每组4～6只小鼠，每天2次，共14d。每天监测小鼠的体重和死亡情况。在不同时间点取小鼠肺组织，用半数组织培养感染剂量法（TCID50）测定病毒滴度；测定肺组织中炎性因子IL-1B、IL-6、肿瘤坏死因子-a（TNF—a）和干扰素-a（IFN—a）含量；将肺组织切片染色，显微镜下观察炎症反应情况并进行病理评分。结果小鼠感染流感病毒后分别接受生理盐水和药理剂量维生素C治疗，第9天开始生理盐水组出现小鼠死亡，2周内有10％小鼠死亡或体重下降超过25％。而药理剂量维生素c治疗组2周内无小鼠死亡或体重下降超过25％。药理剂量维生素c治疗组小鼠肺内病毒滴度下降至对照组的1／10～1／100，且肺内病毒更早被清除。感染后第4天，药理剂量维生素c治疗组和对照组的肺组织中IL-1含量分别为（0．41±0．13）和（1．06±0．27）ng／g（t=9．36，P〈0．05），IL-6含量分别为（2．17±0．47）和（1．07±0．16）ng／g（t=12．2，P〈0．05），IFN-a含量分别为（1．52±0．3）和（0．84±0．19）ng／g（t=6．82，P〈0．05）。肺组织炎症反应（包括坏死性支气管炎、血管周围炎、细支气管周围炎和肺泡炎等）较对照组轻。结论药理剂量维生素c能降低肺部流感病毒的滴度，降低肺部炎症反应及感染老鼠的死亡。
- 程磷令刘雅雅李冰叶枫冉丕鑫
- 关键词：抗坏血酸流感病毒A型动物
- 喉癌来源黑色素瘤抗原A3在小鼠黑色素瘤细胞模型的表达
- 2014年
- 目的:建立pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核质粒在小鼠黑色素瘤B16细胞稳定表达的肿瘤细胞模型。方法:将喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(Melanoma-associated antigen A3,MAGE-A3)构建成真核质粒pIRES2-EGFP/MAGE-A3,脂质体法将pIRES2-EGFP/MAGE-A3转染小鼠黑色素瘤B16细胞,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜检测阳性克隆中增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达,荧光定量PCR(qRT-PCR)检查MAGE-A3在B16细胞中的转录。结果:pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核质粒转染B16细胞后筛选得到阳性克隆,可见融合蛋白表达产生明亮的绿色荧光,qRT-PCR可检测到MAGE-A3 mRNA的转录。结论:pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核质粒通过脂质体法能有效转染,并在B16稳定表达,成功建立了MAGE-A3肿瘤细胞模型。
- 李宁吉晓滨谢景华刘启才
- 关键词：真核载体基因转染绿色荧光蛋白
- 妊娠早期小鼠2,3,7,8-四氯苯并对二噁英暴露抑制生殖器官ERα表达
- 2013年
- 目的研究2，3，7，8-四氯苯并对二噁英（TCDD）暴露对生殖激素和其受体的影响。方法NIH小鼠妊娠早期第1—8天、胚胎着床前第1—3天和着床后第4—8天灌胃0、2、50和100ng／kg剂量TCDD，妊娠第9天测定雌激素和孕激素；称取卵巢和子宫重量；取相关组织观察组织病理学变化，并采用免疫化学方法观察芳香碳氢化合物受体（AhR）和雌激素受体（ERa）在子宫、卵巢和输卵管组织的分布。结果与正常组比较，各剂量不同时间段处理组小鼠血清雌二醇（E2）水平升高，但未达到显著水平（P〉0．05）；孕酮（PG）水平在不同剂量各时间段处理组均显著下降（P〈0．05，P〈0．001，P〈0．001）；子宫和卵巢重量降低，以50和100ng／kg剂量各时间段处理组显著（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．001）；组织AhR和ER表达有剂量依赖的改变，表现为生殖器官组织AhR细胞阳性随暴露浓度提高而增强，ER细胞阳性随浓度提高而减弱。结论TCDD通过细胞AhR介导引起性腺组织的ERa表达下调，进而降低孕激素合成和分泌，最终导致妊娠早期卵巢和子宫重量的下降，是强烈妊娠抑制的机制。
- 黄莉刘寒英李雯丘剑峰邓小亮王维华
- 关键词：NIH小鼠生殖器官
- 大鼠GCLC基因5’-上游调控区域(-876～+1)的3个E-box元件功能分析
- 2014年
- 目的:GCLC基因表达调控有助于在分子水平了解GSH变化的机制,对进一步探索机体抗氧化失衡的机制有重要意义。本实验主要研究GCLC基因上游调控区域(-876^+1)三个相邻E-box元件的作用及探讨E-box元件组合的基因转录作用机制。方法:利用PCR定点缺失法构建多种组合的缺失E-box元件的GCLC上游启动子序列的报告基因载体。将所构建的载体在脂质体介导下瞬时转染大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(L2细胞),通过比较转染后细胞的荧光素酶活性,分析E-box元件对GCLC基因转录活性的影响。结果:成功构建出多组定点缺失E-box元件的GCLC-Luc基因。在大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞中转染缺失了E-box的GCLC-Luc组较转染GCLC-Luc组均有明显升高(P均<0.05)。结论:三个E-box元件(-804^-779,-729^-724,-590^-585)在GCLC基因的基础状态下的转录表达中都起到一定的抑制作用,可能以转录因子及元件复合物形式抑制GCLC基因的转录调控。此结果揭示GCLC基因上其他E-box元件之间也可能存在着相互作用方式,而非简单的单独作用。
- 蔡磊黄楚琴李冰
