易维京
- 作品数：43 被引量：90H指数：6
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学自动化与计算机技术更多>>
- 人源N-末端脂多糖结合蛋白(NH-LBP)的原核表达及抗原性分析
- 2009年
- 目的在大肠杆菌表达系统中大量表达、纯化N-末端脂多糖结合蛋白(NH-LBP)并检测其抗原性。方法构建pET28a-NHLBP质粒,转入大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达成功后扩大培养、提取包涵体、亲和层析分离纯化,并将纯化得到的NH-LBP融合蛋白经Western blot鉴定。结果成功构建pET28a-NH-LBP表达质粒并转入BL21细菌进行诱导表达,目的蛋白以包涵体形式表达为主;经扩大培养、分离纯化产物大小与NH-LBP融合蛋白理论计算值一致,经Western blot检测具有B细胞表位。结论原核表达人源N-末端脂多糖结合蛋白(NH-LBP)是制备抗原的一种可行方便的方法,为筛选针对NH-LBP的人源性小分子抗体提供了材料。
- 陈锐刘友生朱江段光杰易维京胡川闽
- 关键词：原核表达抗原性
- 双亲和柱分离纯化高纯度抗体Fab酶切片段
- 2014年
- 目的建立利用抗原亲和柱及蛋白G亲和柱纯化抗体木瓜蛋白酶酶切产物中高纯度Fab片段的方法。方法以抗体对应的抗原蛋白与NHS-activated Sepharose 4Fast Flow活化偶联填料偶联制备抗原免疫亲和层析柱,将抗体木瓜蛋白酶酶切产物分别通过蛋白G柱及抗原亲和柱制备抗体的Fab片段。通过SDS-PAGE电泳、ELISA测定及临床类风湿因子阳性血清的干扰实验鉴定其制备效果。结果抗体木瓜蛋白酶酶切产物分别通过蛋白G柱及抗原亲和柱后可以依次去除抗体Fc片段及未切开的抗体、木瓜蛋白酶及失活的Fab抗体片段,最终获得高纯度、高活性的Fab抗体片段。SDS-PAGE电泳、ELISA测定抗体Fc段被完全去除,双抗夹心ELISA检测能消除类风湿因子阳性血清导致的假阳性。结论成功建立了双亲和柱分离纯化抗体Fab片段的方法,该方法适用于快速、高质量、大规模制备Fab抗体片段。
- 戚大梁王强易维京
- 关键词：木瓜蛋白酶
- 一个新的高保守自身免疫反应相关分子IRF-4结合蛋白多克隆抗体制备被引量：4
- 2008年
- 目的获得一个新的高保守自身免疫反应相关分子IRF-4结合蛋白（IRF-4-binding protein，IBP）的高效价特异性多克隆抗体。方法通过生物信息学分析选择IBP特异片段（1228～1893bp），目的片段cDNA插入pET32a和pGEX-KG原核表达载体，分别转化BL21感受态细菌，IPTG诱导表达后组合应用阴离子交换层析、His、GST亲和层析技术获得免疫原（pET32a／IBP融合蛋白）及检测原（pGEX-KG／IBP融合蛋白）。HPLC鉴定纯度。利用改良快速免疫法获得兔抗IBP多克隆抗血清，并经蛋白A柱纯化，非特异性抗体吸收。间接ELISA检测抗体滴度、Western blot和免疫组化实验检测抗体特异性。结果表达并纯化的pET32a／IBP融合蛋白纯度达92％，pGEX-KG／IBP融合蛋白纯度达87％。IBP多克隆抗体滴度达1：51200，能特异地和内源性IBP结合。结论成功表达并纯化了IBP融合蛋白，制备了高滴度、高特异性的抗IBP多克隆抗体。
- 张竹君周玉李鹏易维京杨明珍李淑慧胡川闽
- 关键词：IRF-4结合蛋白蛋白纯化多克隆抗体
- HBV preS1 B细胞表位肽及其制备的杂交瘤细胞株与应用
- 本发明涉及SEQ ID NO：2所示的肽段在制备乙型肝炎病毒(HBV)诊断制剂中的应用，由SEQ ID NO：2所示的肽段制备的抗HBV的杂交瘤细胞株CCTCCNO：C201012，由上述的杂交瘤细胞株分泌的抗HBV p...
