刘越峰
- 作品数：26 被引量：50H指数：4
- 供职机构：十堰市太和医院更多>>
- 发文基金：十堰市科学技术研究与开发项目十堰市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- miR-222通过靶向RB1促进视网膜母细胞瘤细胞生长与侵袭被引量：3
- 2016年
- 背景与目的:视网膜母细胞瘤基因1(retinoblastoma 1,RB1)能够抑制多种肿瘤的发生、发展,且与细胞周期、分化、衰老、凋亡及生长抑制等调控密切相关。该研究旨在明确miR-222是否通过靶向RB1表达而促进视网膜母细胞瘤细胞的生长与侵袭,进一步揭示miR-222促瘤作用的分子机制。方法:将miR-222(miR-222模拟物)+RB1-wt(野生型RB1的3’-非翻译区的荧光素酶报告载体)、miR-NC(无关序列对照)+RB1-wt、miR-222+RB1-mut(突变型RB1的3’-非翻译区的荧光素酶报告载体)及miR-NC+RB1-mut共转染人视网膜母细胞瘤细胞株Y79,并采用单光子检测荧光素酶活性。采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测RB1表达水平的改变。将miR-222与miR-NC、RB1(pc DNA3.1-RB1)与vector(pc DNA3.1)、miR-222+RB1及miR-NC+vector转染Y79细胞,MTS检测细胞生长增殖活性,Transwell侵袭实验检测Y79细胞生长与侵袭能力的影响。结果:与miR-NC+RB1-wt组比较,共转染miR-222+RB1-wt组的荧光素酶活性强度降低了约56.67%(P<0.05)。与miR-NC比较,miR-222组RB1蛋白水平显著下调(P<0.05)。转染miR-222组细胞生长速度显著高于miR-NC组(P<0.05)。与pc DNA3.1组比,pc DNA3.1-RB1组可显著抑制Y79细胞的生长(P<0.05),而miR-222+pc DNA3.1-RB1组和miR-NC+pc DNA3.1组比较,细胞生长速度差异无统计学意义(P>0.05)。转染miR-222组穿过基底膜的细胞数分别为(193±10),与对照组(144±11)比较能明显加快Y79细胞的穿膜能力,差异有统计学意义(P<0.05)。而miR-NC+pc DNA3.1组和miR-222+pc DNA3.1-RB1组比较,穿过基底膜的细胞数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-222通过靶向调控RB1表达而促进视网膜母细胞瘤细胞的生长与侵袭。
- 刘越峰张勇钟晓东罗卫民
- 关键词：视网膜母细胞瘤MIR-222RB1
- 二烯丙基二硫对视网膜母细胞瘤Y79细胞生长、侵袭的影响及机制探讨
- 2015年
- 目的观察二烯丙基二硫(DADS)对视网膜母细胞瘤Y79细胞生长、侵袭的影响,并探讨其机制。方法培养人视网膜母细胞瘤Y79细胞,分为miRNA阴性对照组(转染40μmol/L scramble)、miR-222M组(转染40μmol/L miR-222-mimics)、DADS阴性对照组(加入10μmol/L DMSO)、DADS组(加入200μmol/L DADS)、DADS+miR-222I组(转染40μmol/L miR-200b-inhibitors和200μmol/L DADS)。采用qRT-PCR法检测不同浓度DADS处理的Y79细胞中的miR-222,采用MTT法和Transwell侵袭实验分别检测各组细胞增殖和侵袭情况。结果 0、25、50、100、200和400μmol/L不同浓度的DADS处理的Y79细胞中的miR-222相对表达量分别为2.823±0.250、2.343±0.226、1.955±0.267、1.567±0.096、0.875±0.189、0.718±0.126。miRNA阴性对照组、miR-222M组、DADS阴性对照组、DADS组、DADS+miR-222I组Y79细胞OD570值分别为0.727±0.167、0.949±0.070、0.712±0.178、0.497±0.126、0.351±0.102,Transwell穿膜细胞数分别为128±8、179±16、127±12、76±8、45±14,miR-222M组、DADS组、DADS+miR-222I组分别与miRNA阴性对照组、DADS阴性对照组比较,DADS组与DADS+miR-222I组比较,P均<0.05。结论 DADS通过下调miR-222的表达抑制视网膜母细胞瘤Y79细胞的生长与侵袭。
- 刘越峰罗卫民张勇钟晓东
- 关键词：视网膜母细胞瘤微小RNA二烯丙基二硫细胞侵袭
- 视网膜脱落病人术后用体位垫
- 本实用新型视网膜脱落病人术后用体位垫，属于医疗器械领域。目的是提供一种能与普通病床配合，为患者俯卧创造舒适条件的视网膜脱落病人术后用体位垫。包括本体，在本体的一端设有面部支撑结构，面部支撑结构包括额头支撑块和下巴支撑块，...
