曾令斌
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：重庆市教委科研基金国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肺炎链球菌减毒活疫苗SPY1激发小鼠巨噬细胞应答的免疫作用机制研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨肺炎链球菌减毒活疫苗SPY1对巨噬细胞引起的天然免疫应答及机制。方法体外诱导培养小鼠骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow derived macrophage,BMDM),SPY1作用巨噬细胞6 h和24 h后,分别用RT-PCR和ELISA检测细胞因子的表达情况;SPY1作用于野生小鼠以及TLR2、TLR4缺陷小鼠的BMDM 24 h后,ELISA检测TNF-α和IL-6的表达;Western blot检测各信号分子的磷酸化水平;MAPK、PI3K和NF-κB抑制剂处理后,检测细胞因子TNF-α和IL-6的表达变化。结果 SPY1作用巨噬细胞后可引起强烈的免疫应答,此过程不依赖于TLR2和TLR4。MAPK、PI3K和NF-κB信号通路参与调控SPY1引起的巨噬细胞天然免疫应答。结论肺炎链球菌减毒活疫苗SPY1通过MAPK、PI3K和NF-κB通路产生巨噬细胞天然免疫应答,这一过程不依赖于TLR2和TLR4。
- 高松吴盈盈曾令斌崔晶晶孙潇雨胥文春
- 关键词：巨噬细胞固有免疫应答
- 无标签NT-proBNP重组蛋白的获得及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2012年
- 目的通过原核表达,获得不带标签的NT-proBNP重组蛋白,并用其免疫新西兰大白兔,制备兔抗NT-proBNP抗体。方法从重组菌pET-32a(+)-NT-proBNP提取重组质粒,通过PCR扩增出目的 DNA片段,插入pCold TF载体,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白。经镍柱亲和纯化、HRV 3C蛋白酶酶切、镍柱亲和纯化,制备不带标签的纯蛋白质,并用临床商品化试剂盒验证其抗原性。用该蛋白质免疫新西兰大白兔制备抗体,western blot鉴定其特异性。结果成功获得高纯度的不带标签的NT-proBNP蛋白,该蛋白质能被商品化的试剂盒识别。用该蛋白质免疫新西兰大白兔成功制备出高效价高特异的抗体。结论成功制备高纯度的无标签NT-proBNP蛋白及其多克隆抗体,为NT-proBNP在临床上的广泛应用奠定了基础。
- 谌海兰陈曦徐绣宇谢佳瑛刘宇思赵家宁曾令斌陈特张雪梅尹一兵胥文春
- 关键词：N末端B型钠尿肽原原核表达蛋白质纯化多克隆抗体
- 以Pam2CSK4为佐剂的减毒活疫苗D39△CPS-TA可保护幼鼠抵抗肺炎链球菌感染被引量：1
- 2014年
- 目的评价新型减毒肺炎链球菌疫苗株D39△CPS-TA与佐剂Pam2CSK4联用时在幼鼠模型中的免疫保护效果及安全性。方法 D39△CPS-TA、D39△CPS-TA+霍乱毒素(cholera toxin,CT)、D39△CPS-TA+Pam2CSK4经鼻免疫C57/BL6幼鼠,每周1次,共4次。末次免疫后1周,酶联免疫吸附法(ELISA)测定抗体及细胞因子水平。末次免疫后2周,采用19F型和2型肺炎链球菌攻毒,观察免疫保护效果。生存率实验评价D39△CPS-TA的安全性;从体质量变化和肺组织病理学改变2个角度,评价Pam2CSK4的安全性。结果 D39△CPS-TA+Pam2CSK4免疫幼鼠可有效引起抗原特异性IgG升高,其中以IgG1为主;能有效促进IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-17A水平升高;能有效抵抗19F型肺炎链球菌在小鼠鼻咽部定植;能有效提高小鼠经2型肺炎链球菌攻毒后的生存率。高剂量D39△CPS-TA可被幼鼠耐受,Pam2CSK4较CT安全。结论 D39△CPS-TA+Pam2CSK4经鼻免疫幼鼠可安全有效地刺激其体液免疫和细胞免疫,进而对抗肺炎链球菌感染。
- 曾令斌廖璞宋志新赵家宁高松吴盈盈尹一兵胥文春
- 关键词：肺炎链球菌疫苗佐剂
