宫大庆
- 作品数：19 被引量：45H指数：4
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金吉林省科技发展计划基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 人工感染边缘无浆体对犊牛血清生化及血液流变学的影响被引量：1
- 2010年
- 为通过人工感染的方法建立牛边缘无浆体病动物模型,研究边缘无浆体(A.marginale)感染对犊牛血液主要生化指标和血液流变学指标的影响,本实验采用地塞米松注射液长期抑制一月龄犊牛的免疫力,经颈静脉接种含有A.marginale的血液,定期采血,测定其血液主要生化指标和血液流变学指标。结果表明,感染A.marginale后,血液主要生化指标与对照组相比,谷丙转氨酶(GPT)含量极显著升高(p<0.01),谷草转氨酶(GOT)含量显著升高(p<0.05),血糖(GLU)含量显著降低(p<0.05),总胆固醇(T-CHO)含量极显著降低(p<0.01),而碱性磷酸酶(ALP)、血铁(Fe)、尿素(BUN)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(α-HBD)和肌苷(Cr)含量均无显著性变化;血液流变学主要指标与对照组相比,全血还原高切比粘度和红细胞刚性指数(IR)极显著降低(p<0.01),全血中切比粘度、全血低切比粘度和全血还原低切比粘度显著降低(p<0.05),全血高切比粘度、血浆比黏度(ηp)、红细胞压积(PCV)和红细胞聚集指数(AI)均无显著性变化。
- 倪宏波宫大庆姜海芳周玉龙郭爽王春仁
- 关键词：犊牛边缘无浆体血清生化血液流变学
- 人工感染边缘无浆体对犊牛血清生化及血液流变学的影响
- 通过人工感染的方法建立牛边缘无浆体病动物模型,以揭示边缘无浆体(A.marginale)感染对犊牛血液主要生化指标和血液流变学指标的影响.采用地塞米松注射液长期抑制一月龄犊牛的免疫力,经颈静脉接种含有A.marginal...
- 倪宏波宫大庆姜海芳周玉龙郭爽王春仁
- 关键词：犊牛边缘无浆体血清生化血液流变学
- 牛边缘无浆体膜表面蛋白5的原核表达及其免疫原性
- 2011年
- 目的原核表达牛边缘无浆体(Anaplasma marginale)膜表面蛋白5(Membrane surface protein 5,MSP5),并分析其免疫原性。方法 pQE-MSP5/BL21(DE3)阳性重组菌经IPTG诱导表达,表达产物经MagneHisTM蛋白纯化系统纯化后,进行SDS-PAGE分析。将纯化的MSP5蛋白免疫小鼠,以生理盐水免疫作为阴性对照,ELISA法检测血清抗体水平,淋巴细胞增殖试验检测脾淋巴细胞增殖水平,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群分类。结果表达的重组MSP5蛋白相对分子质量约为23 000;纯化蛋白的纯度为83.2%,浓度为1.087 mg/ml;纯化的MSP5蛋白可刺激小鼠产生特异性抗体;免疫组小鼠淋巴细胞增殖水平明显高于阴性对照组(P<0.05);免疫组小鼠CD3+、CD4+和CD4+/CD8+比例高于阴性对照组,CD8+比例低于阴性对照组。结论已成功表达并纯化了牛边缘无浆体MSP5,其免疫原性良好,为制备单克隆抗体及建立准确可靠的诊断方法奠定了基础。
- 倪宏波姜海芳周玉龙王春仁宫大庆钱爱东
- 关键词：边缘无浆体原核细胞基因表达免疫原性
- 奶牛猝死病例中O_(101)大肠杆菌的分离及部分毒力相关抗原的鉴定
- 2011年
- 为鉴定引起奶牛猝死综合征的病原及其毒力相关抗原,本研究无菌采集急性死亡奶牛的肝、脾、肾及小肠内容物样本,进行病原菌的分离和纯化,通过微生物学诊断、肠毒素试验、血清学试验、药敏试验和菌毛PCR进行鉴定,结果表明所分离的菌株为产ST肠毒素并具有F41菌毛、血清型为O101的大肠杆菌,该菌株对克林霉素、多黏菌素B、头孢曲松高度敏感。本实验为进行奶牛大肠杆菌性猝死综合征的防治奠定了基础。
- 倪宏波孙福先王冰石星明姜海芳周玉龙王春仁宫大庆
- 关键词：猝死综合症肠毒素血清型菌毛
- 检测牛边缘无浆体抗体的竞争抑制ELISA方法的建立
- 2011年
- 为建立检测牛边缘无浆体(Anaplasma marginale)抗体的方法,本研究以牛A.marginale膜表面重组MSP5蛋白作为包被抗原,抗MSP5单克隆抗体(MAb)作为竞争抗体,建立一种用于检测牛A.marginale抗体的重组MSP5蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法。经优化确定CI-ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为2μg/孔,封闭液为2%脱脂乳,MAb的稀释度为1∶400,酶标二抗的稀释度为1∶1000,阴性和阳性血清临界值分别为33%和40%;该方法具有良好的特异性和重复性;2348份临床血清样品的检测结果表明,217份为阳性,阳性率为9.2%,与IDEXX A.marginale抗体检测试剂盒的阳性符合率为95.3%,阴性符合率为100%。本实验建立的ELISA方法具有较高的特异性和重复性,可用于流行病学调查研究。
- 倪宏波王冰姜海芳周玉龙王春仁宫大庆钱爱东
- 关键词：流行病学调查
