孔令菊
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
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- 深低温冻存羟基磷灰石/骨髓间充质干细胞修复兔桡骨缺损被引量：1
- 2013年
- 背景:以往研究表明羟基磷灰石复合骨髓间充质干细胞具有良好的骨缺损修复效果,但这种复合材料在冻存后是否具有骨缺损修复效果还不清楚。目的:观察深低温冻存羟基磷灰石/骨髓间充质干细胞复合修复骨缺损的效果。方法:制备27只日本大耳白兔桡骨10mm缺损模型,随机分为冻存复合材料组、新鲜复合材料组与羟基磷灰石组,3组分别于骨缺损处植入-80℃保存3个月的羟基磷灰石/同种异体骨髓间充质干细胞复合物、新鲜制备的羟基磷灰石/同种异体骨髓间充质干细胞复合物及单纯羟基磷灰石,植入后8,12周行大体观察、X射线观察及苏木精-伊红染色等组织学观察,并于12周行生物力学检测。结果与结论:术后12周,冻存复合材料组、新鲜复合材料组骨缺损大部分愈合,有成熟骨小梁通过,有的可见髓腔通畅,塑形较好;羟基磷灰石组骨痂生成少,骨缺损部分愈合,塑形欠佳,新骨生成少于冻存复合材料组、新鲜复合材料组(P<0.05)。冻存复合材料组、新鲜复合材料组最大载荷明显大于羟基磷灰石组(P<0.05)。表明低温冻存羟基磷灰石/骨髓间充质干细胞复合植骨材料的骨缺损修复能力与新鲜制作的复合材料几乎一致,未因冻存受到影响。
- 邢志远张继波孔令菊刘建生郑德宇
- 关键词：骨组织构建羟基磷灰石低温冻存桡骨缺损
- 重组大鼠谷氨酸脱羧酶载体的构建和功能分析(英文)
- 2011年
- 目的谷氨酸脱羧酶2 (glutamic acid decarboxylase 2,GAD65) 是γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid, GABA)的合成酶。本研究拟构建重组大鼠GAD65基因的慢病毒载体(recombinant lentivirus-rGAD65,rLV-rGAD65),并在体内外分析其功能。方法用RT-PCR法克隆大鼠GAD65基因的cDNA 并亚克隆至慢病毒载体上,形成重组慢病毒质粒(rLV-GFP-rGAD65)。在包装质粒的帮助下,获得重组慢病毒颗粒(rLV-rGAD65)并检测其滴度。用rLV-rGAD65感染原代培养的大鼠肺成纤维细胞,并用免疫细胞化学和蛋白印迹法检测rGAD65在成纤维细胞中的表达,用高效液相法(high-performance liquid chromatograph, HPLC)检测培养上清中GABA的含量。在体内, rLV-rGAD65 定点注射到Sprague-Dawley大鼠的丘脑底核(subthalamic nucleus,STN)。用免疫组织化学和蛋白印迹法检测GAD65基因在STN中的表达水平,HPLC检测黑质网状部(substantia nigra pars reticulata,SNr) 中GABA的含量。结果 rGAD65 的序列与GenBank几乎一致,没有碱基的突变。rLV-rGAD65的滴度达6.8 × 108/mL。在体外,rLV-rGAD65对成纤维细胞的感染效率可达80%,而对照组中几乎没有GAD65蛋白的表达。在上清液中,GABA的含量达到了(48.14 ± 9.35) nmol/L。在体内, rGAD65与绿色荧光蛋白共表达于注射侧的STN区,GAD65蛋白的含量明显高于对照组和注射的对侧。GABA在SNr 中的含量也从(5.95 ± 1.09) 升高到(12.44 ± 3.79) nmol/g。结论重组GAD65载体构建成功。在体外,重组慢病毒颗粒可以感染原代培养的成纤维细胞,并能催化GABA的合成。在体内,重组慢病毒颗粒可以感染STN的神经元并能使SNr中GABA的含量增加。
