杜淼
- 作品数：35 被引量：265H指数：10
- 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 家兔供体细胞的发育周期与重构胚发育的关系被引量：4
- 2004年
- 采用血清饥饿法处理体外培养的兔子胎儿成纤维细胞,并将其作为供体细胞移入去核卵母细胞内构建重构胚胎。检查供体细胞的细胞周期对重构胚的融合率、分裂率和着床率的影响。实验结果表明:培养基中血清含量在0.5%的情况下,G0/G1期的细胞比例由正常培养条件下(培养液中含有10%FCS)的73.2%明显地增加到86%以上。饥饿1-3天的细胞作为供体细胞构建重构胚时,可明显提高重构胚的融合率,但是不同的饥饿时间其融合率并无显著的差异。饥饿处理可明显增加重构胚的分裂率,以饥饿处理3天为最佳。
- 郝茹王玉阁张正旺杜淼
- 关键词：家兔供体细胞胎儿成纤维细胞体细胞核移植
- 浅谈哺乳动物的无性繁殖被引量：1
- 1997年
- 浅谈哺乳动物的无性繁殖杜淼（中科院发育生物学研究所北京１０００８０）所谓的克隆是英文ｃｌｏｎｅ的音译而来的，实际的意思是无性繁殖。发育生物学领域中有关细胞发育的潜能性、细胞核和细胞质之间相互关系的问题，历来是很重要的研究对象，而细胞核移植的方法又是说...
- 杜淼
- 关键词：哺乳动物纲无性繁殖
- 三种丙型肝炎病毒转基因小鼠系的同时制备被引量：3
- 1998年
- 为研究丙型肝炎病毒的致病致瘤机理及结构基因与非结构基因３区（ＮＳ３）的功能及其在ＨＣＶ感染致病中的作用，建立一个ＨＣＶ分子治疗的动物模型，构建了含金属硫蛋白启动子和ＨＣＶ结构基因或ＮＳ３基因的质粒，将两者等量混合后用显微注射法接种于昆明白小鼠受精卵内制备转基因小鼠．通过ＰＣＲ筛选获得三种整合ＨＣＶ结构基因或／和ＮＳ３基因的首建鼠．结果表明：ａ注射后卵存活率与仔鼠出生率分别为８１％、３０％；ｂ检测６０只Ｇ０代小鼠，结构基因整合鼠６只（１０％），ＮＳ３基因整合鼠４只（６７％），双基因整合鼠９只（１５％），总整合率为３１７％；ｃＲＴＰＣＲ法检测阳性鼠肝中有靶基因ｍＲＮＡ的转录；ｄ４只首建鼠与正常鼠回交获得３８只Ｇ１小鼠，其中２０只为整合鼠，整合率为５２６％；ｅ转基因鼠表型迄今无明显异常．表明一次显微注射同时获得了三种整合ＨＣＶ结构基因或／和ＮＳ３基因的转基因小鼠．
- 谭文杰陈刚李光三李光三丛郁苗季杜淼詹美云
- 关键词：丙型肝炎病毒转基因小鼠结构基因
- 兔植入前移核胚中发育相关基因的差异表达分析被引量：12
- 2003年
- 与早期胚胎发育相关的一些重要基因异常表达致使克隆胚细胞核的再程序化过程受阻,是导致动物克隆失败的重要原因.为了分离鉴定再程序化相关基因,我们改进了mRNA差异显示技术,成功地建立了单胚差示技术体系.以不同发育时期的兔克隆胚(MⅡ卵、2细胞、4细胞、8～ 16细胞克隆胚胎)为材料进行单胚差示,分离了 80个差异片段.经反向RNA印迹验证、亚克隆、序列分析及NCBIGenBank数据库检索,结果表明:A0 2 8片段与CstF3基因有 93%的同源性,在早期胚胎发育过程中的表达有阶段特异性,该基因在兔克隆胚的早期发育过程中起重要作用.RNA印迹显示:该基因在所检测的组织中,只在卵巢中有表达.
