文章研究了经典名方程氏蠲痹汤(Cheng Shi Juan Bi Tang,CSJBT)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠的治疗作用。实验选取SD大鼠,采用弗氏完全佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)建立AA大鼠模型,实验设立正常组、模型组、雷公藤多苷(glycosides of tripterygium wilfordii,GTW)组(0.01g/kg)、CSJBT 3个剂量组(分别为2.55、5.10、10.20g/kg)共6个组,考察CSJBT给药治疗14d后,其对AA大鼠足肿胀度、脏器指数和血清免疫球蛋白水平的影响,并采用HE染色法观察AA大鼠踝关节组织的形态学变化。结果显示CSJBT可缓解AA大鼠关节肿胀,降低血清Ig G水平,改善其关节组织的病理学变化,表明CSJBT对AA大鼠具有较好的治疗作用。
以右旋糖酐酶产生菌棘孢青霉F1001基因组为模板反转录合成右旋糖酐酶的c DNA(dex),基因全长1 866 bp,根据毕赤酵母密码子偏好性优化dex序列获得优化右旋糖酐酶基因(opt-dex),分别构建dex-p PICZαA和opt-dex-p PICZαA重组质粒,电击转入毕赤酵母X33中构建重组子。通过蓝色右旋糖酐T-2000平板以及摇瓶发酵筛选获得产右旋糖酐酶的重组酵母菌株。重组酶的酶学性质分析显示,重组酶分子质量65 k Da、最适p H 5.0、最适温度35℃,专一作用于α-1,6糖苷键。在摇瓶水平上对重组毕赤酵母表达条件进行优化,优化培养条件为培养温度25℃、初始p H 5.0、每24 h甲醇添加量1%(体积分数)、每24 h山梨醇添加量5 g/L、吐温-80添加量4 g/L、摇瓶装液量50 m L/500 m L锥形瓶,优化后的重组右旋糖酐酶分泌表达酶活力提高到240.74 U/m L。重组酵母X33是一株适合外源表达棘孢青霉右旋糖酐酶基因的工程菌,该重组酶可替代棘孢青霉右旋糖酐酶直接应用于工业生产催化制备右旋糖酐。
