尹洁
- 作品数：13 被引量：13H指数：2
- 供职机构：天津医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 针对人Tudor-SN蛋白T103位点的应激磷酸化抗体制备及分析被引量：1
- 2014年
- 目的:针对人Tudor-SN蛋白T103位点(103位苏氨酸,Thr103)制备兔源多克隆磷酸化抗体,并进行应激磷酸化的时相分析。方法:首先人工合成含磷酸化T103(pT103)位点的多肽,4次免疫新西兰大白兔后获取抗血清;然后以AKTA蛋白纯化系统进行纯化,并利用Western blotting和细胞免疫荧光实验对纯化后的抗pT103抗体进行鉴定;最后以In-cell Western法进行Tudor-SN蛋白的应激磷酸化/去磷酸化时相性分析。结果:(1)确定并合成磷酸化多肽"TIENKpTPQGRC",收集约75 ml兔源抗血清,纯化后获取2.08 mg/ml抗pT103抗体;(2)当HeLa细胞受到氧化应激时,以pT103抗体检测的磷酸化信号增强,可在胞浆中检测到颗粒状信号,与内源性Tudor-SN应激颗粒存在共定位关系;(3)在氧化应激及应激去除后恢复过程中,T103位点的磷酸化水平呈现一定的波动性时相。结论:成功制备针对Tudor-SN蛋白T103位点的兔源多克隆抗pT103抗体,有助于从磷酸化修饰角度进行Tudor-SN在细胞应激方面的机制探讨。
- 高星杰张毅苏超付雪史雪彬尹洁何津岩王鑫廷姚智杨洁
- 关键词：磷酸化抗体
- ERT2-Cre诱导的Rosa26R-YFP报告基因系统标记小鼠造血干祖细胞的条件和效率检测
- 2014年
- 目的 探索ERT2-Cre诱导的黄色荧光蛋白（YFP）报告基因系统标记小鼠造血干祖细胞的条件和效率.方法 通过基因型分型的方法,从Rosa26R-YFP小鼠与ERT2-Cre小鼠杂交得到的后代中,筛选出YFP及ERT2-Cre双阳性转基因杂交小鼠;采用免疫磁珠法从双阳性转基因小鼠骨髓细胞中富集c-kit＋造血干祖细胞群进行体外培养,并用不同浓度4-羟基它莫西芬（OHT）作用不同时间以诱导YFP表达;流式细胞术检测c-kit＋造血干祖细胞中YFP的表达量.结果 Rosa26R-YFP小鼠与ERT2-Cre小鼠的杂交后代共9只,采用基因型分型方法筛选出双阳性转基因小鼠5只;体外培养的c-kit＋细胞部分形态发生变化,提示存在细胞分化;流式细胞术检测到c-kit＋细胞中YFP表达量可达13.7％.结论 YFP报告基因系统在OHT诱导的ERT2-Cre作用下,能有效标记小鼠造血干祖细胞.
- 罗琦尹洁孟歆怿杨冰雷蕾孙琰李丹丹王瑾王玺何景华
- 关键词：造血系统造血干祖细胞
- 盐酸安罗替尼在制备治疗多发性硬化药物中的用途
- 本发明公开了盐酸安罗替尼在制备治疗多发性硬化药物中的用途，相比于对照组，盐酸安罗替尼治疗组的EAE模型小鼠瘫痪程度明显降低；根据EAE模型的临床评分，盐酸安罗替尼能够显著抑制EAE的发生；盐酸安罗替尼对EAE模型小鼠体重...