- 樊琳王娜娜刘越峰孙荣黄燕汤咏梅
- 文献传递
- 二十二碳六烯酸抑制氧化应激状态下人视网膜色素上皮细胞凋亡被引量：4
- 2016年
- 目的：观察二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）对外源性H2O2诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响及分子机制。方法：体外培养人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19,加入终浓度为12.5 mol/L的H2O2诱导氧化应激,随后用30-100μmol/L DHA作用细胞4-24 h;real-time PCR和Western blot分别检测血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）mRNA和蛋白的表达;比色法分析HO-1酶活性;荧光探针检测活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）的产生;免疫荧光检测转录因子NF-E2相关因子2（NF-E2-related factor 2,Nrf2）的核转位。最后通过HO-1 siRNA干扰后,流式细胞术观察其对ARPE-19细胞凋亡的影响。结果：DHA能以浓度依赖性方式诱导ARPE-19细胞表达HO-1 mRNA和蛋白,同时,HO-1的酶活性也随着DHA浓度的递增而增强;DHA处理也能诱导Nrf2核转位。此外,H2O2处理可促进ARPE-19细胞凋亡,并诱导其产生ROS。同时给予100μmol/L DHA处理后,细胞凋亡率和ROS生成显著降低。转染HO-1 siRNA或用HO-1抑制剂Zn PP处理后,可明显降低DHA对细胞凋亡率和ROS的抑制作用。结论：DHA可能通过Nrf2途径诱导视网膜色素上皮细胞表达HO-1,从而发挥对细胞的保护作用。
- 刘越峰罗卫民张勇钟晓东
- 关键词：二十二碳六烯酸视网膜色素上皮细胞血红素氧合酶-1
- 穿心莲内酯对肺癌细胞NF-κB的活性以及MMP-9表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:观察穿心莲内酯(Andrographolide,AD)对肺癌H3255细胞的生长抑制作用以及对基质金属蛋白酶(matrix metalloprotein,MMP)-9表达与活性的影响,并研究其可能的分子机制。方法:体外培养H3255细胞,MTT法检测细胞的增殖情况;RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达,明胶酶谱实验检测其酶活性;Western blot检测NF-κB p65亚基的核转位以及IκB磷酸化情况。结果:AD能以剂量和时间依赖性方式抑制H3255细胞增殖;不同浓度的AD能降低MMP-9的mRNA表达水平和酶活性。结论:AD对肺癌细胞增殖具有抑制作用,其机制可能与抑制I-κBα磷酸化而抑制NF-κB激活,最终抑制MMP-9的活性有关。
- 罗卫民罗湘玉刘越峰
- 关键词：穿心莲内酯肺癌细胞核因子ΚB
- 二十二碳六烯酸经Rac1/NAPDH氧化酶/ROS/p38通路诱导ARPE-19细胞表达HO-1的机制
- 2016年
- 目的观察二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)诱导人视网膜色素上皮细胞表达血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)^(-1)的分子机制。方法培养人视网膜色素上皮细胞系ARPE^(-1)9,加入30~100μmol·L^(-1)DHA作用4~24 h。ELISA法检测Rac1的活性,Western blot检测HO^(-1)的表达及NADPH氧化酶p47phox亚基和p38的磷酸化;荧光探针H2DCFDA检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生;采用Rac1抑制剂NSC23766、NADPH氧化酶抑制剂DPI、ROS清除剂NAC预处理细胞,检测其对HO^(-1)表达的影响。