徐元基
- 作品数：109 被引量：182H指数：8
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 用于筛选组蛋白去乙酰化酶抑制剂细胞模型的验证被引量：1
- 2010年
- 目的验证已建立的组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂筛选细胞模型,并采用该模型进行药物筛选。方法采用脂质体转染法将含有TA1和TA2启动子元件的荧光素酶报道基因真核表达载体pTA1-Luc和pTA2-Luc导入COS-7细胞,G418筛选获得稳定转染上述报告基因系统的细胞克隆。以特异性HDAC抑制剂缩酯环肽FK228,N-辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)和曲古抑菌素A(TSA)为阳性对照,通过测定荧光素酶活性评估TA1和TA2启动子对HDAC抑制剂的反应;并采用此细胞模型对其他抗肿瘤药物和植物提取物进行初步筛选。结果稳定转染的COS-pTA1及COS-pTA2细胞对HDAC抑制剂具有良好的浓度依赖性(FK228:相关系数为0.7236;SAHA:相关系数为0.7997;TSA为相关系数为0.9815;P<0.01),其中COS-pTA1的特点是灵敏度高,可以有效避免因样品活性低而出现漏检。COS-pTA2细胞的特点是检测背景低,特异性强,可以有效排除假阳性的标本。两种细胞模型的联合筛选,可以鉴定具有HDAC抑制活性的化合物。结论该细胞模型可用于筛选具有HDAC抑制活性的先导化合物。
- 杜芝燕王妍徐元基于晓妉
- 关键词：组蛋白去乙酰化酶抑制剂细胞模型药物筛选
- 杂合启动子HREAF的构建及其肝癌特异性分析被引量：2
- 2003年
- 本研究将在几乎所有肝癌细胞中均有高特异性的杂合启动子HREAF用于构建肝癌特异性溶瘤腺病毒。根据文献报道的缺氧应答元件(HRE)和人甲胎蛋白(AFP)核心启动子(AF0.3)基因序列,设计并合成2对引物,采用PCR方法从肝癌细胞基因组DNA中扩增获得大小分别约为.560 bp的HRE DNA片段和310 bp的AF0.3 DNA片段,连接到pGEM-T Easy载体进行测序,证明获得了HRE和AF0.3的基因片段。将HRE和AF0.3的PCR产物分别进行PstI和SspI酶切并末端补平后直接连接,将此约700 bp的连接产物克隆到pGEM-T Easy载体进行测序,证明杂合启动子HREAF构建成功。将HREAF亚克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle并在其后克隆入受其调控的腺病毒早期基因E1,构建成肝癌特异性溶瘤腺病毒穿梭载体pShuttle-HREAF-E1,经PCR及酶切鉴定。将pShuttle-HREAF-E1转染肺癌细胞株及AFP产量不等的不同人肝癌细胞株,经Ela的RT-PCR检测证实杂合启动子HREAF可调控目的基因在AFP产量不等的不同人肝癌细胞系中特异性高表达。杂合启动子HREAF及腺病毒穿梭载体pShuttle-HREAF-E1的构建为进一步研制肝癌特异性重组溶瘤腺病毒及其体内外肝癌特异杀伤作用的研究打下了基础。
- 陈泽建杜芝燕徐元基张金强陈惠华陆应麟
- 关键词：肝癌溶瘤腺病毒基因克隆
- 丙型肝炎病毒（HCV）感染体外培养细胞模型的初步探讨
- ＜正＞ 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（HCV）引起的严重威胁人类健康的重要传染病之一。随着丙型肝炎病原学的确定、抗HCV抗体及HCV-RNA检测方法的建立,国内外对丙型肝炎的研究日趋深入。但目前尚无特效的预防和治疗方法,因此...
- 张贺秋王国华陈坤徐元基夏芳凌世淦陈德蕙
- 文献传递
- 一条新的转移相关基因mag-1的研究
- 我室张金强博士利用抑制消减杂交结合基因芯片技术,从一对具有不同转移能力的模型细胞株(人肺巨细胞癌高低转移细胞株PLA801 D、C)中筛选获得若干与转移表型正相关EST片段。其中3号片段经电子延伸获得全长序列,命名为ma...
- 陆应麟蔺会云谭晓刚刘刚陈惠华王妍徐元基杜芝燕
- 关键词：肿瘤转移转录本表达谱功能基因
- 文献传递
- 利用RNA干扰技术研究14-3-3ζ对肺癌细胞转移的抑制作用被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨14-3-3ζ对肺癌细胞转移的押制作用。方法:以人肺巨细胞癌低转移细胞株为模型,利用RNAi技术研究14-3-3ζ被干涉后肿瘤细胞恶性表型的变化,探讨14-3-3ζ与肿瘤转移的相关性。结果:本研究发现14-3-3ζ被干涉后细胞的集落形成能力明显提高,黏附能力明显降低,细胞迁移、侵袭能力明显提高。结论:14-3-3ζ可能抑制肺癌细胞的转移。
- 陈惠华谭晓刚王妍徐元基杜芝燕陆应麟
- 关键词：肿瘤转移肺肿瘤RNA干扰
- 基于载体pSVK的乙肝治疗性质粒DNA疫苗的发酵生产方法及其专用工程菌及高产发酵培养基
- 本发明公开了一种乙肝治疗性质粒DNA疫苗pSVK-HBV的发酵生产方法及其专用工程菌及高产发酵培养基。所述工程菌是转化有乙肝治疗性质粒DNA疫苗pSVK-HBV的大肠杆菌XL10-Gold，命名为E.coli XL10-...
