李成
- 作品数：26 被引量：77H指数：5
- 供职机构：大连工业大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金辽宁省研究生教育创新计划资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>
- 海参铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及活性鉴定被引量：3
- 2018年
- 采用原核宿主大肠杆菌BL21(DE3)成功表达了具有活性的仿刺参铜锌超氧化物歧化酶(Apostichopus japonicus Cu/Zn-superoxide dismutase,Aj-SOD1)蛋白。利用Trizol法从海参肠组织中提取总RNA,通过反转录PCR扩增获得Aj-SOD1基因的编码序列(GenBank:JX097096.1,459bp),构建克隆载体pMD18-Aj-SOD1;在目的基因两端引入(XhoⅠ/NdeⅠ)酶切位点,构建克隆载体pMD18-AjSOD1(XhoⅠ/NdeⅠ)。将此载体与表达质粒pET30a(+)分别双酶切后连接,构建重组表达载体pET30a-Aj-SOD1。转化至大肠杆菌BL21(DE3),Kan+抗性筛选阳性转化子,获得基因工程菌BL21(DE3)-pET30a-Aj-SOD1。SDS-PAGE和邻苯三酚自氧化法检测发现,经0.1 mmol/L IPTG诱导8h后,成功获得具有抗氧化活性的Aj-SOD1蛋白。
- 车明月穆贤李学一张齐丛丽娜牛庆昌李成
- 关键词：仿刺参铜锌超氧化物歧化酶反转录PCR抗氧化活性
- 非融合海参溶菌酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶活鉴定被引量：2
- 2018年
- 利用实验室已构建好的表达载体pET32a(+)-SjLys,在基因工程菌RoSetta(DE3)plysS中表达重组融合海参溶菌酶rSjLys。利用融合的组氨酸标签,通过Ni 2+-NTA层析柱分离、纯化,获得高纯度的重组海参溶菌酶。利用重组牛肠激酶在22℃、pH 7.4、16h条件下对目的蛋白rSjLys的融合标签Trx-His-S tag进行完全酶切,通过Ni 2+-NTA层析柱纯化得到纯度大于99%的非融合的海参溶菌酶SjLys。实验结果表明,作为i型溶菌酶,与rSjLys比较,非融合海参溶菌酶对指示菌溶壁微球菌具有明显的抑菌作用。
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- 关键词：重组蛋白抑菌活性
- 高效净水异养硝化细菌的筛选鉴定及固定化应用研究被引量：4
- 2014年
- 本研究从海参养殖水体、泥土中筛选出4株具有硝化能力的异养硝化细菌。分别将其游离菌体细胞投入海参养殖水体,测定亚硝态氮、氨氮去除率,筛选出HS-NOB2为高效净化菌株,对HS-NOB2进行16S rDNA扩增及序列测定,初步鉴定为节杆菌(Arthrobacter sp.)。利用海藻酸钠包埋法对高效净化菌体细胞进行固定化,将该固定化菌投入养殖水体及人工合成污水,研究其对水体中亚硝态氮、氨氮的处理效果,并与游离菌体细胞进行比较。结果表明,固定化后亚硝态氮去除率达到49.85%,氨氮去除率达到56.58%,均明显高于游离菌体细胞。上述研究为探寻水体净化提供了新思路,为水质改良剂的实际生产提供可选菌株。
- 窦赫喆侯超高鹏丛丽娜李成
- 关键词：异养硝化细菌亚硝态氮氨氮固定化
- 热处理对海参溶菌酶C端多肽的抑菌活性和结构的影响被引量：3
- 2014年
- 实验优化了重组蛋白C端多肽（SjLys-C）的E. coli Rosetta（DE3）pLysS表达系统,将重组质粒pET-32a （＋）-SjLys-C转入有助于蛋白二硫键正确折叠的新表达宿主E. Coli Rosetta-GamiB（DE3）pLysS中. SDS-PAGE分析表明,重组蛋白SjLys-C在宿主中得到高效可溶表达.抑菌实验结果表明,重组蛋白SjLys-C具有较高的抑菌活性；经100℃处理40 min后,蛋白SjLys-C的抑菌活性提高.分子动力学（ MD）模拟表明, SjLys-C蛋白具有高度的热稳定性,蛋白热处理后未变性,仍维持完整的三级结构.但在热处理过程中, SjLys-C多肽的氨基酸残基随温度变化发生内部结构的重排.其中C端区、 N端区和活性区域（10~20）内氨基酸残基的柔性增加,蛋白整体构象展开,导致被包埋在内部的2个活性位点（Ser18, His48）暴露,并且它们之间的距离缩短；而活性区域（37~47）内氨基酸残基的构象调整,导致区域结构紧凑,使2个活性位点间的距离改变.