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白B表位诱导中和抗体能力的研究被引量：13
- 2011年
- 为证实GP5蛋白B表位是否具有诱导抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的能力,本实验合成了PRRSV CH-1a株和高致病性PRRSV(HP-PRRSV)HuN4株B表位的短肽,分别免疫家兔制备两份特异性多肽抗血清。此外,将12头PRRSV及其抗体均为阴性的健康仔猪以HP-PRRSV HuN4疫苗毒株(HuN4-F112)进行基础免疫,然后用强毒株(HuN4-F5)进行多次接种,制备猪高免血清。间接免疫荧光检测(IFA)结果显示,两份多肽抗血清均能与PRRSV经典株和变异株发生特异性反应,IFA抗体效价无差异,表明两份血清没有显著差异。病毒中和试验结果表明,两份多肽抗血清均不具有中和PRRSV活性。间接ELISA和病毒中和试验结果表明,猪高免血清中针对B表位肽的ELISA抗体水平与血清抗PRRSV中和抗体之间没有正相关关系,而且B表位肽不能抑制中和抗体。以上结果表明HP-PRRSV B表位不能诱导产生中和抗体。
- 冷超粮安同庆陈家锃宫大庆李登云杨永倩彭金美张祎郭娟娟吴江童光志田志军
- 关键词：GP5中和抗体
- 边缘无浆体病动物模型的建立及其生理指标变化规律的研究被引量：1
- 2010年
- 建立边缘无浆体病的动物疾病模型。采用地塞米松注射液长期抑制实验动物的免疫力,通过犊牛颈静脉接种含有无浆体病原的牛血液,监测奶牛无浆体感染过程中其生理指标的变化趋势,以及在实验动物体内的消长规律,建立起无浆体人工感染动物模型。无浆体感染实验动物有5～7d的潜伏期,感染早期体温先升高后回复正常,呼吸先加快后回复正常水平,心率无明显变化。边缘无浆体感染过程中,红细胞出现大量变形和破碎,数量减少,白细胞呈现减少升高再减少的过程后,逐步恢复到正常水平,而血小板数量增加。因此,可用1月龄犊牛在免疫抑制情况下建立无浆体人工感染动物模型,揭示犊牛在感染边缘无浆体过程中其生理与血液指标的变化规律。
- 倪宏波宫大庆姜海芳王欣周玉龙郭爽王春仁
- 关键词：边缘无浆体奶牛动物模型
- 边缘无浆体膜表面蛋白1a(MSP1a)的克隆与原核表达
- 2010年
- 为了给牛边缘无浆体的诊断和基因工程疫苗的研制提供理论依据,试验以牛边缘无浆体基因组DNA为模板,采用PCR技术对其膜表面蛋白1a(MSP1a)基因进行扩增,将扩增产物转入克隆载体和表达载体中进行克隆和表达,用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),利用免疫印迹分析鉴定MSP1a基因表达产物的免疫活性。结果表明:MSP1a基因PCR扩增产物与GenBank上的PR1株MSP1a基因的序列同源性达98.3%,编码氨基酸的同源性为98.7%;将该基因亚克隆入原核表达载体pET-28a中,构建了重组原核表达载体;将其转化到DH5α大肠杆菌中,用IPTG进行诱导表达,实现了融合表达,表达产物的分子质量为49 ku;经SDS-PAGE电泳和免疫印迹检测,MSP1a基因在表达载体中得到高效表达,且表达产物具有免疫活性。
- 姜海芳倪宏波王春仁宫大庆邵光喜周玉龙崔玉东
- 关键词：边缘无浆体克隆原核表达
- 绵羊关联性牛恶性卡他热的PCR诊断
- 2010年
- 绵羊关联性牛恶性卡他热是由绵羊关联性疱疹2型病毒引起的以高热、双侧角膜混浊、流涎和口腔黏膜溃疡为特征的急性致死性传染病。本试验对临床发病的黄牛进行PCR诊断,结果证实其为绵羊关联性恶性卡他热病毒感染。这在国内尚属首次报道。
- 王冰郭常春宫大庆邵光喜于海涛牛红云闫丽萍朴范泽倪宏波
- 关键词：MCFPCR
- 牛源大肠杆菌F41菌毛蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备被引量：1
- 2013年
- 目的原核表达及纯化牛源产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)F41菌毛蛋白,并制备F41菌毛蛋白的多克隆抗体。方法以ETEC基因组为模板,采用PCR法扩增F41菌毛基因,克隆入表达载体pQE-30,转化大肠杆菌XL1-Blue,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE分析,表达产物经切胶纯化,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定抗血清效价,Western blot分析F41菌毛蛋白与多抗的反应原性。结果重组表达质粒pQE-30-F41经双酶切及测序证实构建正确;F41菌毛重组蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为32 000;重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,纯化的重组蛋白纯度可达92%;制备的抗血清效价达1∶2.56×106以上,Western blot结果表明F41菌毛蛋白与制备的多抗具有良好的反应原性。结论已成功原核表达并纯化了F41菌毛重组蛋白,且制备了高效价的多克隆抗体,为单克隆抗体制备及其免疫检测方法的建立奠定了基础。
- 倪宏波郎秀艳邵光喜周玉龙焉秋龙刘银冰宫大庆王春仁
- 关键词：原核细胞基因表达多克隆抗体
