广州中医药大学临床药理研究所DME中心
- 作品数：26 被引量：180H指数：9
- 相关作者：张大鹏郭俊和周莹更多>>
- 相关机构：广州医学院基础学院中山大学中山医学院生物化学教研室中山大学中山医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生环境科学与工程更多>>
- NF-κB基因RNA干扰质粒的构建与鉴定
- 2012年
- 目的构建转录因子NF-κB的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究NF-κB参与的细胞信号通路及以其为靶点的基因治疗提供稳定转染的RNAi质粒。方法设计针对NF-κB的shRNA特异性序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer 1.0-U6表达载体,EcoRⅠ和ApaⅠ双酶切及DNA测序鉴定重组克隆;脂质体转染RNAi重组载体至前列腺癌细胞PC-3后,Western blot分析各组NF-κB蛋白表达水平。结果双酶切和DNA测序证实shRNA正确插入pSilencer 1.0-U6质粒;Western blot结果显示与空质粒对照组比较NF-κB转染组细胞NF-κB表达明显下调。结论成功构建人NF-κB基因RNAi质粒,为研究NF-κB参与的细胞信号通路提供了稳定转染细胞的干扰质粒,为靶向NF-κB的基因治疗提供了有力工具。
- 方淑环龚青
- 关键词：核因子-ΚBRNA干扰质粒
- HIF-1α基因RNA干扰质粒在胃癌细胞中的构建与鉴定
- 2012年
- 目的:构建转录因子HIF-1α表达的RNA干扰(RNA interference,RNAi)质粒,为研究HIF-1α参与的细胞信号通路及以HIF-1α为靶点的基因治疗提供稳定转染细胞的RNAi.方法:选取HIF-1α基因的19nt特异性序列,设计针对HIF-1α的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer1.0-U6表达载体中,利用EcoRⅠ和ApaⅠ双酶切和DNA测序鉴定重组克隆.低氧条件下,将包含HIF-1α基因RNAi序列的重组载体转染人胃癌细胞SGC-7901,转染48h后,收集细胞裂解液,Western blotting分析低氧条件下对照组与转染组HIF-1α蛋白的表达水平.结果:双酶切证实shRNA插入pSilencer1.0-U6质粒,DNA测序证实插入的序列正确;HIF-1α基因RNAi质粒转染胃癌细胞SGC-7901成功;Western blotting结果显示与空质粒对照组比转染组细胞HIF-1α表达下调.结论:成功构建人HIF-1α基因RNAi质粒,为研究HIF-1α参与的细胞信号通路提供了稳定转染细胞的干扰质粒.同时,阻断HIF-1α的信号通路将为肿瘤基因治疗提供一个较好的靶点,研究结果为以HIF-1α为靶向的基因治疗提供了有利工具.
- 龚青方淑环高国全
- 关键词：低氧诱导因子1ΑRNA干扰胃癌
- 人参皂苷Rg1对Aβ_(25-35)诱导的神经细胞核因子-κB活化的影响被引量：21
- 2007年
- 目的探讨人参皂苷Rg1拮抗β淀粉样蛋白(Aβ)、保护神经细胞的作用是否与核因子κB(NF-κB)活化机制变化有关。方法分别以原代培养的大鼠海马神经元和星形胶质细胞为靶标建立Alzheimer病(AD)细胞模型。采用四唑盐显色(MTT)法检测细胞活力,进行Aβ25-35造模浓度、时间以及人参皂苷Rg1预处理最适宜浓度的选择。经Aβ25-35和Rg1干预后,用激光共聚焦显微镜检测分析FITC/PI双重标记的NF-κB在细胞内的激活程度,结合形态学观察分析人参皂苷Rg1对以上两种细胞的保护作用。结果40μmol.L-1的Aβ25-35作用24h后可激活原代培养星形胶质细胞的NF-κB(P<0.01),下调原代培养神经元的NF-κB活性(P<0.01)。2μmol.L-1的人参皂苷Rg1能明显提高神经元的NF-κB活性(P<0.01),减弱星形胶质细胞的NF-κB活性(P<0.01)。同时结合形态学观察和细胞活力检测发现,人参皂苷Rg1对两种细胞都有保护作用。结论人参皂苷Rg1通过启动神经元中NF-κB活化、下调星形胶质细胞的NF-κB活性,从两方面发挥其保护神经细胞的作用,从而有可能达到减缓AD发病进程的效果。
- 陈云波张大鹏冯梅王奇程淑意梁伟雄温泽淮
- 关键词：人参皂苷RG1阿尔采末病Β淀粉样蛋白核因子ΚB
- 优化石菖蒲组份配伍对谷氨酸致PC12细胞损伤的保护作用
- 目的:优化石菖蒲活性组分β-细辛醚和丁香酚配伍对谷氨酸致PC12细胞损伤模型的保护作用。方法:采用体外培养PC12细胞的方法,用谷氨酸致PC12细胞损伤作为模型,设立正常对照组、谷氨酸损伤模型组、β-细辛醚单体组、丁香酚...
