刘月明
- 作品数：13 被引量：31H指数：4
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- EOLA1基因突变体的克隆和鉴定
- 2003年
- 目的 对ECV3 0 4细胞株EOLA1基因进行克隆测序以及mRNA水平检测。方法 采用RT PCR扩增EOLA1基因片断 ,连接到T载体进行测序。结果 测序发现一种目的基因mRNA剪接突变体 ,其第 3外显子起始部分比Genebank数据库相应序列多出 19个碱基。RT PCR显示剪接突变体与野生型EOLA1基因具有不同的表达水平和LPS反应性。结论 发现一个EOLA1基因剪接突变体 。
- 苏踊跃齐洁罗向东贾思远梁光萍陈渝刘月明
- 关键词：EOLA1基因克隆
- 刺激ECV304细胞增殖的新基因EOLA1的克隆和功能研究被引量：6
- 2005年
- 目的扩增内皮细胞受内毒素刺激后上调表达的新序列标签ST55(GenBank No.BM121646)全长cDNA序列并研究其结构和生物学功能。方法应用快速扩增cDNA末端技术延伸ST55获得其全长cDNA序列,以Northern杂交检测其组织分布,通过酵母双杂交筛选其胞内相互作用蛋白,在ECV304细胞中稳定转染目的基因并强制表达后观察细胞生长变化。结果获得1个全长为1404碱基的cDNA序列,作为人类新mRNA被GenBank接受(AY074889),命名为内皮高表达脂多糖相关因子1(endothelial-overexpressedlipopolysaccharide-associatedfactor1,EOLA1)。生物信息学分析显示EOLA1基因含5个外显子,定位于染色体Xq27.4,编码蛋白质由158个氨基酸组成,分子量为1789。Northern印迹显示EOLA1在人各组织和癌细胞系有不同的表达;以EOLA1cDNA作为诱铒,进行酵母双杂交筛选人肝cDNA文库,鉴定了金属硫蛋白2A(metallothionein2A,MT2A)为其相互作用蛋白并采用免疫共沉淀验证了这一结果。高表达EOLA1显著促进了ECV304细胞增殖。结论EOLA1是人内皮活化相关新基因,EOLA1与MT2A的相互作用可能在炎症反应中细胞内保护方面发挥作用。
- 梁自文杨宗城刘月明陈渝罗向东
- 关键词：ECV304细胞细胞增殖基因克隆炎症反应
- hTERT基因转染对人胚胎成纤维细胞表型的影响被引量：1
- 2003年
- 目的 探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位 (hTERT)基因转染人胚胎成纤维细胞 (hEFs)后细胞是否存在恶性表型。方法 应用脂质体法将pIRES2 EGFP hTERT正义重组质粒及pIRES2 EGFP空载质粒分别导入原代培养hEFs ,Westernblot分别检测hTERTmRNA和蛋白质的表达。采用染色体核型分析、裸鼠皮下致瘤性实验、DNA倍体实验分析转染细胞是否存在恶性表型。结果 原代培养hEFs中存在较弱水平的hTERT基因mRNA及蛋白质表达 ,但外源性hTERT基因转染的胚胎成纤维细胞hTERTmRNA及蛋白表达显著增加。hTERT转染后细胞染色体仍为 2 3对 ,且均为正常二倍体细胞 ;裸鼠皮下不具有成瘤的能力。
- 梁光萍罗向东杨宗城陈建苏踊跃刘月明
- 关键词：恶性表型
- 内皮活化相关新基因EOLA1的体外表达及亚细胞定位被引量：4
- 2003年
- 目的 研究内皮细胞高表达脂多糖相关因子 1(Endothelial over expressedlipopolysaccharide associatedfactor 1,EOLA1)基因的体外表达和亚细胞定位 ,为进一步功能研究打下基础。方法 通过偶联转录 翻译系统体外表达EOLA1蛋白 ,并用变性凝胶电泳进行产物检测 ;构建EOLA1 EGFP(绿色荧光蛋白 )融合蛋白表达质粒 ,转染内皮细胞后瞬时表达 ,在激光共聚焦显微镜下观察EOLA1蛋白的亚细胞定位。结果 体外表达的EOLA1蛋白分子量约 18× 10 3,与预测结果相符合 ;EOLA1蛋白主要定位于细胞浆 ,少量表达于细胞核。结论 EOLA1属细胞内结构蛋白 ,可能是参与了炎症时细胞内信号转导。
- 梁自文杨宗城罗向东刘月明蔡文琴
- 关键词：内皮细胞亚细胞定位体外表达
- 内皮活化相关新基因EOLA1的亚细胞定位及组织表达被引量：3
- 2004年
- 目的 研究内皮细胞高表达脂多糖相关因子 1(EOLA1)基因的亚细胞定位和组织表达特性 ,为对其进行进一步的功能研究打下基础。方法 构建EOLA1 EGFP(绿色荧光蛋白 )融合蛋白表达质粒 ,转染内皮细胞后瞬时表达 ,在激光共聚焦显微镜下观察EOLA1蛋白的亚细胞定位 ;通过人多组织Northern杂交研究EOLA1基因的组织表达。结果 EOLA1蛋白在正常人各组织中呈选择性表达 ,在人的心脏、骨骼肌、肾脏、肝脏和胎盘组织中有较强的表达 ,在结肠、脾脏和小肠中有较弱的表达 ,而在脑、胸腺、肺和外周白细胞中无表达 ;EOLA1蛋白主要定位于细胞浆 ,少量表达于细胞核。结论 EOLA1属胞内蛋白 ,可能在细胞内信号转导中起着作用。
