贵州医科大学基础医学院生物学教研室
- 作品数：12 被引量：33H指数：3
- 相关作者：王吉平更多>>
- 相关机构：中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所更多>>
- 发文基金：贵州省自然科学基金博士科研启动基金贵州省社会发展科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 致倦库蚊Cecropin基因家族的比较和系统发育分析被引量：2
- 2016年
- 利用生物信息学方法比较分析了致倦库蚊Cecropin家族4成员的基因结构、氨基酸序列、蛋白理化特性,预测蛋白空间结构,并基于7种昆虫绘制分子进化树,随后使用RT-PCR方法获取致倦库蚊Cecropin家族4成员的c DNA。结果表明：致倦库蚊Cecropin家族基因有两条正向编码,两条反向编码,长度为330~544 bp,由2个外显子和1个内含子构成;氨基酸序列长度为59~61 aa,具有两条基序和多个保守位点;编码的蛋白理论分子量为6 284.6~6 619.0 k D,p I值为10.36~11.24,亲水性平均系数为0.393~0.551;蛋白预测的二级结构和三级结构结果基本一致,它们具有1个信号肽结构域和1个催化结构域,结构域主要由α-螺旋构成;7种昆虫的Cecropin蛋白进化关系与物种进化关系基本一致,并以“目”或“亚目”为单位分别聚类,CPIJ005108与致倦库蚊Cecropin祖先基因最相似。本研究的分析结果可为蚊科Cecropin结构和功能的研究提供有价值的信息。
- 赵文静张晶张春林翟素珍王吉平
- 关键词：致倦库蚊CECROPIN基因家族生物信息学
- 家蝇抗菌肽Sarcotoxin Ⅱ家族基因的克隆及原核表达条件优化
- [目的]克隆家蝇抗菌肽sarcotoxin Ⅱ 家族基因S50、S52、S88、S90,对其进行原核表达并优化表达条件.[方法]1.从家蝇转录组库中克隆差异表达基因sarcotoxin Ⅱ 家族基因S50、S52、S88...
- 王兵田川张雪婷黄伟康石玉玲杨丽萍覃海姚杨修江帆彭建朱贵明尚小丽王涛吴建伟
- 关键词：家蝇抗菌肽原核表达
- 球孢白僵菌Bb_bm01菌株PacC基因突变体的构建及其毒力和孢子萌发率的测定被引量：1
- 2016年
- 通过敲除球孢白僵菌(Beauveria bassiana)菌株bm01的PacC基因,研究了PacC基因敲除对球孢白僵菌毒力和分生孢子萌发速率的影响。利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的转化方法转化Bb_bm01,通过同源重组敲除Bb_bm01的PacC基因,筛选ΔPacC基因敲除菌株,获得了遗传稳定的ΔPacC基因敲除菌株。通过毒力测定,对比了野生菌株和ΔPacC基因敲除菌株对家蚕和大蜡螟毒力的差异,发现ΔPacC基因敲除菌株对家蚕和大蜡螟毒力都减弱,差异具有统计学意义(p<0.01),表明在Bb_bm01菌株中的PacC基因与它的致病性相关;另外,比较ΔPacC基因敲除菌株与野生型菌株Bb_bm01在SDB液体培养基中的孢子萌发率,发现ΔPacC基因敲除菌株孢子萌发明显减慢,表明PacC基因参与调控孢子萌发。
- 翟素珍王吉平陈晶晶卢海泉王四宝张春林
- 关键词：球孢白僵菌孢子萌发
- 美洲大蠊提取物对大鼠皮肤创伤修复机制探讨被引量：13
- 2018年
