张洪祖
- 作品数：6 被引量：22H指数：3
- 供职机构：南京大学更多>>
- 发文基金：江苏省应用基础研究计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- Cecropin-X发酵过程中工程菌质粒稳定性的研究被引量：9
- 2004年
- 通过连续斜面转接实验 (5 0次 )检测重组Cecropin X工程菌质粒的结构稳定性 ,采用 30L自动控制发酵罐观察不同培养基 ,有无选择压力和溶氧高低等培养条件对质粒分裂稳定性的影响。结果表明 ,该工程菌质粒具有结构稳定性和分裂不稳定性。当外源蛋白表达时 ,便会出现分裂不稳定性 ,表达量越高 ,质粒丢失情况越严重。经1 2h的培养 ,当采用TB和 2×LB作为发酵培养基时 ,带质粒的菌为 6 8 5 %和 98 0 % ,包涵体得率有很大差异 ,干重分别为 1 2 4和 0 4 0g L。发酵培养基中 (TB)氨苄青霉素浓度为 0和 1 0 0 μg mL时 ,带质粒的菌为 6 8 5 %和 92 0 % ,包涵体得率基本一致 ,干重分别为 1 2 4和 1 2 0g L。通过改变搅拌速度来调节溶氧量 ,当转速为 1 5 0和 2 5 0r min时 ,带质粒的菌为 6 8 5 %和 1 0 0 % ,包涵体得率有较大差异 ,干重分别为 1 2 4和 0 71g L。
- 邱英华沈益王玉海徐贤秀董雪吟张洪祖
- 关键词：发酵质粒稳定性
- 一种高效纯化血清淀粉样物质A(SAA)的方法
- 2002年
- 通过密度梯度超速离心、脱脂从急性相胸水中分离得到含有血清淀粉样物质A(SerumAmyloidA,SAA)的高密度脂蛋白(HDL),再通过两次SephacrylS 200层析纯化SAA蛋白.经SDS PAGE电泳和WesternBlotting检验证实得到的SAA蛋白纯度高,可作为抗原免疫动物制备抗体.方法可用于从胸水中大量制备SAA.
- 周利军蔡丹昭张洪祖
- 关键词：SAA密度梯度离心HDLSDS-PAGE电泳WESTERN高密度脂蛋白
- 抗菌肽cecropin-Xm在大肠埃希菌中的串联表达与抑瘤作用被引量：4
- 2007年
- 在TNFα基因3′端连接抗菌肽cecropin-Xm基因多拷贝串联体,与温度诱导的表达载体pRCs组成表达载体pRCs-TNFα-(cecropin-Xm)n(n=1,2,3),并在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白TNFα-(cecropin-Xm)n(n=1,2,3)。SDS-PAGE结果显示,在同样表达条件下应用BL21(DE3)/pRCs-TNFα-(cecropin-Xm)2表达系统可获得比BL21(DE3)/pRCs-TNFα-cecropin-Xm系统多出一倍的目的物cecropin-Xm。融合蛋白经CNBr切割后用CM52纤维素柱分离纯化得到纯度大于95%的具有抑菌活性的抗菌肽cecropin-Xm,体外MTT抑瘤实验表明cecropin-Xm具有广谱杀灭肿瘤细胞的作用并且对正常细胞影响极小。
- 沈益劳学刚耿伟张洪祖徐贤秀
- 关键词：抗菌肽抑瘤作用
- 异常凝血酶原N端F1片段及其抗血清的制备
- 2003年
- 正常人血浆经钡盐吸附、分段盐析、DE-52离子交换层析分离纯化到正常凝血酶原,然后经牛凝血酶酶切、DE-52离子交换层析分离到凝血酶原片段1,再经加热脱羧后得到异常凝血酶原的N端F1片段.将该片段免疫家兔,获得的抗血清与肝细胞性肝癌(HCC)患者血浆有抗原抗体反应,而与正常人血浆无反应,为研制新型的HCC检测试剂盒奠定了基础.
- 蔡丹昭周利军张洪祖
- 关键词：肝细胞性肝癌异常凝血酶原抗血清抗原抗体反应肿瘤诊断
- 溶氧对杀菌肽-X发酵工艺的影响被引量：2
- 2004年
- 本研究采用 30L自动控制发酵罐研究了重组杀菌肽 X工程菌的基本发酵条件。经 12h发酵培养 ,发酵培养基中氨苄青霉素浓度为 0和 10 0 μg mL时 ,包涵体得率基本一致 ,干重分别为 1 2 4和 1 2 0g L ;控制溶氧为 2 0 %～30 %和溶氧自然变化 (转速分别为 2 5 0和 15 0r min)的条件下 ,包涵体得率有较大差异 ,干重分别为 0 0 5、0 71和1 2 4g L。在较优化的发酵条件下 ,目的融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 4 5 %～ 5 0 %。
- 邱英华沈益王玉海董雪吟张洪祖徐贤秀
- 关键词：发酵溶氧包涵体
- 抗菌肽-X基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：7
- 2003年
- 用PCR技术获得抗菌肽-X基因、TNFα基因,与温度诱导的表达载体pRC连接成为重组表达载体,导入大肠杆菌TG1,通过温度诱导表达重组蛋白。将重组质粒转入不同的表达菌中进行表达,经SDS-PAGE选出E.coliBL21(DE3)为最佳表达的宿主菌。培养后,离心得菌体,经超声破碎离心得包涵体,溶解后用CNBr切割并透析,最后经CM52纤维素柱分离纯化得到有活性高纯度的抗菌肽-X。
- 沈益邱英华劳学刚张洪祖董雪吟徐贤秀
- 关键词：克隆大肠杆菌