- 李龙诸浩然尹洁樊广跃
- 文献传递
- 针对人SND1基因两个AUG的细胞应激分析
- 2014年
- 目的针对人SND1基因2个蛋白翻译起始密码子AUG构建真核表达质粒pCMV-N-Flag-SND1-No1/2,并分析2个AUG在SND1应激颗粒形成中的作用。方法以SND1全长转录本为模板,PCR法扩增含BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的目的基因SND1-No1/2,双酶切法分别酶切目的基因片段和线性pCMV-N-Flag,以T4-DNA连接酶将两者连接成pCMV-N-Flag-SND1-No1/2重组质粒,然后将构建的重组质粒转染入HeLa细胞内,以Western印迹法检测Flag标签(DYKDDDDK)与SND1-No1/2的融合表达,最后以细胞免疫荧光实验检测在氧化应激状态下Flag-SND1-No1/2融合蛋白与内源性SND1应激颗粒的胞内共定位情况。结果以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒无误,Western印迹结果检测到融合蛋白Flag-SND1-No1/2的表达;细胞免疫荧光结果显示Flag-SND1-No1/2均可与内源性SND1应激颗粒共定位。结论重组pCMV-N-Flag-SND1-No1/2质粒构建成功,SND1基因第1个AUG的缺失并不影响SND1应激颗粒的形成。
- 高星杰何津岩葛林张毅付雪尹洁张纬史雪彬苏征姚智杨洁
- 关键词：重组融合蛋白质类应激质粒基因表达
- 活细胞内以光漂白荧光损失(FLIP)技术分析HuR蛋白的应激动力学行为
- 2014年
- 人类抗原R(human antigen R,HuR)是一种多功能RNA结合蛋白,参与细胞应激颗粒(stress granules,SGs)的构成。SGs是细胞在受到外界环境刺激时在胞浆中形成的颗粒状结构。该研究是利用光漂白荧光损失(fl uorescence loss in photobleaching,FLIP)技术对活细胞内的HuR蛋白颗粒进行应激动力学分析。首先,利用脂质体将RFP-HuR重组质粒瞬时转染入HeLa细胞,以Western blot和细胞免疫荧光实验确定是否实现对于HuR蛋白的红色荧光蛋白(red fl uorecent protein,RFP)标记;然后以405 nm激光束脉冲式重复光漂白HuR应激颗粒,分别监测同一漂白细胞内的其他HuR颗粒以及核内荧光信号,并以邻近的未漂白细胞作为对照组。实验结果表明,转染重组质粒后可有效表达RFP-HuR融合蛋白,且与SGs标记蛋白G3BP存在共定位关系。在第一个光漂白循环,漂白区荧光密度便从2 500 a.u.降低至0 a.u.;而经过约12个漂白循环(240 s)后,邻近HuR颗粒的荧光密度从漂白前的1 800 a.u.左右降低并维持在200 a.u.左右,表明活细胞内的HuR颗粒呈现高度的动态性;而胞核区荧光密度亦从4 400 a.u.降低至2 000 a.u.左右,表明HuR蛋白是一种核浆穿梭蛋白,在SGs、胞浆及胞核之间存在一定的动态平衡。利用FLIP技术可以分析并比较SGs不同成分的应激动力学属性,有助于进行SGs相关临床疾病的分子机制探讨。
- 高星杰张毅付雪苏超张春燕张桂敏尹洁王鑫廷姚智杨洁
- 关键词：活细胞荧光标记
- 阿帕替尼在制备治疗多发性硬化症药物的用途
- 本发明公开了阿帕替尼在制备治疗多发性硬化症药物的用途，相比于对照组，Aptinib选定给药浓度对小鼠无毒性作用；根据EAE模型发病的临床评分规则，相比于对照组，Apatinib治疗组EAE模型小鼠的发病程度明显降低；Ap...
