刘庆华
- 作品数：49 被引量：36H指数：3
- 供职机构：中南民族大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- CRISPR/Cas9技术制备S100A9基因编辑小鼠及表型研究被引量：3
- 2021年
- S100钙结合蛋白A9 (S100 calcium binding protein A9, S100A9)参与多种炎症反应及肿瘤细胞的迁移和侵袭调控等生物学过程。本研究目的是利用CRISPR/Cas9技术构建S100A9基因编辑小鼠,为探讨该基因生物学功能提供动物模型。根据S100A9基因序列构建针对外显子2和3的单链小向导RNA(smallguideRNA,sgRNA),体外转录后,通过显微注射将Cas9mRNA和候选sgRNA混合物注射到小鼠受精卵中,体外培养获得早期胚胎并移植到代孕小鼠,所获F0小鼠经PCR鉴定和基因测序鉴定其基因型。F0小鼠进一步与野生型C57BL/6小鼠测交获得F1杂合子小鼠,再通过F1小鼠自交获得纯合子后代,并利用real-timePCR、Western blot及免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)等方法验证S100A9表达和分布情况;构建鸡卵清白蛋白(ovalbumin from chicken egg white, OVA)激发的过敏性哮喘模型,HE染色观察小鼠肺组织病理变化。结果显示,本方法成功敲除S100A9基因2、3外显子2 492 bp,并获得能稳定遗传的S100A9^(-/-)小鼠。S100A9基因在野生型小鼠的肺和脾脏中高表达,而在S100A9^(-/-)小鼠肺和脾脏中未检测到S100A9 mRNA和蛋白的表达;在表型方面,S100A9^(-/-)小鼠在生长、繁殖及发育方面未表现出明显的缺陷,但在OVA处理条件下,相较于野生型小鼠,S100A9^(-/-)小鼠肺部表现出明显加重的炎症表型,且支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中嗜酸性粒细胞的占比显著升高。以上结果表明,本研究成功构建了S100A9基因编辑小鼠新品系,并初步证实S100A9功能缺失加重哮喘小鼠气道炎症,为研究S100A9基因功能提供了新的小鼠模型。
- 严珮梁大焱许文豪薛璐于孟飞于孟飞刘庆华沈金花
- 关键词：S100A9小鼠
- 应用于骨髓干细胞运动轨迹追踪的细胞标记检测方法
- 本发明提供了一种应用于骨髓干细胞运动轨迹追踪的细胞标记检测方法，其特征在于采用以下步骤：将荧光染料CFSE溶解于生理盐水中制得CFSE溶液，CFSE溶液中CFSE的浓度为50-100ug/mL；将具有生物活性的大腿骨或小...
- 刘庆华于孟飞陈微微谈丽李文尔
- 文献传递
- 干扰素调节因子的研究进展被引量：12
- 2014年
- 指出了干扰素调节因子(IRFs)是一类在干扰素(IFN)信号通路中起重要调控作用的多功能转录因子,目前已经发现10个IRFs成员,它们在IFN的诱导、病毒防御、免疫调节、细胞分化、细胞生长与凋亡和许多疾病的调节中具有重要作用.对IRFs的结构、IRFs在免疫系统、细胞分化、细胞凋亡和相关疾病如肿瘤、系统性红斑狼疮中的功能作了综述.
- 沈金花吕印刘庆华
- 关键词：干扰素调节因子疾病
- 代表性新型植物源蛋白的应用概况被引量：1
- 2019年
- 由于历史、地理等客观因素影响,我国绝大多数地区的食物以植物源蛋白为主,在长期生产与实践过程中形成了自己独特的应用特色。随着双蛋白工程在“国民营养计划”中的确立,如何充分利用我国现有植物源蛋白成为主要研究课题之一,本文对我国几种新型的植物源蛋白特性及应用进行了初步归纳与系统概述。
- 易丽莎李雨臻吴智华王靖熊海容刘庆华覃瑞刘虹
- 关键词：蛋白质提取植物蛋白制品
- 一种敲除PLAC8基因的HEK293T细胞系构建方法
- 本发明提供了一种敲除PLAC8基因的HEK293T细胞系构建方法，步骤如下：(1)、sgRNA设计；(2)、重组质粒构建；(3)、细胞转染；(4)、流式细胞术分选阳性细胞；(5)、单细胞培养；(6)、测序检测。本发明利用...