- 于继云阎瑾琦王宇张巍徐元基张亮王琳朱晓明杜芝燕
- 文献传递
- 可复制型抗乙肝免疫基因治疗剂pSVK-HBVE的构建与表达
- 2014年
- 目的构建能同时表达抗体小分子靶向干扰素(dsFvα)和人白介素12(hIL-12)的可复制型抗乙肝免疫基因治疗质粒pSVK-HBVE。方法将pVAX-HBVE质粒双酶切,回收dsFvα-IRES-hIL12片段;将dsFvα-IRES-hIL12片段克隆入早期构建的pSVK载体,得到重组质粒pSVK-HBVE。将重组质粒瞬时转染到293T细胞,ELISA法检测目的基因表达;提取重组质粒pSVKHBVE,注射乙肝转基因小鼠腿部肌肉并采用电穿孔递送,定量PCR检测注射前后转基因小鼠体内HBV基因拷贝数的变化。结果pSVK-HBVE经酶切和测序分析与预期设计完全一致,显示重组质粒构建成功;ELISA检测显示dsFvα和IL-12基因在细胞上清中获得表达;注射重组质粒pSVK-HBVE 30μg仅1次即可使转基因小鼠体内的HBV基因拷贝数降低2个数量级。结论成功构建能够同时表达抗体靶向干扰素(dsFvα)和hIL-12的可复制型抗乙肝免疫基因治疗质粒,为慢性乙肝免疫基因治疗提供新的备选方案。
- 侯沙沙高燕王宇武帅朱晓明郭炳冉张巍徐元基阎瑾琦于继云
- 关键词：乙肝复制型IFN-Α
- 响应面法优化工程菌E.coli HBVA发酵培养基被引量：2
- 2013年
- 目的:对携带乙型肝炎DNA疫苗质粒pSVK-HBVA的工程菌发酵培养基进行优化。方法:采用单因素法比较不同碳源、氮源以及无机盐对发酵产量的影响;利用响应面法对各因素最佳水平及交互作用进行进一步研究。结果:单次单因子法优化结果显示,LB为最适基础培养基,最佳碳源和氮源分别是甘油和国产的眎蛋白胨;PB实验结果表明,影响质粒产量的3个主要影响因子为眎蛋白胨、甘油、NH4Cl,经过最陡爬坡和CCD优化后的发酵培养基,质粒的容积产率达到13.61 mg/L,是基础培养基LB发酵产量的2倍以上。结论:优化了工程菌E.coli HBVA的发酵培养基,提高了质粒pSVK-HBVA的产量。
- 王宇吴昊朱晓明张亮徐元基张巍杜芝燕肖毅王琳王琳李盼侯沙沙于继云
- 关键词：DNA疫苗发酵培养基优化响应面
- 稳定表达hTERT/Luc的小鼠黑色毒瘤肺转移模型的建立被引量：3
- 2013年
- 目的建立稳定共表达荧光素酶基因和人端粒酶逆转录酶(hTERT)的小鼠黑色素瘤B16细胞系,并通过尾静脉注射的方式建立小鼠肿瘤肺转移模型。方法利用DNA重组技术将hTERT基因和荧光素酶基因Luc定向插入到真核表达载体,构建真核表达质粒pIRES-neo-hTERT和pIRES-hyg3-Luc,利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000共转染小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418及潮霉素B加压筛选出稳定转染的细胞株。应用Western blot法及免疫荧光法检测hTERT和Luc基因在B16细胞中的表达;将稳定共表达hTERT和Luc的B16-hTERT/Luc细胞株通过尾静脉注射的方式接种雄性C57BL/6小鼠建立肿瘤肺转移模型,并通过活体成像技术检测小鼠肺部肿瘤的生长。结果建立了稳定共表达hTERT和Luc的小鼠黑色素瘤B16单克隆细胞株B16-hTERT/Luc,经检测hTERT基因和荧光素酶基因Luc在单克隆细胞株中的表达分别为84%和98%。通过尾静脉注射的方式成功建立了小鼠肿瘤肺转移模型,应用活体成像技术能方便地检测到B16-hTERT/Luc肿瘤在小鼠体内的生长情况。结论成功建立了可用于活体成像技术检测的稳定表达hTERT的小鼠黑色素瘤肺转移模型。
- 肖毅高江平高昆阎瑾琦张亮王宇徐元基王晓雄于继云
- 关键词：荧光素酶HTERT活体成像移植瘤
- 肿瘤转移相关蛋白及其编码基因
- 本发明公开了一种肿瘤转移相关蛋白及其编码基因。本发明所提供的肿瘤转移相关蛋白，是具有序列表中SEQ ID №：5氨基酸残基序列的蛋白质，或者是将SEQ ID №：5的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加...
- 陆应麟张金强蔺合云王妍谭晓刚陈惠华徐元基杜芝燕
- 文献传递