- 刘建生王倩张继波孔令菊姚素艳郑德宇徐群渊
- 关键词：慢病毒载体基因克隆帕金森病
- 柞蚕丝素蛋白-羟基磷灰石-BMSCs组织工程化骨修复老龄动物骨缺损被引量：1
- 2013年
- 目的探讨柞蚕丝素蛋白-羟基磷灰石-骨髓间充质干细胞(TSF-HA-BMSCs)构成的组织工程骨对兔桡骨缺损的修复作用。方法将TSF-HA与成骨诱导后兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行复合,构建新的组织工程骨。取36只12月龄老龄日本大耳白兔于左侧桡骨中段造15mm长的骨缺损区。实验分为3组(A、B、C组各12只)。A组:TSF-HA+BMSCs,B组:HA+BMSCs,C组:无支架组。分别在术后8和12 w摄取X线片,观察骨缺损区的修复及骨塑性情况,骨缺损区组织标本采取HE染色进行组织学观察,比较8和12 w各组的骨修复情况。结果成功培养出了BMSCs,且细胞在材料表面生长状态良好。骨缺损修复术后8、12 w X线检测显示,A组骨缺损的修复效果最好,B组次之,C组几乎没有修复作用,各组间差异有统计学意义(P<0.05);HE染色表明,8 w时与B组或C组相比,A组新骨生成最多,骨修复最快,差异有统计学意义(P<0.05);12 w后取桡骨观察证实:实验组支架大部分被吸收,骨折处密度增高,骨质发白,实验对照组可见部分支架未被吸收,但骨折愈合良好;空白组骨缺损处被结缔组织填充覆盖。结论 TSF-HA组织程化骨具有很好的骨缺损修复能力,有望成为新骨缺损修复的替代材料。
- 张继波杨依勇孔令菊裴丹姚素艳郑德宇
- 关键词：羟基磷灰石骨髓间充质干细胞
- 苍白球内侧部注射siRNA基因沉默GAD治疗PD大鼠的实验研究
- 目的：应用立体定位技术将谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase 2,GAD 65)高效特异的siRNA 注射到帕金森病(parkinson＇s disease,PD)大鼠苍白球内侧部(int...
- 郑德宇孔令菊刘建生
- 关键词：苍白球内侧部基因治疗谷氨酸脱羧酶RNA干扰
- GAD65基因特异siRNA的构建和功能检测
- 2015年
- 目的构建GAD65基因特异的siRNA并检测体外功能。方法应用RT-PCR方法克隆大鼠GAD65基因、测序、重组病毒包装检测体外功能。针对GAD65基因的编码区,设计3条siRNA片段及一条对照片段,将其分别亚克隆于siRNA的慢病毒表达载体并小量包装获得病毒颗粒(LV-GFP-siRNA-r GAD65);用siRNA病毒颗粒感染GAD65过表达的293细胞,检测GAD65表达情况,从中筛选出高效特异的siRNA。大量包装特异的siRNA病毒颗粒,在体外感染培养的大脑皮质细胞,在体内注射到SD大鼠的苍白球内侧部,检测r GAD65的表达水平,观察siRNA的功能。结果应用RT-PCR方法克隆r GAD65基因,其序列与Gen Bank中的基因序列几乎一致(99.72%),包装病毒后在293细胞中过表达。筛选出针对r GAD65的高效特异的siRNA,在GAD65基因的沉默效率可达到66%。在体外、体内分别应用Western印迹检测感染了LV-GFP-siRNA3-r GAD65的大脑皮质细胞和定点注射了LV-GFP-siRNA3-r GAD65的大鼠GPi。结论成功克隆r GAD65基因,设计、筛选出高效特异的siRNA,并证明这种siRNA在体内和体外均能有效地沉默r GAD65的表达。
- 孔令菊周静赵刚姚素艳郑德宇
- 关键词：谷氨酸脱羧酶小干扰RNA基因沉默