- 钟言曾志杰龚玉滢陈晓燕陈云波魏刚程淑意周莹
- 关键词：Β-细辛醚丁香酚谷氨酸PC12细胞
- 不同治法方药对快速老化小鼠学习记忆功能的影响被引量：4
- 2009年
- 目的:观察不同治法方药对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8学习记忆功能的干预作用。方法:7月龄快速老化亚系SAMP8小鼠分为痴呆模型组、脑复康组、六味地黄汤组、四君子汤组、归脾汤组和当归芍药散组等6个组;15只抗快速老化亚系SAMR1作为正常对照组。给药4周后,进行为期6天的Morris水迷宫测试。结果:与正常对照组相比,SAMP8模型组的逃避潜伏期时间明显增加(P<0.05),游泳速度则明显下降(P<0.05)。与模型组相比,四君子汤组、六味地黄汤组、归脾汤组的逃避潜伏期时间均明显减少(P<0.05,P<0.01),四君子汤组的游泳路程明显缩短(P<0.05),脑复康组和当归芍药散组的逃避潜伏期时间较模型组有减少趋势。结论:8月龄SAMP8小鼠的学习记忆能力明显下降,是理想的痴呆动物模型;六味地黄汤、四君子汤、归脾汤均可以明显改善SAMP8小鼠的学习记忆能力。
- 王奇陈云波冯炯鹿俊磊程淑意温泽淮梁伟雄
- 关键词：归脾汤四君汤当归芍药散快速老化小鼠学习记忆
- 优化石菖蒲组份配伍对谷氨酸致PC12细胞损伤的保护作用
- 2017年
- 目的探讨优化石菖蒲组份配伍对谷氨酸致PC12细胞损伤的保护作用。方法对PC12细胞进行体外培养,使用的模型是谷氨酸促使PC12细胞出现损伤,将其分成β-细辛醚、丁香酚不同浓度配伍组及β-细辛醚单体组、丁香酚单体组、谷氨酸损伤模型组、正常对照组进行筛选试验,对损伤PC12细胞活力(OD值)变化情况进行测算,使谷氨酸促使PC12细胞出现损伤保护作用的丁香酚配伍与β-细辛醚的最佳配比进行有效的筛选。结果取最低浓度考虑β-细辛醚单体和丁香酚单体的起效浓度分别为49μmol/L和14μmol/L。本次结果显示细胞OD值9μmol/L∶14μmol/L组>9μmol/L∶2μmol/L组>49μmol/L∶0.5μmol/L组>49μmol/L∶14μmol/L组>9μmol/L∶0.5μmol/L组>1.9μmol/L∶14μmol/L组>49μmol/L∶2μmol/L组>正常对照组>β-细辛醚单体组>1.9μmol/L∶2.9μmol/L组>1.9μmol/L∶0.5μmol/L组>丁香酚单体组>谷氨酸损伤模型组,OD值分别为(1.88±0.04)、(1.80±0.05)、(1.80±0.03)、(1.79±0.07)、(1.79±0.02)、(1.78±0.03)、(1.76±0.05)、(1.72±0.07)、(1.72±0.06)、(1.72±0.04)、(1.71±0.03)、(1.68±0.08)、(1.65±0.05)。除丁香酚单体组,其余各组OD值与谷氨酸损伤模型组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论β-细辛醚与丁香酚配伍对谷氨酸致PC12细胞损伤保护作用的较佳的浓度配比可能在9μmol/L∶0.5μmol/L^9μmol/L∶2μmol/L之间。
- 钟言曾志杰龚玉滢陈晓燕陈云波魏刚程淑意周莹
- 关键词：Β-细辛醚丁香酚谷氨酸PC12细胞
- 基于诊断相似度评价的强直性脊柱炎古代医案分析被引量：3
- 2013年
- 【目的】通过对古医籍中强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)相关病案报告进行基于典型症状和病史的诊断相似度评价,以期在提高古代病案诊断正确性的基础上,对古代中医治疗AS的临证经验进行挖掘。【方法】以AS病名源流梳理得到的17个相关中医病症名为检索词,检索《中华医典》中的医案类文献,对医案诊断相似度进行评价,对经过诊断相似度评价的病因病机、方药等诊疗经验进行总结。【结果】按症状词共检索出8 053条古文献条文,医案类文献275例,具有AS的3大主症之一的医案共113例,符合纳入标准的古医案共26例。26例医案分析结果显示,AS的病机特点为本虚标实,以肾督亏虚,气血不足为本,风寒湿邪为标,治法以补虚祛邪、活血化瘀为主。【结论】古代AS的中医典籍普遍存在重理论探讨、轻诊疗证据的情况,且记录简单、不规范;基于诊断相似度评分与筛选的古医案评价方法值得进一步深入研究。