- 李龙尹洁樊广跃李光亮
- 组蛋白H3K4甲基转移酶KMT2D研究进展被引量：6
- 2018年
- 组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2D(KMT2D),属于哺乳动物H3K4甲基转移酶家族成员,在成人组织中广泛表达,对于早期胚胎发育有重要作用。C-末端的SET区域负责组蛋白H3K4甲基化,维持KMT2D蛋白的稳定性。KMT2D与WRAD、NCOA6、PTIP、PA1和H3K27去甲基化酶UTX组成复合物,在其中起到支架蛋白的作用,维持UTX的稳定性。KMT2D主要催化哺乳动物H3K4单甲基化,与转录因子共同作用于增强子区域,从而调控基因表达。KMT2D在调节细胞发育、分化、新陈代谢和肿瘤抑制方面具有重要作用,其突变导致多种疾病发生。进一步研究KMT2D有助于揭示其异常所引发多种疾病的病因,并且对开发临床药物提供有力的帮助。
- 阎晗于明航尹洁王玺
- 关键词：增强子表观遗传调控
- 重组真核质粒pEGFP—C2-hTudor—SN—SN（1～4）的构建及表达
- 2012年
- 目的将人类Tudor—SN（tudor staphylococcal nuclease）蛋白SN（1～4）基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒，使Tudor—SN蛋白SN各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板，PCR法扩增出目的基因，利用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切法将目的片段连接到pEGFP—C2载体上，再将构建成功的pEGFP-C2-Tudor—SN-SN（1～4）重组质粒转染入HeLa细胞内，以荧光显微镜及Western印迹法检测绿色荧光蛋白与目的蛋白的融合表达情况。结果以单／双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误，荧光显微镜及Western印迹结果均检测到绿色融合蛋白的表达。结论重组pEGFP-C2-hTudor—SN-SN（1—4）质粒成功构建并表达。
- 辛灵彪高星杰付雪张毅史雪彬陈朴尹洁何津岩杨洁
- 关键词：PEGFP-C2重组质粒融合蛋白
- p100蛋白表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株的建立
- 2012年
- 目的建立p100表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株，并初步探讨p100在HepG2肝癌细胞中的功能。方法用脂质体将含有真核细胞筛选标记Neo和GFP的p100 shRNA表达质粒转染入HepG2细胞。经G418耐药筛选稳定整合抗药基因的细胞单克隆；荧光镜检GFP阳性细胞单克隆，挑取单克隆；Western检测HepG2细胞稳定株HepG2（p100I）中p100表达的抑制效果；平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力；MTS法检测细胞存活；划痕实验检测细胞迁移能力。结果成功获得了p100表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株HepG2（p100I），其中p100的表达明显降低。并且实验表明，该p100表达抑制稳定株的克隆形成能力，抵抗化疗药物Cisplatin诱导的细胞死亡的能力和迁移能力明显低于对照组细胞。结论p100表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株的建立为研究p100蛋白在肝癌中的作用提供了体外细胞系模型，基于此稳定株的研究，发现p100能够影响HepG2肝癌细胞的多种细胞功能。
- 田潇尹洁丁建民史雪彬何津岩张毅高星杰经翔杨洁
- 关键词：HEPG2肝癌细胞SHRNA表达载体
- 人脐带血造血干细胞体外分化为NK细胞的效率及功能检测被引量：3
- 2015年
- 目的检测人脐带血造血干细胞(HSCs)体外分化为自然杀伤(NK)细胞的效率及功能。方法从人脐带血中分离CD34+HSCs,接种于含20μg/L FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)、干细胞生长因子(SCF)、白细胞介素(IL)-7、IL-15及IL-21的SCGM培养基中,定向诱导CD34+HSCs分化为NK细胞。观察细胞生长状态,在分化的第7、14、21及28天,采用流式细胞术检测各阶段CD56、NKG2D、NKp46、CD3、CD19及CD34等细胞免疫表型的表达变化;分化的第21、28天,以分化得到细胞为效应细胞,K562细胞作为靶细胞,设置8∶1、4∶1、2∶1和1∶1 4组效靶细胞比,分别采用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测法和7AAD/CFSE标记法,检测分化得到的细胞杀伤功能。结果脐带血来源的CD34+HSCs在体外适宜的条件下可大量增殖;整个分化进程的不同阶段中,CD3和CD19表达量差异无统计学意义,CD56、NKG2D及NKp46的表达量逐渐增加,最高达(72.57±1.60)%、(32.83±1.29)%和(29.53±2.40)%,CD34的表达量逐渐降低,最低为(12.13±2.01)%。LDH毒性检测法和7AAD/CFSE标记法测得最大杀伤效率可达(49.91±2.76)%和(40.87±1.12)%,8∶1、4∶1、2∶1和1∶1组NK细胞杀伤能力均依次降低(P<0.05),诱导分化28 d的NK细胞杀伤能力与21 d差异无统计学意义。结论人脐带血HSCs在体外适宜的培养条件下,可定向分化为NK细胞,诱导分化得到的NK细胞具有杀伤功能。
- 罗琦尹洁李杨黄珊王玺何景华
- 关键词：造血干细胞免疫表型分型免疫CD34^+HSCS体外分化
