孙玮丽
- 作品数：9 被引量：38H指数：4
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省高校高新技术产业发展项目江苏省卫生厅医学科技发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鼠抗人B7-2单克隆抗体的研制及生物学特性研究被引量：11
- 2006年
- 以天然高表达膜型B7-2分子的人恶性B淋巴瘤经胞株Daudi和B7-2基因转染细胞株L929-B7-2为免疫原及检测细胞株,采用B细胞杂交瘤技术建立了1株稳定分泌抗人B7-2单抗的杂交瘤,命名为6A5。快速定性试纸法鉴定6A5属小鼠IgG1亚类。经体内诱生腹水法制备单抗,小鼠腹水形成的阳性率为80%,腹水的收获量平均为5.9 ml/只小鼠。经免疫亲和层析法纯化,腹水中抗体蛋白的得率为1.1 mg/ml。采用间接免疫荧光法及流式细胞仪分析,单抗6A5与L929-B7-2、PBTC、Raji和Daudi的阳性结合率分别为99.9%、4.6%、90.6%和99.1%。将6A5(终浓度为5μg/ml)加入到Daudi细胞的培养体系中,经显微镜观察及MTT法分析,6A5对Daudi细胞的生长在24 h内具有抑制作用(P<0.05)。以丝裂霉素处理的L929-B7-2为刺激细胞,PBTC为反应细胞,加入6A5共同培养。经MTT法分析,6A5能阻断B7-2介导的协同刺激信号,抑制PBTC增殖(P<0.05)。提示6A5是一株功能性抗体,在B7-2分子相关的基础和应用研究中具有重要的价值。
- 陶然石云杰孙中文马泓冰徐颖程钢孙玮丽周立峰邱玉华张学光
- 关键词：B7-2基因转染细胞协同刺激分子单克隆抗体腹水
- 重组人可溶性gp130的纯化及生物学活性鉴定
- 2006年
- 采用转瓶培养可溶性gp130基因转染细胞。运用免疫亲和层析法，将抗人可溶性gp130的单克隆抗体偶联于CNBr活化的Sepharose 4B。收获基因转染细胞的培养上清，经抗gp130单抗／Sepharose 4B亲和层析柱吸附，用pH2．8、0．1mol／1．甘氨酸溶液洗脱，获取可溶性gp130重组蛋白纯品。基因转染细胞培养上清中可溶性gp130的表达量为100～120μg／ml，纯化后的回收率为70％～75％，SDS-PAGE电泳后出现一条蛋白曲带。经Western blot分析，纯化的可溶性gp130能与特异性抗体结合。将可溶性gp130（终浓度为5μg／m1）与IL-6依赖性生长细胞株XG2共同培养，细胞的生长与增殖出现抑制。提示经免疫亲和层析法纯化的可溶性gp130具有良好的生物学活性。
- 邱玉华马泓冰程钢孙玮丽孙中文周立峰张学光
- 关键词：可溶性GP130单克隆抗体生物学活性
- 老年人T细胞膜型CD28及血清中可溶性CD28的表达及其意义被引量：10
- 2007年
- 分析老年人(年龄在60岁以上)外周血T细胞膜型CD28(mCD28)及血清中可溶性CD28(sCD28)的表达水平,探讨该分子在老年人免疫功能改变中的意义。分别收集肝素抗凝及不抗凝的老年人外周血,抗凝血经分离获取单个核细胞,间接免疫荧光及流式细胞仪分析,老年人T细胞mCD28的阳性表达率为男性(41.56%±11.23%)及女性(42.97%±12.02%)。与年轻人[男性(61.51%±17.45%)及女性(62.38%±16.22%)]相比,差别具有显著性(P<0.01)。酶联免疫吸附法(ELISA)检测,老年人血清中sCD28的含量为男性(1.08±0.45)及女性(0.98±0.47)ng/ml,与青年人[男性(0.55±0.16)及女性(0.52±0.13)ng/ml]相比,差别具有显著性(P<0.01)。老年人T细胞mCD28的表达水平下降,而血清中sCD28的含量升高。
- 石云杰顾国浩史进方钱齐宏孙中文程钢孙玮丽邱玉华
- 关键词：老年人免疫衰老
- 人CTLA-4基因转染细胞的构建及功能性单克隆抗体的研制
- 目的:构建含有人CTLA-4的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达CTLA-4基因的L929细胞,并研制鼠抗人CTLA-4功能性单克隆抗体。方法:从活化T细胞中用trizol法抽提总RNA,进一步用RT-PCR的方法扩增出C...