- 梁自文杨宗城罗向东刘月明蔡文琴
- 关键词：内皮细胞基因EOLA1亚细胞定位印迹法
- EOLA1基因小干扰RNA载体构建及其干扰效应检测被引量：1
- 2004年
- 目的 构建人类新基因内皮高表达脂多糖相关因子 1(EOLA1)特异性的小干扰RNA表达载体 ,并初步验证其对靶基因的抑制作用。方法 构建绿色荧光蛋白 (GFP) EOLA1融合蛋白表达载体pEGFP N2 /EOLA1,并转染人ECV30 4细胞株 ,G4 18压力筛选获得稳定表达株 ;针对靶基因EOLA1,设计靶点特异性的寡核苷酸 ,插入pSlincer3.1/H1质粒。转染重组质粒到稳定表达GFP EOLA1融合蛋白的ECV30 4细胞 ,通过观察转染细胞绿色荧光的强弱和Westernblot实验检测靶基因的抑制情况。结果 获得了稳定表达GFP EO LA1融合蛋白的细胞株 ,构建的小RNA干扰质粒siEOLA1能够抑制靶基因EOLA1的表达。结论 成功构建了针对EOLA1基因的siR NA质粒 ,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。
- 刘月明杨宗城梁自文苏踊跃罗向东陈渝
- 关键词：靶基因ECV304细胞转染小干扰RNA
- 小干扰RNA表达载体介导的EOLA1基因表达抑制研究被引量：1
- 2005年
- 目的 设计和构建EOLA1基因特异性的小干扰RNA质粒 ,并初步验证其对靶基因的抑制作用。方法 将靶点特异性的寡核苷酸连接到经ApaⅠ EcoRⅠ酶切线性化的pBS/U6质粒 ,测序验证 ,阳性重组质粒转染ECV3 0 4细胞 ,半定量RT PCR方法检测靶基因的表达 ,阳性重组质粒与pEGFP EOLA1共转染 ,观察外源报告基因绿色荧光蛋白的表达。结果 构建的阳性重组质粒转染能够抑制靶基因EOLA1mRNA的表达 ,并能够显著抑制EOLA1 EGFP融合蛋白的表达。结论 成功构建了针对EOLA1基因的siRNA质粒 ,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。
- 苏踊跃梁光萍罗向东刘月明陈渝陈建杨宗城
- 关键词：RNA干扰ECV304EOLA1
- 机制微粒皮对皮肤细胞的影响被引量：3
- 2003年
- 目的 观察微粒皮机制作微粒皮对皮肤细胞的损伤情况。 方法 将微粒皮机与人工剪制的微粒皮分成A、B两组 ,以透射电镜分别对两组微粒皮边缘细胞进行观察 ;用酶法试剂盒测定两组微粒皮上清液中琥珀酸脱氢酶的活性 ;以3 H TdR掺入法观察微粒皮细胞增殖情况。同时选择2 0例烧伤患者进行两组微粒皮移植 ,观察创面愈合时间。 结果 透射电镜观察显示 :A组微粒皮边缘细胞损伤较轻 ;其细胞培养上清液中琥珀酸脱氢酶的活性明显低于B组 ;3 H TdR掺入率明显高于B组。A组创面愈合时间明显短于B组 (P <0 .0 5 )。 结论 机制微粒皮对微粒皮边缘细胞的损伤轻 ,创面愈合时间短。
- 陈建设陈劲松刘贤志张宗仁沈光浴段红杰苏踊跃刘月明吕根法
- 关键词：皮肤细胞细胞损伤烧伤透射电镜
- 人类内皮活化相关新基因EOLA1的发现及初步研究被引量：13
- 2003年
- 为克隆一个在人脐静脉内皮细胞受脂多糖刺激后表达新序列标签ST5 5 (GenBank接受号BI12 16 4 6 )对应基因全长cDNA序列 ,作者在已知ST5 5序列基础上 ,采用快速扩增cDNA末端(RACE)技术延伸ST5 5的 3′和 5′末端以获取其全长cDNA序列 ,并经Northern印迹杂交验证 ,再对序列进行生物信息学分析 ,获得一个新的人类基因 ,命名为内皮细胞高表达脂多糖相关因子 1(EOLA1) (GenBank接受号AY0 74 889) ,该基因定位于人染色体Xq2 7.3,推导编码蛋白EOLA1包含 15 8个氨基酸 ,预测EOLA1是与内皮细胞活化相关的新基因 。
- 梁自文杨宗城罗向东刘月明罗小凤贾思远蔡文琴
- 关键词：脂多糖基因扩增人类基因
- 人内皮高表达脂多糖相关因子1强制表达模型的建立及对ECV304细胞增殖的影响被引量：4
- 2005年
- 目的设计和构建新基因内皮高表达脂多糖相关因子1(EOLA1)诱导表达载体,建立EOLA1强制表达模型,观察其对细胞增殖的影响。方法逆转录聚合酶链反应扩增EOLA1开放阅读框片段,引入NoⅠt和XhoⅠ酶切位点,定向亚克隆入可调控真核表达的载体pOPRSVⅠ,测序验证后共转染pOPRSVⅠ-EOLA1和pCMVLacⅠ质粒于ECV304细胞,经潮霉素和G418筛选,获得稳定转染细胞株。对异丙硫半乳糖苷(IPTG)诱导和非诱导的稳定转染细胞株进行计数,绘制细胞生长曲线。结果成功构建了EOLA1可调控真核表达载体pOPRSVⅠ-EOLA1。诱导后第4天,EOLA1稳定表达的ECV304细胞数量为(44±17)×104个,显著多于未诱导细胞的数量(27±11)×104个(P<0.01)。结论强制高表达EOLA1蛋白具有促进ECV304细胞增殖的作用。
- 陈渝梁自文刘月明张小容苏踊跃梁光萍陈建
- 关键词：内皮因子ECV304细胞增殖细胞计数
