单云峰
- 作品数：33 被引量：101H指数：6
- 供职机构：江苏省疾病预防控制中心更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学哲学宗教农业科学更多>>
- DNA甲基转移酶3A siRNA真核表达载体的构建和鉴定
- 2008年
- 目的:构建DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferases 3A,DNMT3A)siRNA重组质粒稳定表达载体,为进一步探讨DNMT3A在多种生物学过程及肿瘤发生发展中的机制提供工具。方法:依据DNMT3A基因的cDNA序列,利用siDESIGN软件获得RNAi靶位点后设计出对应的siRNA寡核苷酸模板,体外合成寡核苷酸片段经退火形成短双链,克隆到真核表达载体pSUPER-EGFP1中,构建DNMT3A siRNA重组质粒载体,经酶切鉴定后转染人肝癌细胞系SMMC-7721,荧光实时定量PCR初步分析DNMT3A经RNA干涉后的沉默效应。结果:成功构建了靶向DNMT3A基因的siRNA重组稳定表达载体,此载体有效地降低了肝癌细胞系中DNMT3A基因的表达水平。结论:通过该方法初步确定了沉默DNMT3A基因的较佳靶点。
- 赵主江樊红单云峰张建琼
- 关键词：SIRNA
- 不同代次大鼠骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin信号通路表达分析
- 2019年
- 目的观察不同代次大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖能力及其纤维分化倾向,为临床治疗及组织工程种子细胞的选择提供依据。方法采用贴壁培养法分离培养大鼠MSCs,流式细胞术鉴定细胞表面标记; MTT法检测不同代次MSCs的增殖情况;蛋白质印迹法(Western Blot)检测MSCs Wnt通路相关蛋白的表达情况;实时聚合酶链式反应(Realtime-PCR)法检测不同代次MSCs中成纤维细胞分子标记表达。结果流式细胞术鉴定结果证实我们培养的大鼠MSCs符合间充质干细胞的特征,且纯度高; MTT法检测显示P3代之后细胞的增殖能力明显高于P1、P2代,Western Blot检测显示细胞内Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达随培养代次增强,Realtime-PCR法检测结果证实P9代细胞开始出现成纤维分化倾向。结论 MSCs作为种子细胞不宜超过P9代,P3～P7代具有纯度高、倍增快等优点,是能够满足组织工程细胞植入的种子细胞。
- 单云峰宋红焕李国莉邵燕陈诚竺丽梅李燕
- 关键词：骨髓间充质干细胞WNT/Β-CATENIN信号通路
- 一种恒温快速检测甲型H1N1流感病毒核酸的方法及试剂盒
- 本发明涉及一种检测病毒核酸的方法及试剂盒，属于生物技术领域。本发明是一种快速、等温的甲型H1N1流感病毒RNA扩增方法，整个反应有赖于AMV逆转录酶、T7RNA多聚酶和核酸酶H(RNase H)共同协作而完成，不需特殊仪...
- 崔仑标葛以跃史智扬祁贤郭喜玲赵康辰单军单云峰戚宇华汪华
- 甲型H1N1(2009)流感流行后流感样病例呼吸道病原检测分析被引量：3
- 2011年
- 目的:了解甲型H1N1(2009)流感流行后的流感样病例(ILI)中,除流感病毒外的相关病原分布,为ILI患者临床治疗、流行病学调查提供参考。方法:收集流感监测哨点医院393份ILI咽拭子标本提取核酸,应用实时荧光PCR方法进行20种相关病原比对检测,分析各病原的阳性率与构成比。结果:检测出阳性咽拭子标本51例,分属13种共计64株病原体,其中阳性率较高的为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、冠状病毒。另有13例为两种病原体混合感染,占阳性标本数的25.49%。结论:ILI的病原构成比较复杂,且存在混合感染,临床治疗与流行病学调查均应引起重视。
- 单云峰葛以跃崔仑标赵康辰单军戚宇华崔岚秦圆方祁贤霍翔
- 关键词：流感样病例病原体实时荧光PCR
- H5N1亚型禽流感病毒聚合酶酸性蛋白真核表达载体的构建与表达被引量：4
- 2014年
