吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室 作品数:74 被引量:80 H指数:5 相关作者: 钱晶 陈晓峰 刘楠楠 丁伟 更多>> 相关机构: 长春中医药大学临床医学院 吉林农业大学动物科学技术学院 吉林农业科技学院动物科技学院预防兽医学吉林省重点实验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 吉林省科技发展计划基金 中央高校基本科研业务费专项资金 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 更多>>
新城疫病毒样颗粒对树突状细胞活化的影响 新城疫病毒样颗粒(NDV VLPs)是由基质蛋白(M)为病毒骨架,装配血凝素-神经氨酸酶和/或融合蛋白等。已有研究表明,NDV VLPs 能诱导机体产生特异性体液和细胞免疫应答。然而,关于NDV VLPs 如何激活天然免... 钱晶 欧阳伟 王晶宇 王晓丽 夏兴霞 诸玉梅 王永山 丁壮关键词:新城疫病毒 病毒样颗粒 树突状细胞 活化 天然免疫 蜱传脑炎病毒E蛋白D Ⅲ的表达与抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量:1 2022年 利用PCR技术扩增蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)E蛋白第三结构域(Domain Ⅲ,D Ⅲ)基因并将其插入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-TBEV-E-D Ⅲ。将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导目的蛋白表达,利用镍离子金属螯合亲和层析介质(Ni-NTA)纯化目的蛋白。将纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立TBEV抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组蛋白TBEV E-D Ⅲ在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,蛋白表达的最佳条件为30℃、0.6 mmol/L IPTG诱导6 h;TBEV抗体间接ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为1 mg/L,该方法可特异性检测TBEV阳性血清,与寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)、日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)和西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)阳性血清无交叉反应,批内和批间变异系数(CV)均小于10%。结果表明,成功表达并纯化了TBEV E-D Ⅲ重组蛋白,以其为包被抗原建立的TBEV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。 张梦瑶 焦翠翠 黄培 金宏丽 白玉洁 龚志远 宋雨濛 李媛媛 张海丽 王化磊关键词:蜱传脑炎病毒 E蛋白 间接ELISA 吉林省四平市周边地区莱姆病流行情况调查及优势菌株外膜蛋白C的表达 2017年 为了解吉林省四平市周边地区伯氏疏螺旋体流行情况,本试验于2017年5-7月分别采集四平市周边地区蜱虫样品共25份。通过筛选扩增伯氏疏螺旋体外膜蛋白C(OspC)基因片段的通用引物、优化反应条件后建立用于检测蜱体内伯氏疏螺旋体的PCR方法。从25份样品中分离到8份阳性样品(阳性率约为32%),经过测序比对发现其基因型均为Borrelia burgdorferi;并以分离到的Borrelia burgdorferi DNA为模板,PCR扩增OspC基因,构建重组质粒pET-30a-OspC,以IPTG诱导蛋白表达,为建立伯氏疏螺旋体ELISA检测方法奠定了基础。 