复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心
- 作品数：9 被引量：16H指数：2
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- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 添加活性马克斯克鲁维酵母对肉鸡生长性能、血清生化指标和肠道结构的影响被引量：3
- 2021年
- 本试验旨在研究添加活性马克斯克鲁维酵母对肉鸡生长性能、免疫器官指数、血清生化指标和肠道结构的影响.选用525只体重接近、健康的1日龄Arbor Acre肉鸡,公、母各半,随机分成5个处理组,每组7个重复,每重复15羽,对照组饲喂玉米豆粕基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加2.5×10^(10),3.75×10^(10),1.875×10^(11)和3.75×10^(11)CFU/kg的活性马克斯克鲁维酵母.结果表明:①与对照组相比,添加1.875×10^(11)CFU/kg活性马克斯克鲁维酵母能显著提高1~21日龄、22~42日龄、1~42日龄肉鸡的平均日采食量和平均日增重(P<0.05),显著降低22~42日龄、1~42日龄肉鸡的耗料增重比(P<0.05),添加3.75×10^(11)CFU/kg活性马克斯克鲁维酵母能显著提高22~42日龄肉鸡的平均日增重(P<0.05);②与对照组相比,添加不同水平活性马克斯克鲁维酵母对肉鸡免疫器官指数无显著影响;③与对照组相比,添加1.875×10^(11)CFU/kg活性马克斯克鲁维酵母能显著提高22日龄肉鸡血清中总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血糖含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.05),显著降低22日龄肉鸡血清中总胆固醇、尿酸(UA)和43日龄肉鸡血清中UA含量(P<0.05),添加3.75×10^(11)CFU/kg活性马克斯克鲁维酵母能显著提高22日龄肉鸡血清中TP、ALB含量(P<0.05);④与对照组相比,添加1.875×10^(11)CFU/kg活性马克斯克鲁维酵母提高了22日龄肉鸡血清中SOD活性(P<0.05);⑤与对照组相比,添加不同水平活性马克斯克鲁维酵母能显著提高43日龄肉鸡十二指肠绒毛高度、绒毛高度与隐窝深度比值(P<0.05),其中添加1.875×10^(11)CFU/kg活性马克斯克鲁维酵母能显著提高22日龄肉鸡十二指肠绒毛高度与隐窝深度比值、回肠绒毛高度、回肠绒毛高度与隐窝深度比值(P<0.05),显著提高43日龄肉鸡的空肠绒毛高度、空肠绒毛高度与隐窝深度比值、回肠绒毛高度与隐窝深度比值(P<0.05),添加3.75×10^(11)CFU/kg活�
- 周樱张伟周峻岗吕红
- 关键词：马克斯克鲁维酵母肉鸡免疫器官指数血清生化指标肠道结构
- 诺如病毒VP1蛋白在马克斯克鲁维酵母中的表达及纯化
- 2022年
- 目的 使用马克斯克鲁维酵母表达系统对GII.17型诺如病毒病毒样颗粒(VLPs)进行表达并对该蛋白纯化方式进行初步探讨。方法 对诺如病毒VP1序列进行密码子优化,使用双酶切构建重组质粒,通过醋酸锂转化法筛选获得重组阳性克隆KM-NOV-GII.17。摇瓶培养72 h后对菌体进行破碎,使用层析柱对目的蛋白进行纯化,并通过电镜观察颗粒形态。结果 成功筛选出高表达量KM-NOV-GII.17,通过Q柱及分子筛串联纯化的方式获得了纯度较高的病毒样颗粒,产量约为0.26 g/L,电镜观察结果显示该VP1序列可自组装为大小均一的病毒样颗粒并且与天然病毒颗粒形态相似。结论 本研究证实了GII.17型诺如病毒VP1蛋白可通过马克斯克鲁维酵母表达系统获得产量高、均一性好的病毒样颗粒,这为诺如病毒基因重组疫苗的研发提供了新的蛋白表达系统。
- 袁军鸿王晓辉吴萍萍冯昌增周峻岗周峻岗褚嘉祐杨昭庆
- 关键词：诺如病毒病毒样颗粒马克斯克鲁维酵母纯化
- CSFV E2蛋白主要抗原区域在马克斯克鲁维酵母中的表达及小鼠免疫被引量：2
- 2019年
- 猪瘟是一种由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的高度接触传染性和致死性疾病.疫苗预防接种是控制猪瘟病毒传播的重要措施,目前我国使用的弱毒疫苗均为1.1亚型猪瘟病毒兔化弱毒株.随着病毒的不断变异,2.1亚型猪瘟病毒已经逐渐成为我国的主要流行毒株.本研究利用马克斯克鲁维酵母研究了2.1b型CSFV E2蛋白及其截短体mE2(690-916aa)在马克斯克鲁维酵母中的重组表达,发现去除E2蛋白跨膜区域可以显著提高E2蛋白表达水平,mE2的表达量在5L发酵罐中达1.25～2.5g/L.经分子筛纯化,mE2蛋白纯度达90%.纯化的mE2作为抗原蛋白,注射免疫小鼠28d后,可诱导小鼠产生抗CSFV的IgG特异性抗体,表明马克斯克鲁维酵母重组表达的mE2蛋白具有较好的免疫原性.
