张宝江 作品数:32 被引量:38 H指数:4 供职机构: 新疆农业大学动物医学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家科技支撑计划 新疆维吾尔自治区高校科研计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
重组牛乳源金黄色葡萄球菌黏附因子FnbpA A功能区的表达与鉴定 2013年 黏附素分子FnbpA(纤连蛋白结合蛋白A,fibronectinbindingproteinA)是金黄色葡萄球菌感染早期最重要的致病因子,也是一个重要的免疫靶标。由于不同地区流行的菌株产生的黏附素有一定的差异,将分离自新疆地区奶牛乳源金黄色葡萄球菌黏附素分子FnbpA的A功能区亚克隆至pGEX原核表达载体并转入BL21中诱导表达,SDS—PAGE分析表明,切除GST标签后在63kD处出现特异性条带。纯化切除GST标签的蛋白经弗氏佐剂乳化免疫试验兔。ELISA方法检测免疫兔的抗体效价并评估抗体和葡萄球菌结合能力,结果表明,目的蛋白的抗体效价可达6.7×10^6,并可在体外识别菌体抗原。 苏艳 王世民 李莹 韦海娜 邵俊高 张宝江 殷涛关键词:金黄色葡萄球菌 原核表达 蛋白纯化 免疫原性 ELISA ELISA和微量凝集法检测马流产沙门菌血清抗体的比较 被引量:6 2015年 为比较微量凝集(MSAT)和间接ELISA方法检测马流产沙门菌血清抗体的检出率和符合率,本试验分别用全菌包被间接ELISA、MSAT法对采集的191份马血清及标准阴阳性血清进行马流产沙门菌抗体的检测,并对两种方法进行比较分析。MSAT法和间接ELISA法的阳性检出率分别为45.03%和47.12%,MSAT法与间接ELISA法的符合率为89%。MSAT法不需要精密的仪器,便于操作,操作周期短,但存在观察时的人为误差;间接ELISA具有较高的敏感性、特异性和准确性。在实践中可以将两种方法相结合使用。 杨康 苏艳 李阳 张宝江关键词:血清抗体 间接酶联免疫吸附试验 一株马腺疫链球菌菌株XZ1及其在马腺疫疫苗中的应用 本发明涉及一株马腺疫链球菌(又称马链球菌马亚种,Streptococcus.equi subsp equi)XZ1,CGMCC No.7830,具有序列表1中的16S rRNA基因序列;该菌株分离自马腺疫病马,革兰氏阳性... 苏艳 王彩蝶 刘云涛 张宝江文献传递 一种牛乳源金黄色葡萄球菌Efb蛋白及其制备方法和应用 本发明涉生物工程及免疫学领域。具体地说涉及牛乳源金黄色葡萄球菌来源的Efb蛋白的制备方法和其在免疫中的可能应用。从新疆地区患乳腺炎的牛乳中分离致病性金黄色葡萄球菌和从该菌基因组中克隆Efb基因,该基因具有序列表1中的氨基... 苏艳 刘云涛 韦海娜 姜慧娇 张宝江文献传递 马链球菌马亚种3种抗原蛋白对小鼠免疫的免疫原性分析 被引量:3 2021年 旨在对比研究马链球菌马亚种(Streptococcus equi subsp.equi,S.equi)3种不同抗原蛋白——分选酶A(sortase A,SrtA)、M蛋白(SeM)及IgG结合蛋白(EAG)的免疫原性及免疫保护效果,本研究以表达并纯化的SrtA、SeM及EAG 3种蛋白单独及联合免疫小鼠,免疫后检测了血清抗体效价、抗体亚型、攻毒保护率,以real-time PCR定量检测免疫相关分子,并对攻毒后的肝、脾、肺、肾荷菌量进行检测和病理组织学观察。结果显示:联合免疫组诱导产生的抗体效价及IgG、IgG1和IgG2b的抗体水平均高于各种蛋白单独免疫组,SrtA诱导的IgG2a抗体水平高于SeM和EAG免疫组;攻毒保护力、荷菌量及病理组织学观察结果表明,联合免疫组优于SeM和EAG免疫组;免疫相关分子的荧光定量PCR检测结果显示,SrtA诱导的MHCⅠ、TCR、TLR 2、TLR 3及TLR4的转录水平显著高于SeM、EAG免疫组和对照组,3种抗原联合免疫可显著提高MHCⅠ分子及TLR 3分子的转录水平。