- 目的初步探讨美洲大蠊粗提物(PAE)对大鼠皮肤创伤修复的分子机制。方法 60只SD大鼠随机分为5组:模型组、京万红组、PAE高(250 mg/g)、中(125 mg/g)、低(62.5 mg/g)组,分别于治疗后第3、7、14天处死,观察创面情况,计算创面愈合率;HE染色观察组织生长情况;Masson染色观察胶原纤维生长情况;免疫荧光检测巨噬细胞(CD68)阳性细胞数;Western blot法检测血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达。结果PAE高、中、低各组的创面愈合率均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);PAE组之间比较,PAE中组均高于PAE高组和PAE低组,差异有统计学意义(P<0.05)。在治疗后的第3、7天,与模型组比较,其余各组创面肉芽组织中胶原纤维、CD68、VEGF、bFGF含量增加,差异有统计学意义(P<0.05);PAE高中低组之间,PAE中组含量均高于PAE高组和PAE低组,差异有统计学意义(P<0.05)。在第14天,与模型组比较,其余各组创面肉芽组织中胶原纤维、CD68、VEGF、bFGF含量均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在大鼠创伤模型上,PAE可通过在创伤修复的不同阶段影响胶原纤维、CD68、VEGF、bFGF表达含量,从而加快创口的愈合。
- 魏操翟素珍邰胜燕肖永珊张春林
- 关键词：美洲大蠊创伤修复CD68BFGF
- 美洲大蠊几丁质酶基因的原核表达及蛋白纯化被引量：3
- 2016年
- 昆虫几丁质酶是昆虫几丁质代谢不可或缺的关键酶类。本研究旨在构建美洲大蠊几丁质酶Pa Cht1基因原核表达载体,纯化并鉴定Pa Cht1重组蛋白,为后续酶活等测定奠定基础。定向克隆Pa Cht1基因成熟肽序列至原核表达载体pET32a(+)上,将构建成功的pET32a-Cht1重组表达质粒导入大肠埃希菌Rosetta中,分别对诱导剂IPTG浓度和诱导时间进行优化,确定最佳诱导浓度和诱导时间,并对表达产物进行可溶性分析。表达产物经镍离子柱纯化后通过Western Blot鉴定。结果表明,美洲大蠊几丁质酶Pa Cht1成熟肽基因编码区长1 083 bp,编码360个氨基酸。最佳诱导浓度和诱导时间分别为0.2 mmol/L和4 h。所得重组蛋白大小约60 k D,与预期结果大小一致,重组蛋白主要以包涵体的形式存在。Western Blot鉴定重组蛋白可与6×His-tag单克隆抗体特异性结合。说明成功构建了原核表达载体pET32a-Cht1,并诱导表达获得了重组几丁质酶蛋白。
- 李宏伟王吉平张堤张春林赵文静张晶翟素珍
- 关键词：美洲大蠊几丁质酶基因原核表达蛋白纯化
- 两种植物精油对白纹伊蚊的熏杀及酯酶活性的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:测定珊瑚姜精油和樟树叶精油对白纹伊蚊雌性成蚊的熏杀活性及熏杀蚊虫的作用机理。方法:用水蒸汽蒸馏法提取珊瑚姜块茎精油和樟树鲜叶精油,三角瓶法测定两种精油对白纹伊蚊雌性成蚊的熏杀活性,微板法检测两种精油对白纹伊蚊乙酰胆碱酯酶(ACh E)和非特异性酯酶(NSE)活性的影响。结果:珊瑚姜精油和樟树叶精油对白纹伊蚊24 h熏蒸LC50分别是80.208μg/cm3、20.709μg/cm3;在78.696μg/cm3和31.976μg/cm3剂量下,珊瑚姜精油和樟树叶精油对白纹伊蚊的KT50分别为35.759 min和6.341 min;两种植物精油对白纹伊蚊ACh E均有抑制作用,酶活性抑制率分别为29.97%和4.03%;两种精油对白纹伊蚊的NSE有促进作用,酶活性增长率分别为21.55%和18.62%。结论:樟树叶精油更适宜作为植物源灭蚊产品的基础材料。
