刘安玲
- 作品数：10 被引量：26H指数：3
- 供职机构：南方医科大学基础医学院基因工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 医学院校研究生分子生物学实验教学改革探讨被引量：13
- 2012年
- 结合南方医科大学分子生物学实验课程教学改革的实践,从课程内容的设置、教学方法的丰富、考核办法的改革等方面进行了总结和探讨,有助于分子生物学实验教学迈上一个新台阶。
- 周珏宇石嵘余海浪刘安玲马文丽
- 关键词：分子生物学教学改革研究生教学
- 生物化学教学实验室改建的实践体会
- 2010年
- 本文根据南方医科大学生物化学教学实验室的改建情况,分析原有实验室存在的问题,并结合现代实验室建设的要求,针对生物化学教学类实验室的改建提出了一些建议。
- 刘安玲
- 关键词：生物化学实验教学
- 靶向COL1A1基因的shRNA对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨抑制Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)基因表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响。方法:用已构建的pSilencer2.1-U6-COL1A1重组质粒转染乳腺癌细胞MDA-MB-231,采用RT-PCR和Western blotting技术检测重组质粒对COL1A1基因表达的影响,MTT比色法测定细胞增殖的抑制情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化,Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化。结果:RT-PCR及Western blotting结果证实重组质粒在mRNA和蛋白水平分别显著抑制COL1A1基因表达;pshRNA-COL1A1转染组细胞的增殖速度明显减慢且呈时间依赖关系;与对照组相比,pshRNA-COL1A1组细胞明显阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),出现细胞质浓缩、核凝聚等凋亡形态学变化。结论:pshRNA-COL1A1能有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡,为以COL1A1为靶点的乳腺癌基因治疗提供实验依据。
- 余海浪刘安玲周珏宇孟伟郑文岭马文丽
- 关键词：RNA干扰
- Rheb和Rheb＇D60K突变基因重组慢病毒载体的构建、鉴定及其对肝癌细胞凋亡的影响被引量：2
- 2012年
- 目的构建携带Rheb和Rheb'D60K突变基因的重组慢病毒载体,并鉴定其在MCF-7细胞中的表达效果,观察其对肝癌细胞凋亡的影响。方法 PCR法扩增Rheb和Rheb'D60K突变基因,构建重组质粒LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K,脂质体法将重组慢病毒载体和包装质粒混合物共转染HEK-293 FT细胞,包装产生慢病毒颗粒。将病毒感染MCF-7细胞后Western blotting检测Rheb及PS6蛋白的表达;将病毒感染SK-HEP-1细胞饥饿处理后观察其凋亡情况。结果 PCR及测序表明成功构建了LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K重组慢病毒载体。Western blotting结果显示慢病毒LV31-Rheb-WT感染的MCF-7细胞内Rheb下游的PS6蛋白表达多于慢病毒LV31-Rheb-D60K感染的MCF-7细胞。显微镜下慢病毒LV31-Rheb-D60K感染的SK-HEP-1细胞饥饿后凋亡数目多于慢病毒LV31-Rheb-WT感染的SK-HEP-1细胞。结论本研究成功构建了Rheb和Rheb'D60K突变基因重组慢病毒载体,初步观察到该突变基因重组慢病毒载体可诱导肝癌细胞凋亡,为进一步研究Rheb基因在肝癌发生发展中的作用,进而开展肝癌的临床靶向治疗研究奠定了基础。
- 陈可和梁博邹镇洪韩泽龙潘金飞刘安玲
- 关键词：RHEB慢病毒载体MCF-7细胞株
- Akt重组腺病毒载体的构建及其对肝癌细胞生存的影响被引量：3
- 2012年
- 目的构建携带Akt基因的重组腺病毒载体,初步研究其对肝癌细胞生存的影响。方法分别将Akt-wt及Akt-dn基因亚克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA,采用RAPAd○RCMV腺病毒表达系统构建重组腺病毒并用PCR鉴定,以蛋白质印迹检测Akt及其下游GSK3β、p-GSK3β的表达,后将Akt重组腺病毒感染肝癌SK-HEP-1细胞,检测血清饥饿24h后细胞存活情况。结果酶切pacAd5 CMV-Akt-wt和pacAd5 CMV-Akt-dn均获得大小为6 kb和1.44 kb(Akt)的两个片段。PCR扩增得到1.44 kb左右的条带。蛋白质印迹结果显示两组中p-GSK3β表达有明显差别,肝癌SK-HEP-1细胞存活率在感染pacAd5 CMV-Akt-dn组较感染Akt-wt腺病毒组明显降低。结论成功构建了Akt-wt及Akt-dn基因重组腺病毒载体,并初步发现其有促进肝癌细胞死亡作用,为体内外进一步研究Akt基因及其相关信号通路在肝癌发生发展中的作用奠定了基础。
- 陈可和韩泽龙李建军潘金飞刘安玲
- 关键词：AKT腺病毒肝细胞癌
- 乳腺癌转移相关通路的基因集富集分析被引量：1
- 2013年
- 目的探讨与乳腺癌转移相关的生物信号通路及因素。方法以乳腺癌转移相关的3组基因芯片表达谱数据为研究材料,登录号分别为GSE2034、GSE2603以及GSE12276。将乳腺癌样本分为原发癌和转移癌两组,原始数据经RMAExpress软件进行质量检验和标准化,采用GSEA通路富集工具对乳腺癌转移相关通路进行分析。结果有20条生物信号通路与乳腺癌的转移有着密切关系,其中基因集上调的有17个,下调的有3个,主要涉及细胞周期与增殖、代谢途径、血管生成、迁移、免疫系统等信号通路。结论乳腺癌转移除与肿瘤细胞的活力和增殖能力提高有关外,还与肿瘤细胞的迁移和运动能力进一步增强及机体免疫系统损害有关。