综上表明,SrtA具有较强的免疫调节和诱导能力,3种蛋白联合免疫可诱导产生较高的免疫水平和良好的免疫保护效果。该结果为马腺疫亚单位疫苗的研究提供了理论参考和试验基础。 吕芬芬 马晓慧 汪丽 马陈 张宝江 苏艳关键词:免疫原性 小鼠模型 马源马链球菌兽疫亚种3株新疆分离株基因型的鉴定及MLST分析 被引量:2 2021年 【背景】马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus,SeZ)是引起马腺疫的主要病原,还可引起猪链球菌病,加强该菌的地方株分子流行病学监测对有效防控相关疫病十分必要。【目的】对新疆地区2个马场SeZ分离株进行鉴定和药敏特性分析,并分析3株新疆分离株的分子流行与菌株的遗传进化特征。【方法】对分离纯化的3株病原菌(ZHZ113、ZHZ211和ZHZ523)进行染色观察、生化及药敏特性检测,对16S rRNA和SeM基因进行遗传进化分析,以链球菌7个管家基因arcC、nrdE、proS、spi、tdk、tpi和yqiL为目的基因对3株分离菌进行多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)研究。【结果】3株SeZ的药敏结果显示这3株分离菌对不同抗生素的耐药程度不同,但均对头孢西丁、庆大霉素、链霉素、红霉素、左氧氟沙星、环丙沙星、土霉素等11种药物敏感。16SrRNA基因序列分析显示这3株分离菌均属于Ⅱ群(兽疫链球菌)。3株菌的MLST分型结果分别为ST39、ST419、ST421型,其中ST419和ST421型为SeZ目前尚未见报道的新ST型。SeM基因分析结果显示马源SeZ在不同国家、不同动物和不同时间段上的流行分布存在差异和动态变化的特点。【结论】3株SeZ分离菌分别与美国犬源及马源菌株亲缘关系较近,反映部分SeZ株在新疆地区的基因型分布及分子流行特点。 张泽华 张欢 汪丽 古丽米热·对山巴依 吕芬芬 蒲小峰 张宝江 苏艳关键词:马链球菌兽疫亚种 多位点序列分型 药敏特性 Kozak序列对金黄色葡萄球菌黏附因子FnBPA-A DNA疫苗诱导小鼠免疫应答的影响 被引量:5 2013年 黏附因子FnbpA(纤连蛋白结合蛋白A,Fibronectin binding protein A)是金黄色葡萄球菌表面的蛋白质成分,是该菌感染早期最重要的致病因子,可促进其对寄主组织的侵入,也是一个有潜力的免疫靶标。将牛乳源金黄色葡萄球菌中FnBPA基因的A功能区克隆至真核表达载体中,分别构建含Kozak序列和不含Kozak序列的FnBPA-A基因真核表达载体,重组质粒经鉴定测序正确后,免疫C57BL/6小鼠检测其抗体水平和淋巴细胞增殖情况,并对各组小鼠进行攻毒实验。检测的结果表明Kozak修饰的重组DNA在血清抗体效价(P<0.05)和免疫保护率方面均优于不含Kozak序列的重组DNA,在刺激淋巴细胞增殖方面Kozak修饰的重组DNA的刺激效果虽然也高于不经修饰的重组DNA,但是差异不显著(P>0.05)。根据总体的免疫效果来看,Kozak序列对增强FnBPA的重组DNA疫苗诱导的免疫应答起了不容忽视的作用。 