尹智
- 作品数：39 被引量：111H指数：6
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生电气工程更多>>
- 体细胞核移植克隆民猪:培养液对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响被引量：21
- 2007年
- 体外培养成熟的卵母细胞是进行克隆猪研究所需受体卵母细胞的主要来源,卵母细胞成熟质量与体细胞核移植胚胎发育能力关系密切.为提高卵母细胞体外成熟率和成熟质量,进而提高体细胞核移植猪的成功率,本实验以改进的TCM199培养液为基础液(T),分别添加10%的猪卵泡液(T+pFF)和10%的胎牛血清(T+FBS)后进行卵母细胞成熟培养,以成熟率和体细胞核移植胚胎发育率等重要指标为标准,研究了pFF和FBS对卵母细胞成熟及核移植胚胎发育能力的影响.T,T+pFF和T+FBS组在成熟培养后42h卵母细胞成熟率分别为(53.2±3.8)%,(69.7±3.8)%和(70.2±3.7)%,添加10%的pFF和FBS显著(P<0.05)提高了卵母细胞成熟率;3组不同成熟培养液获得的成熟卵母细胞在体细胞核移植后囊胚发育率差异不显著,但T+pFF组的囊胚细胞数(34.5±2.24)显著(P<0.05)高于T组的囊胚细胞数(26.6±1.25).来自T+pFF组的体细胞核移植胚胎经手术法移植入发情周期为第0天或第1天的18头受体母猪输卵管,其中有3头受体母猪妊娠发育到期,获得克隆民猪14头,其中有6头健康成活至今.实验结果表明,培养液中添加10%pFF可以有效提高卵母细胞成熟比例和成熟质量,在含有10%pFF培养液中获得的成熟卵母细胞具有支持核移植胚胎全程发育的能力.
- 刘忠华田江天郑重王振坤宋军尹智高力马海鹍孔庆然孙爽李玉田王洪斌
- 关键词：体细胞核移植体外成熟胎牛血清
- 附加型载体结合精子载体法生产转基因鸡
- 转基因动物是生物工程及生物医学的重要工具之一.目前,整合型载体广泛应用于转基因技术,但整合型载体可能导致插入突变,以及转入基因的随机表达甚至沉默.核骨架/核基质附着区(scaffold/matrix attachment...
- 王加强牟彦双尹智刘忠华
- 关键词：转基因精子载体法
- 猪类胚胎生殖细胞体外诱导分化为神经细胞的研究
- 目的 探讨猪类胚胎生殖细胞向神经细胞分化的潜能。方法 采用性腺-中肾区基质细胞与猪原始生殖细胞共培养的方法得到猪类胚胎生殖细胞,通过直接分化的方法进行神经细胞定向诱导。结果 (1)与小鼠成纤维细胞作为饲养层相比,性腺-中...
- 丛义梅马婧孙瑞珍王健宇薛冰华胡魁尹智刘忠华
- 关键词：体外诱导神经细胞
- 猪转录因子SOX2下游调控蛋白筛选及调控网络建立
- 2019年
- SOX2是早期胚胎发育与干细胞多能性维持相关的重要转录因子。从猪孤雌囊胚中克隆获得猪SOX2基因并构建对应过表达体系。通过猪pEF细胞系与PK15细胞系中过表达SOX2基因及qPCR技术,检测89个下游调控候选基因表达情况,建立猪SOX2下游调控网络。结果发现,GATA4、MSC、GSC、FGF4、STELLA、ACACA、FN1、KLF4以及MEK基因在pEF细胞系与PK15细胞系间呈差异性调控表达。BMP4、FGFR2、ACAA2、ACSL3、β-CATENIN、c-MYC、MYST3、GSK3β、ALDH3A2、STAT3、SMAD2、KDM6A、ACADL、PI3K与WDR3基因在两种细胞系中呈同趋势性调控表达;经JASPAR数据库预测发现,WDR3、β-CATENIN、ACAA2、KDM6A、STAT3、ACADL、GSK3β与ALDH3A2基因启动子区域存在高相关性的SOX2蛋白结合位点,推测这些基因受SOX2蛋白直接调控;同时构建针对猪SOX2基因的高效敲除体系。研究结果为建立物种特异性的猪SOX2调控网络提供数据基础。
- 吕嘉伟尹智李妍王加强赵剑超伟人悦刘忠华
- 关键词：转录因子调控网络基因敲除
- 转基因克隆猪有了猪宝宝——全国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪已成功、自然产产下她的第二代
- 2008年
- 刘忠华博士2004年8月回国筹建动物胚胎工程实验室，2005年6月完工并投入使用。在开展工作之初由于没有合适的猪场，致使2005年末的研究工作功亏一篑，后来我们总结此次“预试验”的经验教训，找到了管理更严格、饲养条件更佳的哈尔滨三元牧业有限公司合作，克服了所有困难之后，于2007年10月12日成功地获得了采用成体体细胞作为核供体的克隆东北民猪的诞生。三头克隆小猪通体黑色，发育正常。
- 刘忠华尹智
- 关键词：猪场转基因蛋白荧光
- 试管内外壁同时自动清洗装置
- 试管内外壁同时自动清洗装置，属于实验用设备技术领域，由盛液外刷套（1）、基座（5）、内刷柄固套（6）、盛液外刷套壁（7）、盛液外刷套毛（8）、内刷毛（9）、内刷柄（10）、试管转动盘（18）、内刷柄固定腔（21）、内刷柄...