- 重组人脂蛋白相关磷脂酶A2的原核表达及其纯化
- 2013年
- 目的原核表达并纯化重组人脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase A2,LP-PLA2),并初步确定其保存条件。方法将重组表达菌pCold TF-LP-PLA2-BL21(DE3)和pET28-HRV 3C-BL21(DE3)分别经IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经SDS-PAGE鉴定后,经Ni-Sepharose 6FF金属螯合层析粗提重组蛋白,经HRV 3C蛋白酶酶切去除融合标签后,用Blue Sepharose誖6 Fast Flow(蓝胶)染料亲和层析及HiPrep 16/60 Sephacryl S-100 HR分子筛进行分离纯化;通过人LP-PLA2临床检测金标准ELISA试剂盒验证重组蛋白;将重组LP-PLA2置于含10 mmol/L CHAPS和0.5 mmol/L PMSF的PBS溶液中,分别于4℃、室温、37℃保存1周以及-20、-80℃冻存4个月后,确立重组蛋白的保存条件。结果重组LP-PLA2相对分子质量约100 000,以可溶性形式表达,包涵体无表达;纯化后的重组LP-PLA2蛋白含量为3.68 mg/ml,蛋白回收率为21%,纯度可达95%,可被ELISA试剂盒识别,且具有良好的线性关系(R2=0.996 4);重组LP-PLA2于4℃保存1周,-20、-80℃冻存4个月,均无降解现象。结论成功表达、纯化了重组LP-PLA2,并初步确定了其保存条件。
- 陈曦谌海兰陈特曾令斌赵家宁尹一兵胥文春
- 关键词：脂蛋白相关磷脂酶A2标准品纯化
- 以Compound48/80为佐剂的减毒肺炎球菌活疫苗SPY1对幼鼠的保护效果及机制研究
- 目的:肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)是一种常见的定植于人类上呼吸道黏膜表面的革兰阳性菌，能引起肺炎、脑膜炎、败血症、中耳炎等一系列疾病。在全球范围内，特别是亚非发展中国家，肺炎链...
- 曾令斌
- 关键词：黏膜佐剂保护性免疫减毒活疫苗
- 文献传递
- 人附睾蛋白4化学发光定量测定法的建立与评价被引量：1
- 2014年
- 目的建立人附睾蛋白4（HE4）的化学发光定量检测方法,并进行方法学评价。方法血清中HE4与包被抗HE4单克隆抗体的微磁珠和辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗HE4单克隆抗体反应形成双抗体夹心结构,HRP可催化发光底物液（含鲁米诺-H2O2-增强剂）产生大量光信号,根据光信号的量计算血清中HE4的浓度。依据国家体外诊断试剂性能评价指南性文件和美国临床和实验室标准化协会（CLSI）指南性文件,对本方法进行系统评价。结果建立的方法空白限（LoB）为1.014pmol/L、检测限（LoD）为5.252 pmol/L、定量检测限（LoQ）为10.568 pmol/L;甲胎蛋白（α-fetoprotein,AFP）≤400 IU/mL、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,CEA）≤1 777μg/L、糖类抗原（carbohydrate antigen,CA）125≤3 500 U/mL、CA19-9≤3 500U/mL对本方法无明显交叉反应;线性范围为20-1 700 pmol/L;在100 000 pmol/L时未出现明显钩状（Hook）效应;批内变异系数（CV）为1.5%-3.6%;日间CV为3.8%-6.4%;回收率为98.36%-99.14%;血红蛋白≤4.8 g/L、胆红素≤1 077.5μmol/L、乳糜微粒≤6 000浊度、生物素≤50μg/L、类风湿因子≤1 000 U/L对测定结果无明显影响;37℃保存7 d后相对偏差为-6.63%-10.23%;建立的方法（Y）与Fujirebio公司的ELISA试剂（X）进行方法学比对,相关曲线为Y=1.023X-12.280,r=0.989 7（P〈0.01）。结论本研究建立的HE4磁微粒化学发光免疫测定法各项性能符合临床实验室需求,为卵巢癌的辅助诊断提供了有效工具。
- 罗湘宇刘宇思曾令斌赵家宁何敏杨卫平尹一兵胥文春
- 关键词：化学发光法卵巢癌