苏艳 王世民 邵俊高 张宝江 韦海娜关键词:金黄色葡萄球菌 KOZAK序列 免疫应答 牛源金黄色葡萄球菌粘附因子Efb与ClfA的免疫生物学特性比较 被引量:1 2015年 为评价与比较金黄色葡萄球菌的粘附因子Efb(Extracellular fibrinogen-binding protein)和Clf A(Clumping factor A)的抗原性、粘附特性及其抗血清对金黄色葡萄球菌菌体的识别能力、抗粘附能力及免疫保护力等免疫生物学特性,分别构建Efb和Clf A的重组表达载体,并用纯化的重组蛋白免疫实验动物,分别检测家兔抗血清对菌体的识别能力、抗粘附能力以及小鼠抗血清的抗体效价和免疫保护作用。结果显示,Efb和Clf A均有与纤维蛋白原(Fibrinogen,Fg)结合的能力,且Efb蛋白对纤连蛋白(Fibronectin,Fn)的结合能力优于Clf A(P<0.01),Clf A免疫组抗血清对全细菌的识别能力优于Efb免疫组(P<0.01)。与对照组相比Efb和Clf A免疫组的抗血清均能显著抑制金黄色葡萄球菌对Fg和Fn的粘附(P<0.01),Efb免疫组对金黄色葡萄球菌的粘附抑制优于Clf A,两种粘附因子免疫小鼠后产生的血清抗体效价与对照组比较有显著的升高,抗体滴度可达1∶40 500,攻毒结果显示Efb与Clf A免疫组均对小鼠具有良好的保护效果。该研究结果对Efb在金黄色葡萄球菌的亚单位疫苗的应用奠定了基础。 刘云涛 苏艳 张宝江 苏玲玲 姜慧娇关键词:金黄色葡萄球菌 EFB 金黄色葡萄球菌黏附素ClfA等抗体抑制该菌黏附牛乳腺上皮细胞效果的比较 2018年 【目的】为从免疫的角度比较和分析黏附素分子细胞外纤维蛋白原结合蛋白(Extracellular fibrinogen-binding protein,EfB)和纤维连接蛋白结合蛋A(Fibronection binding protein,FnBP)对聚集因子A(Clumping factor A,ClfA)抑制牛源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)黏附牛乳腺原代上皮细胞作用的增强效果。【方法】本试验分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定;将真核重组质粒EfB和FnBPA分别与ClfA组合免疫新西兰大白兔,并利用免疫后抗体体外抑制2株SA分离株侵染牛乳腺上皮细胞,采用平板计数法定量检测与比较不同免疫组合诱导抗体对黏附的抑制作用;对SA和乳腺上皮细胞分别进行荧光染色,观察不同免疫组合诱导的抗体对黏附抑制效果的差异。【结果】成功分离培养了牛乳腺原代上皮细胞;证明了构建的ClfA、FnBPA和EfB真核重组表达质粒均可在细胞中表达,且在免疫实验兔后可诱导特异性抗体的产生;细菌平板计数和荧光染色观察的结果表明,黏附素分子单独和组合免疫的抗体对该菌不同菌株(GY278和GY309)的黏附抑制能力不同,ClfA抗体的黏附抑制能力最强,FnBPA分子A区的黏附抑制能力优于D区。FnBPA、EfB分别与ClfA联合免疫抗体对黏附的抑制程度高于黏附素分子单独免疫组,FnBPA分子A区对ClfA黏附抑制的增强作用优于D区,FnBPA-A区与Efb相比对ClfA的黏附抑制增强差异不显著。【结论】FnBPA-A、FnBPA-D和EfB分别与ClfA联合免疫可不同程度地影响ClfA的黏附抑制效果,该结果为以黏附素分子为靶点的牛乳腺炎疫苗的研究提供了实验数据。 马鹏睿 王彩蝶 张宝江 苏艳关键词:金黄色葡萄球菌 抗体 牛乳腺上皮细胞 陆地棉新陆早19号胚珠离体培养体系的建立及短时低温处理对纤维伸长和伸长基因表达的影响 棉花胚珠离体培养方法被广泛用于棉纤维发育的研究,这种方法使对纤维的分化和发育研究能够在可控的条件下进行。离体培养胚珠上产生的纤维与自然生长的纤维,在发育和生长组份上具有相似性,可用于研究各种因素对棉纤维在起始分化、纤维伸... 张宝江关键词:陆地棉 基因表达 棉纤维发育 纤维伸长 文献传递