冯嘉轩 杨莹莹 李俊姣 阎慧关键词:莱姆病 伯氏疏螺旋体 流行病学 新城疫病毒mRNA疫苗的构建及鉴定 2023年 信使RNA(messenger RNA,mRNA)的核酸疫苗是近年来兴起的一种新型疫苗技术。新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的血凝素-神经氨酸酶(HN)是NDV的主要保护性抗原,可诱导机体产生中和抗体,是新城疫(Newcastle disease,ND)新型疫苗研发的重要靶点。本研究将NDV HN基因连接到含有T7启动子的载体中,并在其5′UTR和3′UTR分别引入人-β球蛋白的非编码区域以增强转录的mRNA稳定性,经质粒线性化、体外转录、cap加帽处理、mRNA纯化制备NDV HN-mRNA,将其转染至HEK-293T细胞中验证NDV HN-mRNA的表达效果,Western blot和免疫荧光试验结果表明构建mRNA候选疫苗可在HEK-293T细胞中高效表达抗原蛋白,为ND新型疫苗的研发提供新的思路。 崔苗苗 陈凯楠 李金斗 丁佳欣 陈铭桦 冯嘉轩 周铁忠 舒秀伟 刘晓雷 丁壮关键词:新城疫病毒 HN蛋白 体外转录 传染性法氏囊病毒VP2蛋白嵌合新城疫病毒样颗粒的构建和鉴定 2022年 将传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus, IBDV)强毒株的保护性蛋白VP2替换新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白胞外域部分,利用杆状病毒表达系统,构建了含有IBDV候选抗原表位VP2蛋白的重组杆状病毒rBV-VP2,并通过间接免疫荧光试验鉴定杆状病毒蛋白表达正确。rBV-VP2与NDV-HN、NDV-F、NDV-M组装成病毒样颗粒(cVLPs),形成含有IBDV候选抗原表位的IBD-ND二联病毒样颗粒(IBD-ND cVLPs),利用Western blot鉴定cVLPs各组分蛋白,证明IBD-ND cVLPs各组分组装正确。IBD-ND cVLPs的构建可为我国养禽业提供一种绿色、安全且可一针多防的IBD-ND二联病毒样颗粒疫苗候选株。 邵亚男 冯嘉轩 李金斗 郭春红 丁佳欣 陈铭桦 丁伟 单春晖 张頔 丁壮关键词:新城疫病毒 传染性法氏囊病毒 VP2蛋白 病毒样颗粒 羊传染性脓疱病毒ORF120蛋白以剂量依赖性方式抑制宿主细胞非POU结构域八聚体结合蛋白(NONO)的表达 2023年 羊传染性脓疱病毒(ORFV)是重要的人兽共患病病原,能够通过劫持宿主蛋白等多种策略逃避机体的抗病毒免疫反应,导致重复感染的发生。非POU结构域八聚体结合蛋白(NONO)是一种多功能核蛋白,参与mRNA剪切、DNA损伤修复、肿瘤发生以及炎症反应等多种生物学过程。本研究首先利用酵母双杂交、免疫共沉淀(Co-IP)等技术证实ORF120蛋白与宿主蛋白NONO存在相互作用。借助于激光共聚焦显微镜观察病毒ORF120蛋白和宿主NONO蛋白的定位分布,发现ORF120蛋白与NONO蛋白在细胞核内存在共定位,进一步证实ORF120蛋白和NONO蛋白存在互作。此外,利用Western blot方法证实ORF120蛋白和NONO蛋白之间存在相互抑制作用,且呈剂量依赖性。上述结果表明,ORF120蛋白与宿主NONO蛋白存在剂量依赖性的相互抑制作用,该结果将为更好地理解ORFV免疫逃逸分子机制及开发新的抗病毒手段提供重要依据。 于昭辉 周艳龙 吕丽君 刘兴源 徐梦实 方梓煜 李卓梅 关继羽 高丰 赵魁关键词:羊传染性脓疱病毒 基因Ⅱ、Ⅶ型二价新城疫病毒样颗粒的制备和鉴定 被引量:6 2018年 将基因Ⅶ型新城疫NA-1株F、HN基因的胞外域与基因Ⅱ型新城疫Lasota株F、HN基因的胞内域及跨膜域进行融合,并命名为rNA-1 F/HN。利用昆虫杆状病毒表达系统构建含有新城疫LaSota株M、F、HN等3个结构基因及rNA-1F、rNA-1 HN基因的重组杆状病毒rBV-LaSota M、rBV-LaSota F、rBV-rNA-1 F、rBV-LaSota HN、rBV-rNA-1 HN。