- 胡川闽易维京李新军陈安
- 烟草节杆菌02181肌酸酶的基因克隆
- 2011年
- 目的在已知烟草节杆菌02181肌酸酶基因部分序列的基础上，从烟草节杆菌02181基因组DNA中克隆得到肌酸酶全基因。方法根据已得到的肌酸酶部分序列，利用基因组步移技术，分另q克隆得到肌酸酶基因已知部分序列的上、下游序列，再将3段序列拼接，得到肌酸酶全基因，并在NCBI上检索证实。结果得到的烟草节杆菌02181肌酸酶基因的全长序列，在NCBI上检索后证实为一新基因，该基因全长1254bp（舍终止密码子TAA），为一完整的开放读码框架（ORF），编码417个氨基酸，理论分子量为46377Da，并与多种不同来源的肌酸酶有着较高的同源性。其中，与Arthrobactersp．FB24来源的肌酸酶氨基酸序列的一致性达到了80％（332／417），同源性则达到了87％（365／417）。结论成功地克隆了烟草节杆菌02181肌酸酶基因，为今后的基因表达奠定了基础，也为肌酐测定试剂的国产化迈出了坚实的一步。
- 智强胡川闵易维京周玉侯小平
- 关键词：肌酸酶基因克隆基因组步移
- 以系统科研培训为体系,开展生理学第二课堂活动被引量：8
- 2010年
- 第二课堂活动在培养具有创新意识、科学思维及团队协作精神等创新人才方面有着重要意义。通过系统科研培训的方式,生理学第二课堂活动从撰写综述、参加国内外学术讲座、课题组讨论和参与课题实验等方面着手,以期达到提高医学生科研工作能力和创新意识的目的。
- 夏建霞易维京熊加祥胡志安
- 关键词：生理学教学方法第二课堂
- 抗人心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其应用
- 2013年
- 目的制备抗人心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)单克隆抗体(mAb),鉴定其基本特性并通过配对检测临床样本血清,对已配对的mAb进行表位鉴定。方法通过已制备的H-FABP抗原和合成肽免疫BALB/c小鼠,常规融合筛选后进行抗体亚型鉴定、效价和亲和力检测,纯化mAb后通过间接ELISA、Western blot法对mAb进行特异性检测;将获得的mAb分别作为捕获和检测抗体,经过配对建立检测重组H-FABP的ELISA体系,并初步用于临床血清检测;采用生物信息学分析设计2段H-FABP表位,通过原核表达获得其短肽并纯化,通过Western blot法对配对的mAb进行表位鉴定。结果成功获得4株抗H-FABP特异性mAb,亚类分别为IgG2a和IgG2b,抗体效价为1∶51 200～1∶1024 000,亲和力最高可达到9.02×109mol/L;经Western blot法和间接ELISA鉴定均能够特异检测重组H-FABP蛋白,经过配对发现mAb 3-H5和1-F10能够检测重组H-FABP,并在其临床血清样本检测中发现正常组和急性心梗组之间H-FABP水平具有显著性统计学差异;通过表位鉴定发现未知表位的mAb 1-F10能够特异识别位点为H-FABP的第86到第133位氨基酸。结论制备了4株高特异性和高亲和力的抗H-FABPmAb,成功建立了检测临床样本血清中的ELISA体系,并对其表位进行了分析鉴定。
- 韩起丛珊易维京陈莎梁文斌陈安胡川闽李淑慧
- 关键词：H-FABP单克隆抗体
- 利用简并PCR克隆烟草节杆菌02181肌酸酶基因被引量：4
- 2007年
- 目的用简并PCR从烟草节杆菌02181中扩增出肌酸酶部分序列,以期获得其全长编码基因。方法从NCBI查询已发表的肌酸酶蛋白质序列,将其递交到Block Maker服务器,利用工具软件CODEHOP设计简并引物,以烟草节杆菌02181基因组DNA为模板做PCR。结果将所得目的片段(414bp)在NCBI上BLASTx,结果表明,所得序列与不同菌种来源的肌酸酶高度同源,其中与节杆菌属肌酸酶基因的同源性最高,一致性达到了71%。结论从烟草节杆菌02181中成功克隆出了肌酸酶基因的部分序列。
- 智强李淑慧高利宏李鹏周玉易维京王源胡川闽
- 关键词：肌酸酶简并PCRMAKERCODEHOP
- 产生抗人NGAL特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其产生的单克隆抗体与应用
- 本发明公开了产生抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株及由其产生的单克隆抗体。所述杂交瘤细胞株由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列免疫Balb/c小鼠后，小鼠脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合...
- 陈安胡川闽何莹易维京
- 文献传递
- 浆膜腔积液检出白血病细胞的观察分析被引量：12
- 2004年
- 目的 对 1989年 5月～ 2 0 0 2年 4月收集到的浆膜腔积液中查见白血病细胞的 10例患者的临床及实验资料进行回顾分析。方法 浆膜腔积液涂片制作采用推片法 ,涂片染色采用瑞吉染色 ,有经验的细胞学检验人员鉴定白血病细胞。结果 查见白血病细胞 10例 ,其中急性粒 单核细胞白血病 (M4)、慢性粒细胞白血病(CML)、多发性骨髓瘤 (MM)各 2例 ,急性粒细胞白血病 (M2 )、急性单核细胞白血病 (M5)、慢性粒 单细胞白血病(CMMOL)、急性淋巴细胞白血病 (ALL)各 1例 ,均为渗出液 ,80 %为血性。检出白血病细胞的患者生存时间从7d～ 14个月 ,中位生存期为 1个月 ,平均生存期为 3.8个月。结论 浆膜腔积液中查见白血病细胞则提示疾病预后不良 ,开展细胞形态学检查十分重要 。
- 周道银惠小阳凌励俞靖龙易维京王学
- 关键词：浆膜腔积液白血病细胞心包积液腹水胸水