- 郭新峰李冠海何羿婷温泽淮刘少南杨丽虹赵国青李晓彦
- 关键词：强直性脊柱炎古代医案
- 人参皂苷Rg1对淀粉样β蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的保护被引量：12
- 2006年
- 目的:观察人参皂苷Rg1对淀粉样β蛋白25～35诱导的海马神经元细胞损伤是否具有保护作用,并分析其作用机制。方法:实验于2004-03/2005-03在广州中医药大学临床药理研究所DME中心完成。①取新生24h清洁级SD大鼠,无菌环境下取出海马组织进行贴壁培养并以B27无血清培养基添加剂抑制非神经元细胞的生长。②海马神经元形态及细胞活力观察:细胞培养7d至分化成熟状态,然后被随机分为3组:人参皂苷Rg1预处理组(分为1,2,4,8,16μmol/L5个浓度组),首先每加入各浓度的Rg1(中国药品生物制品检定所提供,批号:0703-200221)预作用24h后,再加入40μmol/L淀粉样β蛋白25～35共孵育24h;模型组:每孔加入40μmol/L淀粉样β蛋白25～35作用24h;空白组:正常细胞培养用液;每组均为8孔。运用倒置显微镜进行海马神经元形态学观察,四甲基偶氮唑盐比色法法检测细胞活力,即吸光度(A值),该值越高说明细胞活力越强。③检测核因子κB活性:调整细胞悬液密度为2×108L-1,接种于6孔板(内置已用多聚赖氨酸包被的盖玻片),1mL/孔。随机分为5组(3孔/组):正常组,模型组,2,4,8μmol/L人参皂甙Rg1预处理组。细胞培养7d后,2,4,8μmol/L人参皂甙Rg1预处理组加终浓度为2,4,8μmol/L的人参皂甙Rg1预作用24h后,与模型组一起加40μmol/L淀粉样β蛋白,作用24h。激光共聚焦显微镜检测核因子κB在细胞内的激活程度,以图像分析仪计算核区荧光与胞浆区荧光比值,比值越高说明核因子κB活性越高。④计量结果差异比较采用单因素方差分析。结果:①神经元细胞形态:相差显微镜下可见人参皂甙Rg1预处理组细胞损伤相对较模型组轻,但较正常组严重。②海马神经元细胞活力:正常组和2,4μmol/L人参皂甙Rg1预处理组明显高于模型组(P<0.05),以4μmol/L人参皂甙Rg1预处理组最高;1,8,16μmol/L人参皂甙Rg1预处理组虽然也高于模型组,但差异不明显(P>0.05)。③�
- 张大鹏陈云波王奇程淑意梁伟雄温泽淮
- 关键词：淀粉样Β蛋白人参皂苷类NF-ΚB
- 人参皂苷Rg1对Aβ25-35诱导NG108-15凋亡信号通路的影响
- 目的探讨在以NG108-15细胞作为神经元代表、Aβ25-35(β-amyloid protein25-35)诱导凋亡的AD(Alzheimet’s Disease)细胞模型中,人参皂苷Rg1保护神经元的作用与NF-κB...
- 吴蕾陈云波王奇程淑意梁伟雄温泽淮
- 关键词：人参皂苷RG1Β-淀粉样蛋白凋亡信号通路
- 液相蛋白芯片技术及其在中医药研究中的应用被引量：3
- 2006年
- 以荧光微球为载体基质且有别于固相蛋白芯片的液相蛋白芯片技术,是美国纳斯达克上市公司Luminex于本世纪初研制出的后基因组时代的技术平台,通常用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析及蛋白质一蛋白质相互作用等研究,可广泛应用于生物医学包括中医药研究的各个领域。液相蛋白芯片具有灵活性好、灵敏度高、操作简单、通量大等特点,可进行细胞因子、激酶、肽类等的检测,并可用于中药复方和单体的药理学研究及有效方药和成分的筛选。
- 陈云波邓元江
- 关键词：液相蛋白芯片后基因组中医药现代化
