叶文广
- 作品数：14 被引量：66H指数：5
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省中医药管理局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- hsa-miR-381过表达慢病毒载体的构建、转染和表达被引量：1
- 2017年
- 目的构建hsa-miR-381过表达慢病毒载体病毒载体,并对其在食管鳞癌TE10细胞中miR-381表达调节效果进行鉴定。方法利用PCR法扩增miR-381基因序列,将目的基因miR-381克隆到携带Green&Puro的慢病毒载体LV3中,经双酶切及测序鉴定后大量抽提;利用脂质体将含目的基因的重组质粒和包装质粒p Gag/Pol、pRev、p VSV-G共转染293T细胞;用得到的慢病毒转染TE10细胞,通过荧光显微镜观察转染状况,实时荧光定量PCR分析转染前后miR-381的表达。结果酶切与测序结果证明成功构建重组质粒,并成功包装成慢病毒,实验组病毒滴度为2×108TU/ml,空白阴性对照组病毒滴度为2×108TU/ml。TE10细胞转染过表达慢病毒后miR-381的表达升高,TE10-381组has-miR-381的表达丰度是TE10组的456.05倍。结论 LV3-hsa-miR-381慢病毒载体构建成功,并能明显增加TE10细胞中miR-381的表达量。
- 周苏娜叶文广崔耀友梁军张明鑫
- 关键词：慢病毒载体食管鳞癌基因转染
- miR-302b在结肠癌组织中的表达及意义被引量：6
- 2017年
- 目的:检测不同结肠组织(结肠癌、癌旁组织、结肠腺瘤性息肉组织)中miR-302b的表达差异,明确其与结肠癌临床病理参数的关系.方法:采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测30例结肠腺瘤组织和60对结肠癌及其癌旁组织中miR-302b的表达,分析结肠癌中miR-302b表达与临床病理特征之间的关系.结果:miR-302b在结肠癌组织、腺瘤性息肉、癌旁组织的表达依次升高,且各组间表达的差异有统计学意义(P<0.05).在结肠癌中,miR-302b在不同肿瘤分化程度、淋巴结是否转移、有无远处转移组间表达有显著差异(P<0.05).结论:miR-302b在结肠癌中低表达,提示其可能发挥抑癌基因的功能.
- 崔曼莉叶文广王景杰张明鑫
- 关键词：结肠癌
- 电针足三里穴对糖尿病胃轻瘫大鼠延髓多巴胺能神经元和星形胶质细胞活性的影响被引量：15
- 2012年
- 目的:研究电针足三里穴对糖尿病胃轻瘫大鼠延髓多巴胺能神经元内酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和星形胶质细胞内胶质原纤维酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)表达的影响。方法:32只实验大鼠分为空白对照(空白)组、糖尿病胃轻瘫模型(模型)组、模型组+电针足三里穴(足三里)组和模型组+电针非经非穴(非经非穴)组(每组8只)。模型制备采用腹腔注射5%四氧嘧啶和熟地灌胃诱导的方法。实验3周后取大鼠延髓进行抗TH和抗GFAP的单一和双重免疫组化染色,观察并记数TH和GFAP在延髓内的表达。结果:与空白组比较,各实验组TH阳性多巴胺能神经元和GFAP阳性星形胶质细胞集中表达于延髓迷走孤束复合体内,有明显的定位特点;高倍镜下观察到TH阳性神经元周围有大量GFAP阳性星形胶质细胞包绕。各组TH和GFAP表达以模型组最高;而足三里组TH阳性多巴胺能神经元数量明显减少(31.3±4.4→16.8±3.2),GFAP阳性产物表达明显降低(113.8±7.6→95.4±8.4),且它们之间有统计学意义(P<0.01);非经非穴组与模型组之间差异没有统计学意义。结论:针刺调节糖尿病胃运动功能障碍大鼠与其调控延髓多巴胺能神经元及其周围的星形胶质细胞功能活动有关。
- 秦明杨琦王景杰饶志仁赵曙光黄裕新叶文广姚庆林
- 关键词：电针胃电延髓星形胶质细胞
- 靶向Rap1b基因shRNA慢病毒载体的构建及其对食管鳞癌细胞Rap1b基因表达的沉默被引量：2
- 2014年
