万涛
- 作品数：14 被引量：49H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市科委基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学政治法律理学更多>>
- HBV对肝癌细胞中AKR1C1基因表达的影响被引量：4
- 2010年
- 目的研究HBV对肝癌细胞中AKR1C1基因表达的影响,并对其作用机制进行初步的探讨。方法RT-PCR和Real-time PCR检测HepG2.2.15和HepG2细胞中AKR1C1基因的差异表达情况;构建AKR1C1基因启动子虫荧光素酶报告质粒,并分别与HBV、HBx、HBs、HBp、HBc的表达质粒共转染HepG2细胞,双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶活性。结果AKR1C1基因在HepG2.2.15细胞中的表达高于HepG2细胞1.5倍;在HBV表达质粒与AKR1C1基因启动子虫荧光素酶报告质粒共转染的HepG2细胞中,虫荧光素酶的活性明显增强,为对照组3.37倍;相对HBs、HBp、HBc,HBx升高虫荧光素酶的活性的作用最强。结论HBV可以增强AKR1C1基因启动子的转录活性,促进AKR1C1在肝癌细胞中的表达,HBx在这一转录激活当中发挥重要作用。
- 万涛张小花张磊田园园丁世家汤华
- 关键词：肝肿瘤基因表达
- 快速现场细胞学评价在EBUS-TBNA取样诊断肺癌中的价值被引量：33
- 2018年
- 背景与目的在肺及纵隔占位性病变的患者中大部分临床考虑诊断为原发性肺癌,超声支气管镜引导下的经支气管针吸活检术(endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration, EBUS-TBNA)是一种常用的获取病理组织明确诊断的手术。在EBUS-TBNA过程中,快速现场细胞学评价(cytological rapid on-site evaluation,C-ROSE)是一项有用的辅助技术。本研究探讨C-ROSE在EBUS-TBNA取样诊断肺癌中的价值。方法对141例经胸部计算机断层扫描(computed tomography, CT)发现存在纵隔和(或)肺门病灶(包括肿大的淋巴结/肿块)且临床高度疑诊原发性肺癌而行EBUS-TBNA患者进行回顾性分析,其中术中行C-ROSE者81例,未行C-ROSE者60例,分析两组患者的穿刺情况及并发症发生率,同时分析C-ROSE联合EBUS-TBNA取样对肺癌诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果 C-ROSE组与非C-ROSE组穿刺针数及穿刺部位数无统计学差异,穿刺合格率分别为98.77%和90.00%(P<0.05),诊断率分别为88.89%和75.00%(P<0.05),并发症发生率分别为1.23%和11.67%(P<0.05)。C-ROSE联合EBUS-TBNA对肺癌诊断的敏感度为92.21%,特异度为100.00%,阳性预测值为100.00%,阴性预测值为40.00%。结论 C-ROSE在疑诊肺癌行EBUS-TBNA中应用可以提高穿刺成功率及诊断率、减少并发症,值得推广。
- 向青万涛胡前方陈虹李岱容
- 关键词：肺肿瘤
- RP-HPLC法测定人血浆中血管紧张素Ⅱ的浓度被引量：1
- 2012年
- 目的:建立以反相高效液相色谱(RP-HPLC)-荧光法检测人血浆中血管紧张素Ⅱ浓度的方法。方法:采用固相萃取法纯化血浆样本,以荧光胺柱前衍生后进样测定。以乙腈-10mmol·L-1三羟甲基氨基甲烷盐缓冲液(pH8.5)作为流动相,梯度洗脱,流速为1mL·min-1,色谱柱为LunaC5,激发波长为273nm,发射波长为476nm。结果:血管紧张素Ⅱ血药浓度在10～200ng·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9995),最低检出限(S/N=3)为5ng·mL-1,日内、日间RSD分别为1.65%和4.20%。结论:本方法快速、灵敏、准确、重复性好,可用于血浆中血管紧张素Ⅱ浓度的检测。