将几种重组杆状病毒共感染Sf9细胞96h后收取上清,经超速离心及蔗糖密度离心纯化病毒样粒子(virus-like particles,VLPs),并利用Western blot方法和透射电子显微镜技术检测,结果显示目的蛋白均正确表达且组装成与野生型NDV形态大小相似的VLPs。结果表明:成功制备了新城疫标准疫苗株(LaSota株)及流行强毒株(NA-1株)二价NDV VLPs,为当前新城疫的防控提供新策略。 丁佳欣 李金斗 刘亚林 张国军 姜翠翠 徐小洪 钱晶 于喜冰 吴金 尹仁福 丁壮关键词:昆虫杆状病毒表达系统 鸡毒支原体TM-1蛋白嵌合新城疫病毒样颗粒的构建及鉴定 被引量:1 2021年 鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)感染引起的禽类的慢性呼吸道病(chronicrespiratory disease,CRD)与新城疫(Newcastle disease,ND)是严重危害禽类的两种重要疾病,可呈并发或继发感染,给养禽业造成巨大的经济损失。因此,研制安全有效、免疫程序简便的ND-CRD二联疫苗显得极为重要。本研究将MG国际参考株MG R(low)株的保护性蛋白TM-1采取以替换新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)NDV-HN胞外域的方式与我国NDV流行株(基因Ⅶ型)的HN、F蛋白共同嵌合至病毒样颗粒(VLPs)表面,使其表面展示3种结构蛋白MG-TM-1、NDV-HN和NDV-F。经鉴定,间接免疫荧光显示该cVLPs各组分蛋白均正确表达;Western blot结果显示,该cVLPs可与NDV M、NDV F、NDV HN、MG TM-1的特异性阳性血清发生反应;透射电镜观察可见大小约为100nm的粒子,表面展示纤突结构,呈现典型的病毒形态,与野生型NDV形态相似,最终成功构建嵌合型病毒样颗粒MG-ND cVLPs。本试验成功制备的MG-ND cVLPs为研制新型ND与CRD二联疫苗提供候选疫苗,并为当前NDV与MG共感染的防控提供新策略。 辛梅 张頔 李金斗 丁佳欣 于喜冰 徐小洪 丁伟 邵亚男 单春辉 丁壮关键词:新城疫病毒 鸡毒支原体 病毒样颗粒 基于Fh010935蛋白的绵羊肝片吸虫感染间接ELISA检测方法的建立及初步应用 2022年 目的 利用肝片吸虫重组蛋白Fh010935建立绵羊肝片吸虫感染间接ELISA检测方法。方法 通过对抗原包被量、血清稀释度、血清孵育时间、封闭剂种类、二抗稀释倍数及孵育时间、TMB底物溶液反应时间等条件进行优化,建立间接ELISA检测方法,评价其敏感性、特异性和重复性,并对吉林和内蒙古地区临床血清样品进行检测。结果 ELISA优化试验确定的抗原最佳包被浓度为0.25μg/孔,血清稀释度为1∶400,血清孵育时间为90 min,封闭剂为1%BSA,二抗稀释倍数为1∶5000,二抗孵育时间为75 min,TMB底物溶液反应时间为15 min。优化各反应条件后建立的ELISA检测方法敏感性达到1∶800,与羊捻转血矛线虫、双腔吸虫、新孢子虫阳性血清无免疫交叉反应,批内批间变异系数均<6%。对吉林省某地区临床血清样品和粪便样品各36份进行ELISA和病原学检测,两种方法一致性为96%。对内蒙古地区90份临床血清样品进行检测,阳性率为18.9%。结论 以肝片吸虫重组蛋白Fh010935为包被抗原建立的检测绵羊肝片吸虫感染的间接ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性,可用于绵羊肝片吸虫病的快速检测及流行病学调查。 段佳慧 张楠 刘少雄 李建华 宫鹏涛 王晓岑 李新 于磊 张西臣 唐博关键词:肝片吸虫 间接ELISA 兽医公共卫生发展趋势及专业教育 被引量:8 2017年 兽医公共卫生(veterinary public health,VPH)是社会文明发展到一定阶段的产物,它是利用一切有关人类和动物健康的知识、活动及物质资源,来保障社会公共卫生与人类健康的一门综合性应用学科。兽医公共卫生是国家公共卫生体系的重要组成部分,是兽医学科与医学、食品科学、环境科学、公共卫生等学科交叉后的新兴学科,是社会发展和公共卫生需求牵引兽医学的扩展, 柳增善 胡盼 马春峰 卢士英 任洪林 李岩松关键词:兽医公共卫生 专业教育