- 目的:设计以Rap1b基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒表达载体并转染食管鳞癌细胞,观察其在食管鳞癌细胞中的表达。方法:应用重组DNA技术,将设计好的4条基因特异性shRNA序列插至慢病毒表达载体pGLV3-GFP中,构建pGLV3-GFP-Rap1b-shRNA1/2/3/4。并应用脂质体法转染293T细胞,进行病毒包装及滴度测定。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染食管鳞癌细胞株Eca109后Rap1b基因的表达情况。结果:测序证实慢病毒载体构建成功,并测定滴度为1×109TU/ml,pGLV3-GFP-Rap1b-shRNA3/4转染后72h和96h均可显著抑制Rap1b基因mRNA及蛋白的表达。结论:成功构建Rap1b基因的shRNA慢病毒载体,所介导的RNAi能有效抑制食管鳞癌细胞Eca109中Rap1b基因的表达。
- 张明鑫樊晴伶叶文广姚青林闻勤生王景杰
- 关键词：短发夹状RNA慢病毒载体食管鳞癌
- 内镜下亚离子凝固术对Barrett’s食管的治疗
- 2013年
- 目的探讨氩等离子凝固术(APC)治疗Barrett’s食管(BE)后是否复发以及严重程度。方法观察APC治疗后患者食管下段BE黏膜的内镜变化、BE复发率和再治疗率。结果全年内镜检查13 926人中,检出可疑BE患者690例,占就诊人群的1.96%,占接受内镜检查患者的4.95%。接受治疗的患者265例,占可疑BE的38.41%。内镜下组织活检30例,占可疑BE例数的4.35%,全部符合BE病理诊断。术后1个月复发BE例数11例,占总治疗例数的4.15%,术后3月复发BE例数3例,占治疗总例数的1.13%;术后6月复发BE例数2例,占治疗总例数的0.75%;术后1年复发BE例数3例,占总治疗例数的1.13%,内镜下可见明显改变,病变上延最高达食管27 cm处。结论 APC治疗BE后出现柱状上皮肠化生复发率较高,非常有必要持续对这些患者进行观察随访。可疑BE的治疗指征、APC治疗BE的适应证及时机有待进一步研究。
- 姚红娟唐华赵曙光叶文广赵保民
- 关键词：反流性食管炎食管腺癌
- miRNA-381表达及其与鼻咽癌放疗敏感性的关系被引量：4
- 2017年
- 目的:观察人鼻咽癌细胞及组织中miRNA-381的表达变化,探讨其与放射敏感性的关系。方法:采用RT-PCR法测定正常鼻咽部上皮细胞株NP460,人鼻咽癌细胞株CNE-2,放疗抵抗细胞株CNE-2R及20例符合纳入标准的鼻咽癌组织中miRNA-381的表达。完成放疗后3个月接受影像学复查,分析患者的近期放疗疗效。所有病例都有2年或2年以上随访记录,根据随访记录制定放疗敏感性评估标准。采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性。结果:入组患者根据放疗敏感性评估标准,分为放疗抵抗组(7例)和放疗敏感组(13例),放疗抵抗组的miRNA-381表达显著低于放疗敏感组(P<0.01)。克隆形成实验结果显示细胞的放疗敏感性为NP460>CNE-2>CNE-2R,且有显著统计学差异(P<0.01)。RT-PCR结果显示正常鼻咽部上皮细胞株NP460中miRNA-381表达量高于鼻咽癌细胞株,放疗抵抗细胞株CNE-2R中miRNA-381表达量远低于其亲代细胞株CNE-2。近期疗效和鼻咽癌组织中miRNA-381相对表达量的相关性分析显示miRNA-381相对表达量与近期疗效呈正相关(r=0.77,P<0.000 1)。结论:miRNA-381在放疗抵抗的鼻咽癌细胞及临床标本中的表达量显著低于放疗敏感的细胞及组织。miRNA-381相对表达量越高的鼻咽癌患者接受根治性放疗后的近期疗效越好。
- 周苏娜张明鑫张琰君何东杰邵秋菊梁军叶文广
- 关键词：鼻咽癌放疗敏感性
- 晚期食管鳞癌放疗联合口服替吉奥治疗的疗效被引量：7
- 2017年
- 目的:评估口服替吉奥联合三维适形放疗治疗局部晚期食管癌的疗效和安全性。方法:48例局部晚期食管癌患者进入研究,随机分为单纯放疗组(24例)和放疗联合替吉奥化疗组(24例)。比较两组患者的疗效、生存时间和不良反应。结果:单纯放疗组客观缓解率62.50%,放化疗联合组客观缓解率91.67%,有显著统计学差异(P<0.05)。两组不良反应、生活质量无显著差异。单纯放疗组3年生存率32.33%,放化疗联合组3年生存率61.34%,有显著统计学差异(P<0.05)。结论:三维适形放疗同步口服替吉奥化疗治疗晚期食管鳞癌可以有效提高患者的治疗效果,改善预后,不良反应可以耐受,是一种安全有效的治疗方案。