结果 30μmol·L^(-1)、50μmol·L^(-1)和100μmol·L^(-1)DHA作用ARPE^(-1)9细胞10 min后,Rac1的活性分别为(126.41±11.25)%、(185.05±15.41)%和(260.52±17.83)%,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。同时,100μmol·L^(-1)DHA也能诱导p47phox亚基磷酸化。30μmol·L^(-1)、50μmol·L^(-1)和100μmol·L^(-1)DHA处理4 h后,细胞内ROS的含量分别为(132.52±8.33)%、(177.94±10.24)%和(211.62±7.14)%,与对照组相比,差异也均有统计学意义(均为P<0.05)。对照组细胞中磷酸化p38含量为0.16±0.01;当给予30μmol·L^(-1)、50μmol·L^(-1)和100μmol·L^(-1)DHA处理30 min后,磷酸化p38含量分别为0.28±0.03、0.37±0.02和0.45±0.00,与对照组相比,差异也均有统计学意义(均为P<0.05);采用Rac1抑制剂NSC23766或NADPH氧化酶抑制剂DPI处理后,p47^(phox)亚基的磷酸化水平和细胞内ROS水平显著降低;而采用NAC处理后,可抑制DHA诱导ARPE^(-1)9细胞表达HO^(-1)。结论 DHA可能通过Rac1/NAPDH氧化酶/ROS/p38通路途径诱导视网膜色素上皮细胞表达HO^(-1),从而发挥对细胞的保护作用。
- 刘越峰罗卫民张勇钟晓东
- 关键词：二十二碳六烯酸视网膜色素上皮细胞血红素氧合酶-1
- 二十二碳六烯酸对人视网膜色素上皮细胞中血红素氧合酶-1表达的诱导作用被引量：1
- 2016年
- 背景 氧化应激是年龄相关性黄斑变性发生的重要机制.研究表明,二十二碳六烯酸（DHA）在视网膜光感受细胞的发育中发挥重要作用,并可上调血红素氧合酶1（HO-1）的表达,从而发挥抗氧化效应,但DHA是否能影响人视网膜色素上皮（RPE）细胞表达HO-1尚未阐明. 目的 观察DHA对体外培养的RPE中HO-1表达的影响及其分子机制. 方法 对人RPE细胞系ARPE-19进行培养,分别用30、50、100和120 μmol/L DHA作用4～24 h,以不含DHA培养的细胞作为对照组.采用乳酸脱氢酶（LDH）法检测DHA对细胞的毒性;分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组细胞中HO-1 mRNA及其蛋白的相对表达;采用比色法分析各组细胞中HO-1酶活性变化情况;采用荧光探针H2DCFDA检测细胞中活性氧簇（ROS）的相对比例,并采用免疫荧光技术检测各组培养细胞中核转录因子-E2相关因子2（Nrf2）的核转位情况;分别采用ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预法和Nrf2小干扰RNA（siRNA）转染法作用于培养的细胞,采用Western blot法检测细胞中Nrf2蛋白的表达,并观察其对细胞中HO-1蛋白表达量的影响. 结果 0、30、50、100和120 μmol/L DHA作用于ARPE-19细胞后24 h,培养上清液中LDH漏出率的总体比较差异有统计学意义（F=8.14,P＜0.05）,其中120 μmol/L DHA作用后细胞中LDH漏出率明显高于0、30、50、100 μmol/L DHA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.不同浓度DHA作用ARPE-19细胞后8h,HO-1mRNA及其蛋白的相对表达量以及HO-1的酶活性总体比较差异均有统计学意义（F=16.24,P＜0.05;F=11.34,P＜0.05;F=11.81,P＜0.05）,其中30、50、100 μmol/L DHA组细胞中HO-1 mRNA及其蛋白的相对表达量以及HO-1的酶活性均明显高于0μmol/L DHA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.不同浓度DHA作用ARPE-19细胞后4h细胞内ROS相对荧光强度、细胞核Nrf2阳性细胞比例的总体比较差异均有统计学意义（F=11
- 刘越峰罗卫民张勇钟晓东
- 关键词：二十二碳六烯酸
- 白藜芦醇对大鼠糖尿病性白内障抗氧化损伤的保护作用被引量：10