- 武瑶梁雯婧李成商旭丛丽娜
- 关键词：抑菌活性分子动力学模拟
- 海参益生菌的筛选、应用及活性物质的研究
- 目前,海参养殖已成为我国北方最大的海水养殖种类之一。近些年,海参生产的集约化和养殖环境的恶化致使各种病害频发,以抗生素药物为主的传统治疗方式又严重影响着水产品的品质。因此,通过增强鱼体自身免疫力对病害进行有效防治显得极为...
- 李成崔静孙蕾牛庆昌马树瑞丛丽娜
- 关键词：益生菌海参养殖胞外多糖抗氧化
- 文献传递
- 季也蒙假丝酵母胞外多糖的分离纯化及抗氧化活性研究被引量：5
- 2016年
- 对一株源于海参肠道的季也蒙假丝酵母产胞外多糖进行分离纯化并对其抗氧化活性进行研究。采用乙醇沉淀、Sevag除蛋白等方法得到胞外粗多糖EPS。EPS经Sepharose强阴离子交换层析分离后,分别得到3个组分EPS1、EPS2和EPS3,对抗氧化活性较高的EPS2采用Sephacryal凝胶过滤层析进行纯化,得到1个单一组分EPS2-1,采用气相色谱法分析其单糖组成,并验证其抗氧化活性。结果表明:EPS2-1是由木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成的;它具有较强的抗氧化活性,当其浓度为0.36 mg/m L时,对羟基自由基的清除率可达100%,明显高于同浓度下Vc对羟基自由基的清除率14.42%;当EPS2-1浓度为0.60 mg/m L时,对超氧阴离子自由基的清除率可达53.22%;同时EPS2-1表现出一定的还原力。研究证明该活性多糖具有很好的应用潜力,值得进一步研究开发。
- 孙晓萌王上丛丽娜李成董亮
- 关键词：胞外多糖分离纯化抗氧化活性
- 海参i-型溶菌酶在毕赤酵母基因工程菌中优化表达及纯化被引量：1
- 2016年
- 将实验室已构建的毕赤酵母基因工程菌(p PIC9K-Sj Lys/GS115)作为海参i-型溶菌酶生产菌株,本研究分别从甲醇浓度、培养基p H、温度和诱导时间对其产酶发酵条件进行优化。实验得出甲醇诱导浓度为1.0%,发酵培养基初始p H 6.0,温度30℃,培养96 h为最佳目的蛋白表达条件,其发酵液中海参i-型溶菌酶含量达10.63 mg/L。将发酵液经离心和超滤浓缩后得到上清液,再经离子交换和凝胶过滤层析纯化获得海参i-型溶菌酶产品,其酶活力达826.44 U/mg。经测定该酶对革兰氏阳性菌溶壁微球菌和革兰氏阴性菌副溶血弧菌均具有明显的抑菌作用。
- 马俊张洋丛丽娜李成
- 关键词：毕赤酵母发酵条件优化酶活性
- 海参溶菌酶C端多肽的异构肽酶活性
- 2016年
- 海参溶菌酶C端多肽与5种异构肽酶的氨基酸残基序列比对发现,其具有较高同源性,维持异构肽酶活性的两个关键位点组氨酸(His)和丝氨酸(Ser)也高度保守。水解底物L-γ-Glu-pNA生成4-硝基苯胺的实验结果表明,C端多肽具有异构肽酶活性。丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF能有效破坏蛋白酶活性,表明Ser是异构肽酶rSjLys-C的关键活性位点,即rSjLys-C属于丝氨酸蛋白酶。确定最适催化条件为37℃、pH 7.4、NaCl 50 mmol/L。rSjLys-C的酶促反应动力学参数Vmax为1.446×10^(-5) mmol/(L·s),K_m为0.395 7mmol/L,k_(cat)为1.509×10-3 s^(-1),k_(cat)/K_m为23.813L/(mol·s)。