- 李成尹智魏颖孟婧
- 文献传递
- 猪源Lin28基因的克隆及其在猪胎儿成纤维细胞中的表达
- 2012年
- Lin28广泛地表达于早期胚胎中,是重编程的一个重要诱导因子。根据GenBank中公布的猪源Lin28的序列设计合成引物,以猪桑葚胚cDNA为模板,通过RT-PCR方法扩增其编码区全序列。将此克隆片段连接到PMXs表达载体上,构建逆转录病毒载体PMXs-Lin28。在293T细胞中包装携带Lin28基因的逆转录病毒,感染猪如猪胎儿成纤维细胞(Porcine embryonic fibroblasts,PEF)。免疫荧光及Real-time结果显示,PMXs-Lin28载体能够介导Lin28 mRNA和蛋白质在猪胎儿成纤维细胞中的高效表达,Lin28基因能够激活Oct4、Sox2、Nanog、Klf4和c-Myc基因的表达。
- 刘忠华韩小娇张鑫淼王娟牟彦双何文腾黄天晴孔庆然姜丹丹丛义梅尹智
- 关键词：成纤维细胞过表达
- 应用双重PCR技术鉴定猪胎儿性别及其细胞系建立被引量：5
- 2008年
- sry和zfy/x是与哺乳动物性别决定有关的重要基因。本试验针对猪sry基因设计了两对PCR引物,以zfy/x为内参基因,利用双重PCR技术对6只30d左右猪胎儿的性别进行鉴定。结果表明,所有的6个样品都有447bp(雄性)或445bp(雌性)的zfy或zfx序列的扩增带,而采用两对不同的引物对sry序列扩增后,有1个样品出现241bp和166bp的扩增带为雄性,其余的无特异性扩增带为雌性,然后采用胶原酶消化培养法建立已知性别的猪胎儿成纤维细胞系。该方法具有简单、快速、准确的特点,为转基因克隆动物研究中尽早转染目的基因以及培养特定性别的胎儿成纤维细胞系提供了可靠的依据。
- 尹智孔庆然格日乐其木格王振坤张力刘忠华
- 关键词：双重PCRSRY性别鉴定
- 动物组织胚胎学教学过程中学生人文精神培养模式探讨
- 动物组织胚胎学属于基础自然科学,主要对生命本体的宏观和围观的形态结构和发育规律等进行研究的科学。人文精神是个体化的关爱和尊重。本文主要针对在动物组织胚胎学教学过程中如何体现对学生的人文关怀和建立学生人文精神培养模式进行探...
- 尹智牟彦双刘忠华
- 关键词：组织胚胎学教学人文精神
- 文献传递
- 猪四倍体胚胎制作及早期发育初步研究
- 2n/4n嵌合体胚胎在胚胎发育调控机理的研究、基因缺陷动物模型的建立和动物克隆方面有着特殊的应用价值。四倍体胚胎能通过抑制早期胚胎的卵裂或者卵裂球的融合来实现。抑制早期胚胎卵裂是采用只抑制胞质分裂，而不抑制核分裂的化学药...
- 何文腾焦明霞石永乾周洋孔庆然尹智刘忠华
- 关键词：发育调控
