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帕金森氏病相关蛋白Pink1促进自噬的研究被引量：4: 2013年; 目的探讨帕金森氏病相关蛋白Pink1在自噬过程的作用。方法采用RT-PCR扩增基因片段,构建Pink1﹑自噬抑制蛋白Bcl-XL和自噬激活因子Beclin1等重组质粒,并通过慢病毒系统建立稳定表达Pink1-Flag的HEK293细胞株,通过重组质粒转染细胞,过表达相关蛋白,用免疫共沉淀和Western blot检测Pink1和Bcl-XL的相互作用,Pink1对Bcl-XL和Beclin1相互作用的影响,以及Pink1对自噬的影响。结果自噬抑制蛋白Bcl-XL与Pink1有相互作用,过量表达Pink1可以抑制Bcl-XL与自噬激活因子Beclin1的相互作用。过量表达Pink1提高自噬下游蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ。结论帕金森氏病相关蛋白Pink1通过与自噬抑制蛋白Bcl-XL相互作用释放自噬促进因子Beclin1来激活自噬。; 佟明明姜长安; 关键词：PINK1 BCL-XL BECLIN1 线粒体自噬

丝氨酸蛋白酶HtrA2/Omi可参与调节线粒体中的适配蛋白p66Shc: 2012年; 目的:p66Shc在线粒体内积累和HtrA2/Omi的功能缺陷都能导致线粒体损伤,诱导细胞凋亡。探讨在线粒体中HtrA2对p66Shc的调控作用。方法:构建p66Shc和成熟型HtrA2的真核表达质粒,共转染HEK293T细胞,免疫印迹法(Western blot)检测p66Shc蛋白;构建原核表达质粒,大肠杆菌纯化蛋白,体外切割实验,SDS-PAGE分离后考马斯亮蓝染色检测;提取HtrA2功能缺陷小鼠(mnd2)大脑组织的线粒体,检测线粒体内p66Shc的蛋白水平。结果:细胞实验和体外实验证明HtrA2可以切割p66Shc,且在mnd2小鼠大脑中,线粒体内p66Shc的蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论:p66Shc是HtrA2的直接底物,且HtrA2参与调节线粒体中p66Shc的蛋白水平,揭示了HtrA2发挥神经保护功能新的可能机制。; 刘姝姜长安; 关键词：P66SHC 线粒体神经退行性疾病

一种HtrA2融合基因及其应用: 本发明提供了一种HtrA2融合基因，该HtrA2融合基因能应用于防治由线粒体受损引起的病症。该基因由线粒体外膜蛋白USP30的定位序列与HtrA2的蛋白酶功能域及PDZ功能域融合而成。在细胞里表达后，MOM‑HtrA2蛋...; 姜长安张婷胡袁; 文献传递

PINK1蛋白在线粒体外膜上的定位机制研究被引量：1: 2013年; 目的研究帕金森氏病相关蛋白PINK1在线粒体外膜上定位的具体机制。方法以体外培养的HEK293T细胞转染表达不同蛋白的真核表达质粒,然后加入DMSO作为对照或者加入线粒体解偶联剂CCCP,以Western印迹和免疫共沉淀技术来检测蛋白的表达和相互作用的变化。结果全长的PINK1在CCCP作用下和线粒体上的Tom40的相互作用能力是DMSO对照的20倍以上,而去掉线粒体定位序列(MTS)和跨膜序列(TM)的PINK1以及其它线粒体外膜蛋白在CCCP作用下没有这样的相互作用。当CCCP去掉后,PINK1全长和Tom40的相互作用迅速减弱。去掉或突变掉TM序列的PINK1和Tom40不论在CCCP是否存在的情况下,均有相互作用。结论在受损线粒体外膜积累的PINK1只是卡在外膜蛋白转运通道上,并没有真正转运到外膜上。而当线粒体的跨膜电位恢复时,它会继续向内转运。; 太颢然姜长安; 关键词：帕金森病 PINK1

一种HtrA2融合基因及其应用: 本发明提供了一种HtrA2融合基因，该HtrA2融合基因能应用于防治由线粒体受损引起的病症。该基因由线粒体外膜蛋白USP30的定位序列与HtrA2的蛋白酶功能域及PDZ功能域融合而成。在细胞里表达后，MOM-HtrA2蛋...; 姜长安张婷胡袁

CK2β促进Pink1/Parkin介导的Miro1降解: 2014年; 帕金森氏病相关蛋白PTEN-induced putative kinase 1(PINK1)在细胞内有两种亚型,分别是定位于线粒体表面的全长PINK1(PINK1FL)和定位于细胞质的PINK1-cyto。PINK1FL能在功能下降的线粒体表面积累,协同另一帕金森病相关蛋白PARKIN降解线粒体转运因子MIROL1,但目前对PINK1-cyto的功能却了解得极少。为了探讨PINK1-cyto在细胞质中的生理学功能,我们在HEK293细胞中通过细胞转染瞬时表达不同蛋白,并利用免疫共沉淀的方法探讨蛋白质间的相互作用。实验结果表明,PINK1-cyto在Casein KinaseⅡ调控亚基CK2β的帮助下,可以协同PARKIN降解MIRO1,并且CK2β的这一功能不依赖于Casein KinaseⅡ的催化亚基CK2α。同时,免疫共沉淀分析表明CK2β可以促进PINK1-cyto与MIROL1的结合。这说明,除了与CK2α结合外,CK2β也可以与PINK1-cyto结合形成具有生理活力的激酶复合体。; 张臣良秦思月姜长安; 关键词：帕金森病

免疫沉淀法纯化线粒体的研究: 2012年; 传统的线粒体分离技术,如差速离心和密度梯度离心不能有效应用于小规模高纯度的线粒体制备。为了提高线粒体纯化的速度和质量,我们尝试运用免疫沉淀法制备线粒体。通过用EGFP-4Flag融合蛋白来标记线粒体外膜,然后用单克隆Flag抗体和Protein G Agarose珠子做免疫沉淀,从培养的细胞中分离出高纯度的线粒体。这一简便高效的方法将有助于线粒体的生化研究。; 叶灵姜长安; 关键词：外膜蛋白免疫沉淀

CK2β促进PINK1S自我磷酸化: 2015年; 本研究旨在探究PTEN诱导激酶1短亚型(PINK1S)在细胞质中激酶活性调节机制。首先,通过免疫共沉淀筛选的方法证明PINK1S能够和酪蛋白激酶2(CK2)蛋白复合体中的β亚基(CK2β)相互结合,但不与其他两个催化亚基α1(CK2α1)和α2(CK2α2)结合。其次,同时过表达CK2β和PINK1S,利用免疫共沉淀的方法纯化PINK1S,将得到的PINK1S用生物素标记的磷酸化蛋白检测标签(Phos-tagTM Biotin)检测其磷酸化水平,发现CK2β能够促进PINK1S的自我磷酸化。最后,利用RNA干扰技术,建立干扰CK2β的细胞株;在对照组和干扰CK2β的实验组细胞内表达PINK1S,发现缺少CK2β表达导致PINK1S的磷酸化水平降低。本文研究表明:CK2β作为胞质PINK1S自我磷酸化的辅助亚基,对其活性起到正调节作用。; 秦思月姜长安; 关键词：帕金森氏病 Β亚基

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姜长安