- 袁泰先万涛于天晓李青丁世家
- 关键词：反相高效液相色谱法荧光检测柱前衍生血药浓度
- 精胺对Nup98基因的调控研究
- 2011年
- 利用基因芯片比较鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠和正常小鼠肝组织的表达差异;高效液相色谱法测定鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠和正常小鼠肝组织中的精胺含量;构建Nup98的启动子-虫荧光素酶报告基因质粒;脂质体Lipofectamine 2000TM转染小鼠细胞(NIH3T3),在含有精胺或正常培养条件下,测定虫荧光素酶活性。结果显示,Nup98基因在鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠肝组织表达增强;鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠肝组织中,精胺含量增高;成功构建Nup98的启动子-虫荧光素酶报告基因质粒pGL3-Nup98-P;精胺能在体外培养的条件下,增强虫荧光素酶的活性。这些结果证明精胺能激活Nup98基因的启动子活性,增强其在NIH3T3细胞中的表达。
- 张磊万涛田圆圆王李英李凯秦栋栋曲嘉琳汤华
- 关键词：精胺
- HBV通过增强DNAJB4启动子活性调节其在HepG2．2．15细胞中的表达被引量：4
- 2009年
- 目的初步探讨HBV与DNAJB4基因的转录调节作用机制。方法用RT-PCR及Real—timePCR检测HepG2．2．15细胞和HepG2细胞中DNAJB4在mRNA水平上的表达差异。构建DNAJB4启动子虫荧光素酶报告质粒，分别与HBV、HBs、HBp、HBc、HBx表达质粒共转染HepG2细胞，比较虫荧光素酶活性。结果在mRNA水平上，DNAJB4在HepG2．2．15细胞中的表达量是其在HepG2细胞中表达量的2．59倍，且二者有显著性差异（P〈0．01）。DNAJB4启动子虫荧光素酶报告质粒与HBV表达质粒共转染组的相对荧光素酶活性是其对照组的2．28倍。转染HBs和HBc表达质粒组的相对荧光素酶活性分别是其对照组的2．11倍和1．77倍，而HBx、HBp表达质粒对荧光素酶活性没有影响。结论在HepG2．2．15细胞中，HBV能通过增强DNAJB4启动子活性增加DNAJB4转录水平的表达，其中HBs和HBc蛋白起主要作用。
- 张小花万涛张磊田园园黄婷婷汤华
- 关键词：乙型肝炎病毒HEPG2.2.15细胞基因表达与调控
- 多聚嘧啶序列结合蛋白抑制HBV转录后调节元件的功能
- 2009年
- 目的探讨多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract binding protein,PTB)对乙型肝炎病毒转录后调节元件(HBV posttranscriptional regulatory element,HPRE)功能的影响。方法采用pDM138-HPRE CAT(chloramphenicol acetyltransferase)报告体系,通过质粒瞬时转染细胞的方式来探讨PTB对HPRE功能的影响。结果CAT活性检测表明:PTB的过表达使HPRE介导的CAT表达活性下降,并且呈剂量依赖性。当去除质粒上游剪接供体位点时,PTB仍然可以降低CAT的活性。结论PTB抑制HPRE的功能,并且这种抑制作用不依赖于上游剪接供体位点。
- 程丽英万涛黄婷婷蔡雪飞张文露黄爱龙汤华