- 周长荣温小军刘磊
- 关键词：伊蚊属非特异性酯酶
- 致倦库蚊几丁质合成酶基因CqCHS1和CqCHS2的表达与分析被引量：3
- 2016年
- 利用生物信息学方法比较分析致倦库蚊几丁质合成酶CqCHS1、CqCHS2的基因结构、氨基酸序列、蛋白理化特性,预测蛋白跨膜结构和空间结构,并基于6种昆虫绘制分子进化树,随后使用Real-time PCR方法探测CqCHS1、CqCHS2基因在致倦库蚊不同发育时期的表达谱。结果显示:CqCHS1、CqCHS2基因长度分别为39 206 bp和17 920 bp,分别包含10个和9个外显子;CqCHS1、CqCHS2氨基酸序列长度分别为1 579 aa和1 214 aa;理论分子量分别为179.581 k D和138.816 k D,等电点分别分别为6.21和8.28,亲水性平均系数分别为-0.076和0.101;预测跨膜次数分别为17次和13次;二者具有相近的二级结构组成和三级结构。进化树显示,6种昆虫CHS1和CHS2分别聚类,形成两大分支。它们CHS的同源性与物种的亲缘关系基本一致。Real-time PCR结果显示,CqCHS1在卵期呈低表达,幼虫时期表达增高,到蛹期达到峰值,成虫期表达量降低。CqCSH2在幼虫期表达量最低,卵和蛹期表达量较低且差异不大,成虫期表达量最大。本研究的结果可为深入了解致倦库蚊的发育情况提供有价值的信息,并为围绕几丁质代谢为基础的杀虫剂研制,提供潜在的药物靶点。
- 赵文静张春林翟素珍孙谦张晶
- 关键词：致倦库蚊几丁质合成酶基因表达模式生物信息学
- 医学实验技术专业本科生开展细胞生物学开放性实验的探索被引量：4
- 2017年
- 在医学实验技术专业本科生中,以日用化学品对蚕豆等植物的根尖细胞有丝分裂的影响为题,进行细胞生物学开放性实验的教学实践。探讨实验选题与课程的相关性,统筹安排实验实施,课程教师和导师双身份带教,科研和教学实验室共开放。细化教学环节,分析教学效果,提出教学反思,为该专业开放性实验教学模式的建立进行有益探索,推动实验教学改革的发展。
- 寻慧张迎春杨明张庆海修江帆
- 关键词：细胞生物学实验教学有丝分裂
- 彗星实验方法的优化及影响因素的分析
- 2024年
- 目的为了更有效地检测细胞DNA损伤,对彗星实验的影响因素进行优化并建立阳性对照。方法以传统碱性彗星实验为基础,对制胶方法、凝胶浓度、琼脂糖溶剂、裂解时间、细胞密度和电泳电压加以优化。以过氧化氢(H_(2)O_(2))作为DNA损伤诱导剂诱导HL-60细胞作为该实验的阳性对照。结果优化后的实验结果显示,制胶方法由三步法进步为两步法,以PBS为琼脂糖溶剂,0.8%正常熔点琼脂糖制备底层胶,0.7%低熔点琼脂糖与细胞悬液混合作为第二层胶,制胶效果好,操作更简单省时,较好地解决了脱胶问题。裂解1 h,1 V/cm电压电泳,获得了具有代表性的彗星图像,结果易于判读,能有效避免假阳性结果。并对不同浓度H_(2)O_(2)诱导的HL-60细胞DNA损伤情况进行比较,成功建立了彗星实验的阳性对照。结论与传统方法相比,优化后的彗星实验方法成本更低,更简单、快速、准确,重复性也更好,能够快速检测细胞中的DNA损伤。
- 范南英张鹏
- 关键词：彗星实验HL-60
- 家蝇U93原核表达、多克隆抗体制备及功能初探
- [目的]原核表达家蝇SVWC 超家族基因U93,探究其功能.[方法]1.从家蝇转录组库中克隆差异表达基因U93;采用原核表达法,表达并处理包涵体蛋白,通过His·Bind 纯化试剂盒获得原核表达蛋白.2.将原核表达蛋白加...
- 王兵黄伟康马素贞姚杨覃海修江帆王涛彭建朱贵明尚小丽吴建伟
- 关键词：家蝇抗菌肽原核表达抑菌活性