- 朱培霞陈蕾陈蕾刘洋莫文娟刘洋余垚莫文娟
- 关键词：猪瘟病毒马克斯克鲁维酵母E2蛋白
- 犬细小病毒病毒样颗粒在马克斯克鲁维酵母中的表达及免疫原性研究被引量：10
- 2018年
- 犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引起的一种急性、高度接触性传染病,是目前影响犬类健康的最严重的传染病之一.疫苗免疫是预防并控制CPV传播的重要措施.本研究以马克斯克鲁维酵母作为表达宿主进行犬细小病毒VP2蛋白的重组表达.犬细小病毒VP2蛋白经密码子优化后,在马克斯克鲁维酵母中获得高效表达,表达量可达到2.4g/L.重组表达的VP2蛋白自我组装形成大小为20nm的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),经分子筛凝胶层析纯化的VLPs制成疫苗,注射免疫小鼠进49天后抗体滴度可达10 000以上,并诱导小鼠产生血凝抑制抗体,表明利用马克斯克鲁维酵母制备的VLPs疫苗具有较高的免疫原性.
- 陈蕾陈蕾朱培霞周峻岗余垚周峻岗
- 关键词：犬细小病毒病毒样颗粒衣壳蛋白马克斯克鲁维酵母
- GH43家族β-D-木糖苷酶RuXyn1在马克斯克鲁维酵母中的表达及其应用
- 2020年
- 木聚糖的降解需要内切β-木聚糖酶和β-D-木糖苷酶的协同作用,β-D-木糖苷酶能将β-木聚糖酶的水解产物木寡糖降解为木糖,因此在半纤维素的利用中具有重要的意义.本研究将中国牦牛瘤胃微生物来源的糖基水解酶GH43家族β-D-木糖苷酶基因RuXyn1克隆到含两种不同分泌信号肽(菊粉酶信号肽和α-factor信号肽)的马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)分泌表达载体(pUKDN132和pUKDN129)中,转化K.marxianus Fim-1 ura3Δ,通过筛选获得两株分泌表达β-D-木糖苷酶基因RuXyn1的重组菌株Fim-1/pUKDN132-RuXyn1和Fim-1/pUKDN129-RuXyn1.重组菌株摇瓶培养72h后,上清液中β-D-木糖苷酶酶活分别为0.304U/mL和0.045U/mL.在5L发酵罐高密度发酵中,Fim-1/pUKDN132-RuXyn1分泌表达的β-D-木糖苷酶酶活为1.75U/mL,而Fim-1/pUKDN129-RuXyn1的酶活为1.6U/mL,表明在表达β-D-木糖苷酶RuXyn1时,菊粉酶信号肽介导的分泌效率优于α-factor信号肽.以玉米芯为底物,我们测试了K.marxianus重组表达的β-D-木糖苷酶RuXyn1的降解效果,发现在商业化的β-木聚糖酶和纤维素酶CTec2中,添加β-D-木糖苷酶RuXyn1能够显著提升玉米芯的降解效率,还原糖产量提高7%,木糖和葡萄糖的产量分别提高12.4%和6.1%.
- 段懿桐李雪莹周峻岗余垚余垚
- 关键词：木聚糖马克斯克鲁维酵母
- 基因组整合与游离质粒联合应用介导阿魏酸酯酶A在马克斯克鲁维酵母中高效分泌表达
- 2020年
- 阿魏酸是植物中广泛存在的酚类化学物质,具有抗氧化活性.阿魏酸酯酶能够水解植物细胞壁半纤维素和阿魏酸之间的酯键,释放阿魏酸,在食品、医药、饲料加工等领域具有广泛的应用价值.马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种生长迅速、蛋白分泌能力强的新型食品安全级酵母,具有高效分泌表达菊粉酶的能力,本研究利用基因组菊粉酶位点INU1整合与游离质粒联合应用的方式,在马克斯克鲁维酵母中实现了黑曲霉(Aspergillus niger)阿魏酸酯酶AnFaeA的高效表达,发酵液上清中的酶活达到164.4U/mL.利用马克斯克鲁维酵母重组表达的阿魏酸酯酶能够高效降解玉米芯释放阿魏酸,释放量可达1.81mg/g,并且在β-木聚糖酶的协助下可进一步提高阿魏酸的释放量,达到2.8mg/g.