- 余海浪刘安玲周珏宇孟伟郑文岭马文丽
- 关键词：乳腺肿瘤通路
- 克隆、表达及纯化核糖体蛋白S6用于体外激酶活性检测被引量：3
- 2010年
- 目的:构建40S核糖体蛋白S6的原核表达载体,表达并纯化S6蛋白,将其作为底物用于S6激酶(S6K)的体外活性测定。方法:采用RT-PCR方法从人胚肾细胞HEK293中获取S6 cDNA,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体中,进行酶切及测序鉴定;IPTG诱导GST-S6融合蛋白在大肠杆菌中表达,用谷胱甘肽亲和层析纯化GST-S6,免疫沉淀法检测该蛋白是否可作为底物用于S6K的体外激酶活性测定。结果:酶切及测序鉴定表明构建了S6原核表达载体,并表达及纯化出GST-S6融合蛋白,相对分子质量为55×103。该蛋白可用于S6K的体外激酶活性测定,特异性强。结论:S6蛋白的克隆、表达与纯化成功,可用于S6K的体外激酶活性测定,为研究S6K的功能奠定了基础。
- 刘安玲赵莉贾春宏李明
- 关键词：原核表达
- Flt-1和MVD在乳腺癌组织中的表达及意义
- 2011年
- 目的研究血管内皮生长因子受体1(Flt-1)和微血管密度(M VD)在乳腺癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学染色SP法检测56例乳腺癌组织和32例癌旁正常组织中Flt-1和M VD的表达,分析其与乳腺癌临床病理特征间的联系。结果 Flt-1在乳腺癌中的阳性表达率和M VD值分别为75.0%和(44.76±10.17),显著高于癌旁正常组织的12.5%和(10.29±2.38)(P<0.05),且与乳腺癌的临床分期及淋巴结的转移有关,与病理类型、组织分型及ER、PR无关。乳腺癌组织中Flt-1与M VD的表达呈正相关(r=0.72,P<0.01)。结论 Flt-1在乳腺癌组织中高表达,尤其在伴有淋巴转移的癌组织中表达增高。Flt-1的高表达与M VD值的升高可作为乳腺癌的生长、转移以及预后的重要判定指标。
- 余海浪马文丽周珏宇刘安玲郑文岭
- 关键词：FLT-1MVD乳腺癌免疫组织化学
- SCH66336对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制被引量：3
- 2010年
- 目的探讨法尼基转移酶抑制剂(FTIs)SCH66336对胃癌SGC-7901与MGC-803细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法取对数生长期胃癌SGC-7901与MGC-803细胞,分为实验组和对照组,实验组加入SCH66336使终浓度分别为0.1、0.3、1.0、3.0μM,对照组加入含等体积DMSO的培养基,每组设3个复孔。MTT法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术测定细胞周期与细胞凋亡率,Western blot法检测细胞中核糖体蛋白S6的磷酸化(S235/236)、细胞周期素D1(cyclin D1)与活化的Caspase-3表达情况。结果与对照组比较,SCH66336作用后SGC-7901与MGC-803细胞抑制率及凋亡率明显升高,呈G0/G1细胞周期阻滞,cyclin D1与S6磷酸化表达明显降低、活化的Caspase-3表达升高(P<0.05),且呈时间及剂量依赖性。结论 SCH66336对SGC-7901与MGC-803胃癌细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其机制可能为抑制S6的活化、下调cyclin D1表达、激活Caspase-3依赖的凋亡通路。
- 刘安玲郑航
- 关键词：法尼基转移酶抑制剂细胞增殖
- FKBP38的原核表达、抗体制备及其应用
- 2010年
- 目的构建人FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化基因表达产物,制备兔多克隆抗体并对该抗体用于Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测进行评价,为研究FKBP38的功能奠定基础。方法以人FKBP38 cDNA为模板,根据人FKBP38全长cDNA系列,设计PCR引物分别扩增N-末端(1-207aa)及C-末端(209-387aa),将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-6P1中,经BamH I/Sal I双酶切鉴定。GST-FKBP38-N及GST-FKBP38-C融合蛋白在硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下在大肠杆菌BL21中得到表达。利用谷胱甘肽亲和层析纯化融合蛋白,用纯化的GST-FKBP38-N融合蛋白及GST-FKBP38-C融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体并进行纯化。使用纯化的抗FKBP38多抗以Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测FKBP38的表达与细胞内的定位。结果成功构建FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体,表达并纯化了GST-FKBP38-N融合蛋白及GST-FKBP38-C融合蛋白,制备并纯化了FKBP38特异性抗体。该抗体用于Western免疫印迹检测FKBP38在不同细胞株中的表达,特异性强、效价高;用于免疫荧光检测FKBP38在细胞内主要定位于线粒体上;用于免疫组织化学检测FKBP38在乳腺组织细胞呈现胞浆阳性。结论 FKBP38特异性抗体制备成功,该抗体可用于FKBP38的免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测,为深入研究FKBP38的功能奠定基础。
- 刘安玲赵莉Ma Dong-zhu贾春宏李明温芝华叶永斌
- 关键词：多克隆抗体免疫荧光免疫组织化学