- 关键词：乙型肝炎病毒瞬时转染
- 嘌呤霉素抗性基因捕获载体的构建及在细胞中的功能验证被引量：1
- 2009年
- 目的构建具有嘌呤霉素抗性基因捕获载体，扩大基因捕获载体的应用范围。方法用经改造的捕获载体（gene trapping vector）稳定转染HepG2．2．15肝癌细胞系，经嘌呤霉素筛选，制作单克隆细胞株。用PCR方法验证该载体的在细胞染色体中的整合，ELISA方法证明捕获载体捕获基因后的细胞的功能改变。结果嘌呤霉素抗性基因捕获载体整合在HepG2．2．15肝癌细胞的染色体上，并能影响细胞HBsAg和HBeAg的分泌。结论新构建的嘌呤霉素抗性基因捕获载体能在具有G418抗性的细胞中捕获有意义的目的基因。
- 黄婷婷田园园张磊张小花万涛黄爱龙汤华
- 气相色谱-火焰离子化检测器检测血清中乙二醇及其代谢产物羟乙酸被引量：3
- 2011年
- 建立了气相色谱-火焰离子化检测器(FID)检测血清中乙二醇(ethylene glycol,EG)及其代谢产物羟乙酸(glycolic acid,GA)的方法。通过优化样本预处理和衍生化方法,用气相色谱-火焰离子化检测器检测标准工作液和小鼠中毒模型血清中乙二醇及其代谢产物羟乙酸。结果表明,乙二醇与羟乙酸浓度分别在0.01～10μg/mL,0.01～5μg/mL范围内线性良好,其标准曲线的相关系数分别为0.9999与0.9988,相对标准偏差均小于5%,绝对回收率分别为91～106%和89～95%,最低检出限分别为0.005μg/mL和0.01μg/mL。本方法灵敏度高,简单快速,结果准确可靠,适用于法医学鉴定和临床检验中乙二醇与羟乙酸的检测。
- 于天晓李青万涛丁世家
- 关键词：乙二醇衍生化气相色谱
- 腐胺对小鼠成纤维细胞中Atp8a1基因表达的影响
- 2011年
- 目的:研究腐胺对小鼠成纤维细胞中Atp8a1基因表达的影响,初步探讨其作用机制。方法:用基因芯片和Real-timePCR检测正常小鼠和Azin1(Antizyme inhibitor 1)基因敲除小鼠肝脏组织中Atp8a1基因的在mRNA水平上的表达;构建Atp8a1基因启动子的虫荧光素酶报告质粒pGL3-Atp8a1-P;将重组质粒转染NTH3T3成纤维细胞中,分别在含有4μg/ml腐胺和不含腐胺的条件下,用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶活性。结果:在含有腐胺的培养条件下,转染Atp8a1基因启动子虫荧光素酶报告质粒的细胞虫荧光素酶的活性明显改变。结论:腐胺能够抑制Atp8a1基因启动子活性而降低其在NIH3T3成纤维细胞中的表达。
- 万涛李朝幸田园园王李英秦栋栋李凯曲嘉琳汤华
- 关键词：腐胺启动子基因表达
- 基于滚环扩增合成的多价适配体快速检测浆膜腔积液中肿瘤细胞的实验研究被引量：1
- 2020年
- 目的基于多价适配体构建一种简单快速的肿瘤细胞的检测方法。方法通过滚环扩增反应形成多价适配体的长链支架(含重复的Poly T),与靶向核仁素的AS1411适配体荧光信号链(带有Ploy A)杂交后,构建多价适配体识别探针Multi-AS1411-LS,并对其进行表征。用流式细胞和共聚焦显微镜分析Multi-AS1411-LS探针对肿瘤细胞识别的可行性,并进一步对识别条件进行了优化,最后对临床浆膜腔积液标本中的肿瘤细胞进行检测,评价其特异性和敏感性。结果构建的多价适配体识别探针在室温下5 min即可识别肿瘤细胞,比单价的AS1411适配体识别肿瘤细胞的荧光强度高100倍左右,且最低检测限为3个细胞。该多价适配体识别探针在临床标本肿瘤细胞检测中,能很好地区分良恶性细胞,敏感度为87.80%,特异性为93.10%。结论基于滚环扩增合成的多价适配体能快速检测浆膜腔积液中肿瘤细胞,操作方法简单,有较好的特异性和敏感度。
- 许洁如陈嘉玲万涛邓红丽李岱容
- 关键词：滚环扩增肿瘤细胞检测