- 周苏娜张明鑫张琰君何东杰常浩邵秋菊梁军叶文广
- 关键词：食管癌同步放化疗
- MiRNA-381表达及其与食管鳞癌放疗敏感性的关系被引量：3
- 2014年
- 目的:观察人食管鳞癌细胞及组织中miRNA-381的表达变化,探讨其与放射敏感性的关系。方法:采用RT-PCR法测定人食管鳞癌细胞TE-1、TE-10、TE-11及20例符合纳入标准的食管鳞癌组织中miRNA-381的表达。完成放疗后1个月接受影像学复查,分析患者的近期放疗疗效。采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性。结果:入组患者根据近期疗效分为放疗抵抗组(6例)和放疗敏感组(14例),放疗抵抗组的miRNA-381表达显著低于放疗敏感组(P<0.05)。克隆形成实验结果显示细胞的放疗敏感性为TE-11>TE-10>TE-1,且有显著统计学差异(P<0.05)。RT-PCR结果显示放疗最敏感的TE-11细胞中miRNA-381表达量最高,而放疗抵抗的TE-1细胞中miRNA-381表达量最低。近期疗效和食管鳞癌组织中miRNA-381相对表达量的相关性分析显示miRNA-381相对表达量与近期疗效呈正相关(r=0.72,P<0.05)。结论:MiRNA-381在放疗敏感的食管鳞癌细胞及临床标本中的表达量显著高于放疗抵抗的细胞及组织。MiRNA-381相对表达量越高的食管鳞癌患者接受根治性放疗后的近期疗效越好。
- 周苏娜叶文广邵秋菊梁军张明鑫
- 关键词：食管鳞癌放疗敏感性
- hsa-miR-150-5p抑制序列慢病毒载体的构建、转染和表达被引量：1
- 2018年
- 目的构建携带抑制表达hsa-miR-150-5p的慢病毒载体,建立稳定表达该载体的HT-29细胞。方法设计并合成hsa-miR-150-5p抑制序列,并克隆到工具载体GV-280(h U6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin)构建重组载体,将重组载体与p Helper1.0载体和p Helper2.0载体共转染293T细胞,得到所需的病毒液LV-hsa-miR-150-5p-down,最后感染HT-29细胞,并通过嘌呤霉素筛选出稳定感染的细胞株。荧光显微镜观察HT-29细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,RT-PCR检测hsa-miR-150-5p在HT-29细胞中的表达水平。结果测序结果证明成功构建重组质粒,并成功包装成慢病毒,实验组(转染过表达LV-hsa-miR-150-5p-down病毒)病毒滴度为5×10~8TU/ml,阴性对照组(转染阴性LV-NC病毒)病毒滴度为8×10~8TU/ml。所得病毒液感染HT-29细胞并筛选出稳定细胞株HT29-150-5p-down。荧光显微镜观察带有绿色荧光蛋白的目的重组质粒在人结肠癌HT-29细胞中高表达,PCR进一步验证了这一结果。结论 LV-hsa-miR-150-5p-down慢病毒载体构建成功,HT-29细胞稳定表达该载体,为后续miR-150的功能研究奠定基础。
- 叶文广王景杰张明鑫周苏娜
- 关键词：慢病毒载体
- miR-520a调控ErbB4的表达并抑制食管鳞癌细胞的增殖与侵袭被引量：12
- 2014年
- 目的探讨miR-520a对ErbB4的调控及其对食管鳞癌生物学行为的影响。方法应用分子生物学技术构建miR-520a的真核表达质粒、ErbB4的野生型及突变性3'-UTR报告基因,报告基因分析miR-520a对ErbB4的调控,蛋白印迹检测转染miR-520a对ErbB4蛋白表达水平的影响。应用MTT、Transwell侵袭试验探讨miR-520a对食管鳞癌细胞株增殖、凋亡及侵袭等生物学行为的影响。结果报告基因分析显示miR-520a能够下调ErbB4的野生型3'-UTR报告基因的荧光表达,而对突变性报告基因的荧光表达影响不大。蛋白印迹显示miR-520a可以显著抑制ErbB4的蛋白表达水平。此外,miR-520a可以显著抑制细胞增殖并抑制侵袭。结论 miR-520a调控ErbB4的表达并能够抑制食管鳞癌细胞的增殖与侵袭,miR-520a在食管鳞癌中发挥抑癌基因功能。
- 叶文广姚青林张明鑫闻勤生王景杰
- 关键词：ERBB4食管鳞癌增殖ERBB4