- 孙玮丽孙中文陈永井程钢徐耀瑜胡玲玲张学光邱玉华
- 关键词：CTLA-4基因转染细胞单克隆抗体
- 文献传递
- 圣愈汤对正常小鼠免疫功能的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:观察和分析圣愈汤对正常小鼠免疫功能的影响。方法:选用昆明种正常小鼠,随机分成3组,运用不同剂量的圣愈汤经灌胃给药,每天1次。用药第20及30天,称小鼠体重,摘眼球取血,肝素抗凝,采用免疫荧光及流式细胞术分析外周血T细胞亚群的改变,ELISA法检测血浆中IL-2及IL-4的含量。结果:高剂量圣愈汤能明显提高正常小鼠CD3+T细胞、CD4+T细胞的百分率及CD4+/CD8+比值(与对照组比较,P<0.05);运用圣愈汤后,正常小鼠血液中IL-2的含量升高(与对照组比较,P<0.05),但IL-4的水平无明显变化。结论:圣愈汤通过对T淋巴细胞亚群百分率和比值及IL-2含量的影响,对正常小鼠具有良好的免疫调节和促进免疫应答的功效。
- 周立峰邱玉华程钢孙中文孙玮丽
- 关键词：圣愈汤正常小鼠免疫功能
- 转染人CTLA-4细胞的对树突状细胞B7分子表达的影响被引量：1
- 2007年
- 从PHA活化的人外周血T细胞中抽提总RNA,经RT-PCR扩增出CTLA-4的全长基因,构建逆转录病毒载体pEGZ-Term/CTLA-4,经PCR及电泳鉴定后感染包装细胞293T。收集培养上清感染L929细胞。用Zeocin选择培养。经免疫荧光及流式细胞术进行筛选,获取稳定表达CTLA-4分子的细胞株CTLA-4/L929。将CTLA-4/L929经丝裂霉素处理后与体外细胞因子诱导的树突状细胞共同孵育。分别于24、48及72h,用直接免疫荧光法和流式细胞术分析树突状细胞B7-1和B7-2分子的表达。研究结果显示,构建的重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/CTLA-4的PCR产物长约700 bp,与人CTLA-4基因的长度一致。经Zeocin选择及多次亚克隆化培养,CTLA-4基因转染细胞CTLA-4/L929稳定表达膜型CTLA-4分子。以其为刺激细胞与树突状细胞共同培养后,可明显下调树突状细胞B7-1的表达,但对B7-2的表达没有影响。本研究获得的CTLA-4基因转染细胞株,为进一步探讨CTLA-4及其配基分子在免疫应答中的作用与机制提供了手段。
- 孙玮丽陈永井孙中文徐耀瑜胡玲玲张学光邱玉华
- 关键词：CTLA-4B7基因转染共刺激分子树突状细胞
- 圣愈汤对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠T细胞亚群和细胞因子的影响被引量：8
- 2009年
- 目的观察圣愈汤对免疫低下小鼠T细胞亚群和细胞因子的影响。方法选用昆明种小鼠,环磷酰胺诱导建立免疫低下小鼠模型,用不同剂量的圣愈汤经灌胃给药,每天1次。用药第30天时,称小鼠体重,摘眼球取血,肝素抗凝,采用免疫荧光及流式细胞术分析外周血T细胞亚群的改变,ELISA法检测血浆中IL-2及IL-4的含量。结果各组小鼠外周血的CD8+T细胞的百分率差异无显著性(>0.05)。环磷酰胺组小鼠外周血CD4+T的百分率及CD4+/CD8+的比值比对照组低(<0.05)。