- 目的构建甲型禽流感病毒H5N1亚型聚合酶酸性蛋白(PA)的真核表达载体,并表达其编码蛋白PA。方法采用RT-PCR法扩增PA基因,克隆至pMD18-T载体中构pMD18-T-PA质粒。双酶切pMD18-T-PA质粒与pXJ40-HA质粒后,胶回收并连接目的片段,构建真核表达载体pXJ40-HA-PA,鉴定后转染293T细胞。采用免疫印迹法(Western blot)鉴定重组PA蛋白的表达。结果成功构建了禽流感病毒H5N1亚型PA基因的真核表达载体,并在真核细胞中成功表达出分子量为75kD的重组蛋白。结论成功构建禽流感病毒H5N1亚型PA基因的真核表达载体,为后期进一步研究PA蛋白的功能奠定了基础。
- 单云峰李燕迟莹卞倩
- 关键词：H5N1禽流感病毒真核表达克隆
- 非综合征耳聋大家系永生细胞系的建立及几种EB病毒转化外周血淋巴细胞建系方法的探讨被引量：12
- 2005年
- 永久保存珍贵的家系材料,是对该家系进行深入研究的基础,为此采用EB病毒(Epstein Barrvirus,EBV)转化淋巴细胞的方法对中国江苏淮阴地区非综合征耳聋大家系行建系工作。该家系患者呈典型的母系遗传特征,且研究发现患者中均具有线粒体DNA12SRNAA1555G突变,是迄今世界上最大的非综合征耳聋家系之一,在该家系的建系过程中使用了4种不同的方法。建系结果分别为:微量全血法1株,冻存全血法1株,冻存白细胞法14株及环孢霉素A(CyA)法36株,共计52株。文章就建系工作及这4种转化方法作一简单探讨。
- 赵苏瑛张海军徐春宏单云峰单祥年史庭燕
- 关键词：EB病毒永生细胞系
- 应用蛋白组方法筛选血浆中乙肝病毒PreS1结合蛋白被引量：2
- 2009年
- 目的筛选血浆中乙型肝炎病毒PreS1结合蛋白。方法表达纯化了PreS1-谷胱甘肽-S-转移酶（glutathione—S-transferase，GST）融合蛋白，利用该蛋白与血浆进行Pull—down实验，并设立GST与血浆Pull—down，GST、PreS1-GST与PBS Pull—down对照，Pull-down产物进行双向电泳分离（2-DE），差异蛋白点通过质谱鉴定。结果成功表达纯化出PreS1-GST融合蛋白，通过双向电泳分析发现一个PreS1特异结合蛋白，经质谱鉴定为含锚蛋白重复序列的蛋白57（ANKRD57）。结论锚蛋白重复序列的主要功能是介导蛋白质与蛋白质之间的相互作用，ANKRD57与PreS1特异结合后的生理功能值得深入研究。
- 崔仑标葛以跃史智扬焦永军唐震单云峰单军汪华
- 关键词：PRES1结合蛋白蛋白组学
- 树状DNA原位杂交技术在子宫颈癌人乳头状瘤病毒DNA分型检测和细胞学定位中的应用被引量：2
- 2005年
- 史庭燕单祥年施燕峰赵苏瑛单云峰
- 关键词：子宫颈癌人乳头状瘤病毒病毒DNA
- Stx1-A亚单位的原核表达、复性及抗原性鉴定
- 2008年
- 目的构建志贺毒素1-A亚单位(Stx1-A)原核表达质粒,使其在大肠埃希菌中表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其抗原性及应用价值。方法以大肠埃希菌O157DNA为模板扩增Stx1-A基因,重组克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基硫代-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,包涵体经镍柱柱上复性和纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定。结果重组质粒经双酶切鉴定和测序分析后证实构建成功。重组蛋白经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,其表达量占细菌总蛋白量的15%左右,主要以包涵体形式存在,通过镍柱柱上复性获得纯化的可溶性Stx1-A蛋白,纯度达95%以上,Western印迹检测显示特异性条带。结论成功构建了pET32a(+)/Stx1-A重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Stx1-A蛋白,为进一步制备抗Stx1-A抗体和研究其生物学功能奠定了基础。
- 葛以跃崔仑标史智扬焦永军曾晓燕戚宇华唐震单云峰吴涛汪华
- 关键词：志贺样毒素原核表达
- 一种恒温快速检测甲型H1N1流感病毒核酸的方法及试剂盒
- 本发明涉及一种检测病毒核酸的方法及试剂盒，属于生物技术领域。本发明是一种快速、等温的甲型H1N1流感病毒RNA扩增方法，整个反应有赖于AMV逆转录酶、T7RNA多聚酶和核酸酶H(RNase H)共同协作而完成，不需特殊仪...
- 崔仑标葛以跃史智扬祁贤郭喜玲赵康辰单军单云峰戚宇华汪华
- 文献传递