- 李雪莹段懿桐吴丽莫文娟周峻岗周峻岗吕红
- 关键词：阿魏酸酯酶马克斯克鲁维酵母
- 马克斯克鲁维酵母FIM1基因组分析
- 2022年
- 马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种富有潜力的新型细胞工厂宿主菌。K.marxianus FIM1(CGMCC No.10621)基因组组装与注释已于2019年完成并在NCBI上公布(GCA_001854445.2),但在应用该基因组信息时发现其仍不完善。所以本研究使用重测序的DNA-seq数据校验了K.marxianus FIM1的基因组序列,随后补充了K.marxianus FIM1的注释,并使用比较基因组学的方法进一步完善了K.marxianus FIM1的基因组信息。根据重测序比对结果,删除了测序数据无法覆盖的位点61处,共4910bp。K.marxianus FIM1新序列总长为10909543bp,可覆盖酵母目保守基因库中99.5%的基因。同时对K.marxianus FIM1的非编码RNA、次级代谢产物基因簇的也进行了补充注释。进一步,我们使用基因组共线性分析的方法分析了K.marxianus FIM1在物种分化过程中基因排列顺序保守的区域,并将K.marxianus FIM1与NCBI公布的11株K.marxianus进行了种内基因组比较。发现12株K.marxianus早在约180万年前分化为两个亚型,它们共有的同源基因家族有4009个,基因组中核心基因平均占比为79.88%,预测K.marxianus为闭合型泛基因组,核心基因数为3760个,为K.marxianus FIM1遗传学的研究与遗传工程的改造提供了数据支持。
- 罗通宇曾俊源吕奕琳周峻岗余垚余垚
- 关键词：马克斯克鲁维酵母基因组注释比较基因组学
- 酵母重组表达PCV2病毒样颗粒的纯化工艺被引量：1
- 2020年
- 猪圆环病毒(PCV)是一种引起断奶仔猪多系统衰竭综合征、呼吸道综合征及繁殖障碍的病毒,已经成为危害养猪业最主要的病原之一,而接种猪圆环病毒2型(PCV2)疫苗是控制猪圆环病毒相关疾病最有效的措施.利用马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus,KM)表达猪圆环病毒PCV2 Cap的产量可达2g/L,高于其他表达系统的产量,并且重组表达的Cap蛋白在胞内能高效自组装成病毒样颗粒(Virus-Like Particles,VLPs).酵母细胞破碎之后样品中含有大量的微小的细胞碎片,高速离心澄清难以分离,影响了VLPs的得率、纯度以及澄清度.本研究考察了超声波破碎、玻璃珠研磨破碎以及高压均质破碎等不同破碎方法,发现1300bar高压均质法对重组表达PCV Cap蛋白的马克斯克鲁维酵母破碎效果最佳.在此基础上,检测添加有机溶剂、表面活性剂和化学絮凝剂的处理效果,发现添加1%(质量分数)Triton X-100对酵母破碎菌液具有65%以上的浊度降低率,处理后样品可直接用于离子交换层析,得率大于92%,HPLC纯度大于85%.
- 谢晋杨德强周峻岗李翊峰吕红
- 关键词：马克斯克鲁维酵母猪圆环病毒病毒样颗粒浊度纯化
- 猪Mx1和牛Mx1蛋白在PK-15细胞中的表达及其对伪狂犬病病毒的抑制被引量：1
- 2015年
- 目的:研究猪Mx1和牛Mx1蛋白在PK-15细胞中的表达并检测其是否对伪狂犬病病毒(PRV)具有抑制作用。方法:从IBRS-2细胞和MDBK细胞中分别调取猪Mx1和牛Mx1基因,并克隆到pc DNA3.1/myc-His(-)B,构建得到真核重组表达质粒,以脂质体转染的方法将其分别导入到PK-15细胞,从mRNA水平和蛋白质水平鉴定重组质粒在细胞内的表达情况,然后用细胞毒性试剂盒检测这两种蛋白是否对PK-15细胞具有毒性。之后,通过荧光定量PCR检测猪Mx1和牛Mx1在攻毒后不同时间、不同攻毒剂量的条件下对PRV的抑制情况,并观察100TCID50病毒攻击细胞72h后的病变程度。结果:成功克隆了猪Mx1和牛Mx1基因,经mRNA水平和蛋白质水平证实,两种重组质粒在PK-15细胞内能够正常表达。从荧光定量PCR和细胞病变的角度来看,细胞内表达的Mx1蛋白对PRV具有显著性的抑制(P<0.001)。结论:猪Mx1和牛Mx1基因在PK-15细胞中表达的Mx1蛋白能够抑制PRV在胞内的复制。
- 王鹏郑兆鑫刘明秋
- 关键词：PK-15细胞伪狂犬病病毒