环磷酰胺+低剂量组的CD4+T的百分率及CD4+/CD8+的比值与环磷酰胺组高。环磷酰胺+高剂量组与环磷酰胺+免煎组的CD3+T、CD4+T的百分率及CD4+/CD8+的比值比环磷酰胺组高。环磷酰胺组小鼠血浆中细胞因子IL-2及IL-4的浓度比对照组低(<0.05);环磷酰胺+低剂量组、环磷酰胺+高剂量组以及环磷酰胺+免煎组血浆中IL-2及IL-4浓度比环磷酰胺组高,具有统计学意义(<0.05)。环磷酰胺+高剂量组与环磷酰胺+低剂量组IL-2浓度差异也有显著性(<0.05),但与环磷酰胺+免煎组比较差异无显著性(0.05)。结论圣愈汤能纠正环磷酰胺所致的免疫低下小鼠T细胞亚群的异常,升高血液中IL-2及IL-4的含量,从而提高机体的免疫应答水平。
- 周立峰邱玉华程钢孙中文李海舟孙玮丽周春刚
- 关键词：细胞因子类T淋巴细胞亚群圣愈汤
- 可溶性人细胞分化抗原28分子酶联免疫试剂盒的研制及应用被引量：6
- 2006年
- 目的研制灵敏、特异和稳定的可溶性人细胞分化抗原28（sCD28）酶联检测试剂盒，并探讨其临床应用意义。方法取识别不同抗原位点的单抗8G8和2D5分别作为包被单抗和检测单抗，建立双单抗夹心-sCD28酶联免疫检测法（sCD28-ELISA），并绘制标准工作曲线。同时，测定36名健康人、23例系统性红斑狼疮（SLE）、38例类风湿性关节炎（RA）和62例Grave病患者血清中sCD28含量。结果研制的sCD28试剂盒最低检测下限为0．3ng／ml，具有良好线性关系的检测范围是0．5～16．0ng／ml；8G8单抗包被测定板后置4℃冰箱保存180d，加入可溶性CD28-Ig重组蛋白的回收率在93％～109％之间。SLE、RA和Grave病患者血清中sCD28含量分别为0．9～7．3ng／ml、0．3～6．8ng／ml、0．2～3．5ng／ml，明显高于健康人（0～1．1ng／ml，P〈0．01）。结论自制的sCD28试剂盒，能准确测定样本中sCD28含量，可为sCD28分子基础研究和临床疾病辅助诊断、疗效评估及预后判断提供有价值的生物学参数，具有良好应用前景。
- 孙中文邱玉华马泓兵石云杰陶然孙玮丽程刚张学光
- 关键词：酶联免疫吸附测定
- 人可溶性B7-2分子的定量检测及应用
- 2007年
- 选取识别不同抗原位点的鼠抗人B7-2单抗1F9和6C8分别作为包被和检测抗体，用生物素（Biotin）标记检测抗体，建立双单抗夹心的sB7-2检测方法。在对其特异性、稳定性和准确性进行分析的基础上，对20例系统性红斑狼疮（S1，E）患者及30名健康献血者血清中sB7-2的含量进行了测定。建立的sB7-2检测方法的灵敏度为0．15ng／ml，具有良好线性关系的检测范围0．31～20．00ng／ml。单抗1F9包被的测定板，4℃放置30d内，工作曲线中各测定点的变异系数〈5．9％。sLE患者血清中sB7-2的含量为（2．207±0．517）ng／ml，与健康献血者的（1．275±0．263）ng／ml比较具有统计学的显著差异（p〈0．01）。本研究中建立的人sB7-2检测方法，能够对血清中sB7-2进行定量分析，可为该分子的基础研究及临床相关疾病的辅助诊断与判断预后提供参数。
- 陶然钱齐宏马泓冰石云杰孙中文程钢孙玮丽张学光邱玉华
- 关键词：ELISA生物素系统性红斑狼疮