- 2012年
- 目的探讨白藜芦醇对糖尿病性白内障大鼠抗氧化损伤的保护作用。方法 90只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和白藜芦醇治疗组,每组各30只。模型组及白藜芦醇治疗组采用链脲佐菌素诱发糖尿病,白藜芦醇治疗组按400mg.kg-1体质量给予白藜芦醇灌胃,灌注后4周、8周、12周观察3组大鼠晶状体混浊度的变化情况;同时检测晶状体内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathi-one peroxidase,GSH-PX)及过氧化氢酶(catalase,CAT)的变化;采用RT-PCR检测晶状体中铜锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn superoxide dismutase,CuZnSOD)mRNA表达水平。结果正常对照组大鼠晶状体始终透明。灌注后12周白藜芦醇治疗组晶状体混浊度高于正常对照组(χ2=8.26,P<0.05),但与糖尿病模型组相比明显减轻(χ2=14.72,P<0.05)。糖尿病模型组大鼠晶状体中SOD、GSH-PX以及CAT活性分别为:(10.39±1.25)U·mg-1、(24.36±1.05)U·mg-1、(1.62±0.24)U·mg-1,明显低于正常对照组的(40.16±1.87)U·mg-1、(67.86±1.24)U·mg-1、(5.57±1.54)U·mg-1。与糖尿病模型组相比,白藜芦醇能增强SOD、GSH-PX和CAT活性,分别为(29.06±1.33)U·mg-1、(47.58±2.35)U·mg-1、(3.26±0.47)U·mg-1。此外,白藜芦醇还能上调糖尿病大鼠晶状体内CuZnSODmRNA的表达(P<0.05)。结论白藜芦醇能增加晶状体抗氧化酶活力,能从多个环节发挥对糖尿病白内障的抗氧化作用,从而延缓白内障的发生和发展。
- 钟晓东罗卫民刘越峰余锦强李凌王莹李玉霞
- 关键词：白藜芦醇糖尿病性白内障
- 金樱子对大鼠糖尿病性白内障抗氧化作用的实验研究
- 目的: 本课题在糖尿病性白内障动物模型建立的基础上,观察金樱子(Rosa Laevigata Mickx,RLM)对大鼠糖尿病性白内障氧化损伤的保护作用,从而探讨其抗氧化作用机制。 研究方法: 对70只SD大鼠行裂...
- 刘越峰
- 关键词：金樱子链脲佐菌素糖尿病性白内障抗氧化作用动物模型
- 文献传递
- 金樱子联合氯沙坦对多柔比星心肌毒性的影响
- 2014年
- 目的:观察金樱子(Rosa Laevigata Michx,RLM)联合氯沙坦(losartan,LOS)对多柔比星(Doxorubicin,DOX)诱导的心肌损伤的影响。方法:SD大鼠随机分为5组:对照组、模型组、RLM组、LOS组及联合组。除对照组仅给予等体积0.9%氯化钠溶液外,其余4组采用DOX分6次腹腔注射,使其累计剂量达15 mg/kg进行造模。RLM和LOS分别按5 g/kg和0.7 mg/kg剂量单独或联合给予灌胃。测量血清中TNF-α、肌酸激酶(creatine kinase,CK-MB)及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量;同时采用比色法测量过氧化氢酶(hydrogen peroxidase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活力以及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量。结果:与对照组比较,模型组心脏质量指数、血清TNF-α、CK-MB、LDH水平均升高,心肌组织中MDA、NO含量升高,SOD和CAT活性降低(P<0.05)。与模型组比较,给予RLM或/和LOS干预6周后,心脏质量指数、血清TNF-α、CK-MB、LDH水平均下调,心肌组织中MDA、NO含量均降低,SOD和CAT活性均升高(P<0.05),且联合组效应较单独给药组更加明显(P<0.05)。结论:RLM可协同LOS发挥对DOX诱导的心肌毒性的保护作用,其作用可能与其抗氧化和抗炎症特性有关。
- 罗卫民刘越峰刘华罗湘玉
- 关键词：金樱子氯沙坦多柔比星氧化应激