- 牛庆昌李成梁雯婧马俊随瑞瑞张洋丛丽娜
- 关键词：海参溶菌酶活性位点
- 渤海湾仿刺参养殖圈内贝莱斯芽胞杆菌B-VE的分离鉴定及其产抗菌脂肽的研究被引量：1
- 2021年
- 为分离筛选具有广谱抑菌作用的细菌并研究其抗菌物质,实验利用琼脂扩散法和牛津杯法,以溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、大肠埃希菌为指示菌,从渤海湾大连海域仿刺参养殖圈中分离筛选出9株活性菌,2株具有广谱抑菌效果,其中1株抑菌效果最强。通过形态学和分子生物学检测分析,鉴定该菌株为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis),命名为B-VE。通过酸沉法分离发酵液中的抑菌物质,利用飞行时间质谱对其分子量进行检测,初步确定其隶属于抗菌脂肽类物质,抑菌物质包括的三种物质分别为伊枯草菌素(Iturin)、芬荠素(Fengycin A)和杆菌霉素(Bacillomycin D)。实验发现该抗菌脂肽类粗提物具有较强的pH和温度耐受性,可以耐受多种蛋白的酶解作用,且在多种有机溶剂中可以保持较强的抑菌效果。利用扫描电镜检测发现其主要通过破坏细菌的细胞膜对溶壁微球菌产生抑菌作用。结果表明,贝莱斯芽胞杆菌B-VE广谱抑菌,所产抗菌脂肽对细菌具有较强的破膜作用,且理化性质稳定,具有较好的开发利用价值。
- 冀倩倩孙建东王健伟杨艳宇齐洪庆刘影简凡杰李成
- 关键词：海洋微生物抑菌理化性质
- 仿刺参溶菌酶在重组酿酒酵母中的表达被引量：1
- 2017年
- 采用酿酒酵母MKP-0表达仿刺参溶菌酶蛋白(AjLys)。以质粒pMD18-AjLys为模板,PCR扩增将组氨酸标签His-tag克隆到AjLys基因的N末端,构建克隆载体pMD18-His6-AjLys。根据密码子偏好性,通过定点突变对AjLys蛋白第69、77和95位的3个精氨酸的密码子进行优化,得到克隆载体pMD18-His6-AjLys(Δ69,77,95)。经SpeⅠ/BglⅡ酶切,构建重组表达质粒pESC-LEU-His6-AjLys和pESC-LEU-His6-AjLys(Δ69,77,95)。基因工程菌pESC-LEU-His6-AjLys(Δ69,77,95)/MKP-0通过半乳糖诱导72h后,Western Blot检测结果表明其成功表达了AjLys蛋白。抑菌实验结果表明,AjLys蛋白对溶壁微球菌具有一定的抑制作用。本实验成功构建了AjLys的酿酒酵母表达载体,并可在MKP-0细胞中表达了具有活性的AjLys蛋白,为AjLys的生产提供了一种具有可行性的新方法。
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- 关键词：仿刺参溶菌酶酿酒酵母密码子优化