- 薛璐秦绪慧刘庆华沈金花彭勇波赵平马立群于孟飞陈微微
- 文献传递
- 一种萹蓄乙酸乙酯提取物及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种萹蓄乙酸乙酯提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)、选取干燥的萹蓄茎叶磨成粉末；(2)、将粉末以乙醇浸泡并加热回流提取，收集提取液，蒸干，得到提取物；(3)、将提取物溶解于水中，用石油醚萃取，分别收集上层...
- 刘庆华彭勇波罗茜
- 文献传递
- 罗红霉素对小鼠乙酰胆碱预收缩气管环的舒张作用被引量：2
- 2017年
- 目的观察罗红霉素对小鼠气管环的舒张作用,并探讨其作用机制。方法取BALB/c小鼠15只,处死后分离气管环,将气管环置于灌流槽中,经过高钙液平衡后开始实验。使用激动剂乙酰胆碱(Ach)100μmol/L收缩气管环,待气管环张力达到平台期后,分别加入终浓度为10^(-2)、10^(-1.5)、10^(-1)、10^(-0.5)、10~0、10^(0.5)、10^(0.75)、10~1mg/mL的罗红霉素,观察不同浓度罗红霉素作用下的气管环肌张力和舒张比率,将引起气管环最大舒张的最低药物浓度10^(0.75)mg/mL作为罗红霉素最佳药物浓度。向灌流槽中加入100μmol/L Ach预收缩气管环,随后加入L型钙离子通道抑制剂硝苯地平、非选择性阳离子通道抑制剂吡唑盐3(Pyr3),待抑制剂舒张气管作用达到平台期后,加入10^(0.75)mg/mL罗红霉素,观察气管环的肌张力变化和舒张比率。结果 Ach预收缩的气管环的肌张力为(7.03±0.35)mN,加入最佳浓度的罗红霉素后,肌张力降至(3.47±0.29)mN(P<0.05)。加入硝苯地平、Pyr3后气管环的肌张力降低,舒张比率增加(P均<0.05);继续加入罗红霉素后,气管环的肌张力继续降低,舒张比率较前升高(P均<0.05)。结论罗红霉素对小鼠Ach预收缩的气管环具有舒张作用,并可增强硝苯地平、Pyr3对于Ach预收缩气管环的舒张作用,其主要通过调控钙离子通道来发挥作用。
- 于孟飞王倩刘松青沈金花刘庆华
- 关键词：乙酰胆碱罗红霉素钙离子通道哮喘
- 一种用于治疗哮喘的药物组合物
- 本发明提供一种用于治疗哮喘的药物组合物，含有活性成分大花红景天水溶液提取物和胃康灵。其中大花红景天水溶液提取物占组合物总重量的45％‑95％，胃康灵占组合物总重量的5％‑55％。相关实验的研究表明，本发明的药物组合物能通...
- 于孟飞马月娥刘庆华
- 文献传递
- 中药诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的研究进展被引量：2
- 2013年
- 指出了胚胎干细胞(ES细胞)是一类可进行自我复制和更新并向骨骼、软骨、脂肪、神经、肌肉等多个胚层的组织分化的细胞.研究表明:ES细胞移植入缺血心脏后可以分化形成新生心肌细胞,血管内皮细胞等,还可以通过分泌多种生长因子,促进微循环的建立,提高梗死后心脏功能.综述了中药如黄芩苷、葛根素、淫羊藿苷、黄芪、丹参、皂苷、双龙方等诱导小鼠干细胞分化为心肌细胞的研究进展.
- 刘庆华马云飞罗小静张婷
- 关键词：胚胎干细胞分化心肌细胞中药
- 一种高纯度心肌细胞原代培养方法
- 本发明提供了一种高纯度心肌细胞原代培养方法，适用于生物技术领域及医学领域。具体而言，首先将离体的乳鼠心脏剪成组织碎片；将组织碎片采用改进配置的酶消化液进行多次分量的消化，制得心肌细胞悬液后重悬，然后将心肌细胞接种在培养皿...
- 沈金花雷骏刘庆华
- 文献传递