- 李文雍齐冰王玉阁郁卫东杜淼陈清轩
- 关键词：差异表达分析发育相关基因再程序化
- 供体细胞核对山羊重构胚发育能力的影响被引量：1
- 1994年
- 选择不同品种的山羊交配所获的８细胞期至桑椹胚期的胚胎或重构胚发育至相同胚期的卵裂球，以ＬＲＨ注射后２６～２８ｈ回收的白山羊去核成熟卵作受体组建重构胚或再重构胚，经琼脂糖包埋，移入山羊输卵管内，培养５～６ｄ后观察发育状态。实验结果表明，杂种胚供核组建的重构胚和再重构胚发育能力明显优于纯种胚供核组建的重构胚和再重构胚，因此从细胞水平证明了杂种优势；母型ｍＲＮＡ对重构胚和再重构胚的发育起一定的调控作用。
- 穆宗尧成国祥王玉阁邹贤刚杜福良李光三徐少甫杜淼王杏龙成勇
- 关键词：山羊细胞核发育
- 超排山羊卵巢卵母细胞体外成熟的初步研究被引量：12
- 1993年
- 对超排山羊卵巢卵母细胞进行体外成熟培养的初步研究:试验一,分别用6、7、9、16号针头抽吸2～6mm卵泡,获有用卵母细胞百分率:分别为61.67％(37/60)、65.92％(178/270)、56.73％,(59/104)、31.43％(22/70);试验二,以TCM 199+10mol/L MHEPES+青霉素(6μg/m1)+链霉索(5μg/ml)为基础培养液(BM),再分别加入不同成分,配成5种卵母细胞成熟液:(A)BM+10％EGS(发情羊血清),(B)BM+10％EGS+HCG(2.5μg/ml,),(C)BM+10％EGS+HCG+E,(1μg/ml),(D)BM+10％FCS+HCG十E_2; (E)BM+10％EGS+HCG+E_2+颗粒细胞(1.5×10~6～3.0×10~6个/ml)。在38.5℃,5％CO_2培养26h,排卵后第1天卵巢母细胞体外成熟率分别为67.67％(20/30),60.42％(29/48),83.67％(41/49),67.79％(40/59),80.82％(59/73),排卵后第5天卵巢卵母细胞,在培液D中体外成熟率为71.43％(45/63)。研究表明,超排山羊卵巢卵母细胞经体外成熟可获得大量廉价的成熟母细胞。
- 徐少甫成国祥成勇王杏龙杜福良孙长美穆宗尧吴维芬王玉阁邹贤刚杜淼
- 关键词：山羊卵母细胞体外成熟
- 由成年转基因山羊体细胞而来的克隆山羊被引量：64
- 2002年
- 在已经获得的乳腺特异性表达人促红细胞生成素 (rhEPO)成年转基因山羊 (Caprahircus)的基础上 ,取其耳尖成纤维细胞和卵巢颗粒细胞 ,进行体外传代培养 ,然后将这种培养的转基因山羊的体细胞移入去核的处于第Ⅱ次减数分裂中期的卵母细胞中 ,并进行电融合 ,构建重构胚胎 ,重构胚胎在体内培养 6d ,再将发育至囊胚或桑椹胚的重构胚胎移入同步情期的寄母羊子宫内。结果 ,有 2只寄母羊妊娠并最终产下 2只成活的克隆山羊。她们分别来自同一成年母羊的耳尖成纤维细胞和卵巢颗粒细胞。克隆羊经PCR RFLP图谱分析显示 :以克隆羊组织DNA为模板的PCR产物与相应的提供体细胞的基因羊的PCR产物的酶切图谱完全一致 ;并且经PCR对外源hEPO基因检测表明 2只克隆山羊均携带hEPO外源基因。
- 成勇王玉阁罗金平沈玉杨跃飞鞠辉明邹贤刚徐少甫劳为德杜淼
- 关键词：体细胞克隆山羊
- 成年核移植山羊生长相关基因的表达分析(英文)被引量：1
- 2007年
- 体细胞核移植过程有可能影响克隆动物生长相关基因尤其是印迹基因的表达水平。本研究运用同源引物 PCR 扩增、RACE 技术并结合同源克隆策略, 克隆了 7 个山羊生长相关基因包括 3 个印迹基因(H19、IGF2 和 IGF2R)和 4 个非印迹基因(IGF1、IGF1R、GHR 和 GHSR)的完全 CDS 或者部分 cDNA 序列, 经生物信息学技术确认后, 用荧光实时定量 PCR 对 8只成年克隆山羊中这些基因的表达水平进行分析, 结果表明 3 个印迹基因中 IGF2R 基因表达水平极显著高于对照组的自然繁殖山羊(P<0.01), 而 H19 和 IGF2 的表达则没有很大区别; 4 个非印迹基因中只有 IGF1R 的表达水平极显著高于对照组(P<0.01), IGF1、GHR 和 GHSR 的表达与对照组相似。表明即使在表型正常的成年克隆动物也存在一定的表观遗传异常。通过对获得完全 CDS 和 3′UTR 的 IGF2 基因经过生物信息学分析表明, 山羊 IGF2 基因包含一个 540 bp 的开放阅读框 (ORF)编码 179 个氨基酸。IGF2 基因 cDNA 序列和氨基酸序列以及其它基因部分序列比较分析表明, 山羊所有这些基因与绵羊的同源性要高于同牛的同源性。
- 邢宝松徐银学成勇刘红林杜淼
- 关键词：山羊核移植基因表达荧光实时定量PCR印迹基因
- 山羊胚胎克隆的研究被引量：14
- 1995年
- 应用细胞核移植技术，把未分化或处于不同发育阶段的胚胎分裂球或细胞移入成熟的去核卵母细胞，并使之融合，成为Ｇ＿０代克隆卵。将Ｇ＿０代克隆卵移入同期发情的山羊输卵管中培养５ｄ，回收得到克隆胚，选择其中正常发育至８～１６细胞的克隆胚，将其胚胎细胞再移入成熟的去核卵母细胞，并进行电融合，构成Ｇ＿１代再克隆卵。１２９枚Ｇ＿０代克隆卵和１４３枚Ｇ＿１代再克隆卵移入同期发情的山羊输卵管，获得Ｇ＿０代克隆羊２只和Ｇ＿１代再克隆羊４只。介绍了产生克隆动物的各个技术环节以及这些环节与克隆动物出生率的关系。
- 成勇孙长美邹贤刚杜淼徐少甫
- 关键词：山羊胚胎移植无性繁殖系
- FSH对不同生理状态下山羊超数排卵的效果被引量：1
- 1996年
- ＦＳＨ对不同生理状态下山羊超数排卵的效果王杏龙，穆宗尧，徐少甫，邹贤刚，肖英达，杜淼（扬州大学农学院江苏扬州２２５００９）（中国科学院发育生物学研究所）前言近几年来，胚胎移植的试验研究在很多国家愈益蓬勃开展，取得了很多成就。只有能够得到足量的胚胎，才...
- 王杏龙穆宗尧徐少甫邹贤刚肖英达杜淼
- 关键词：山羊繁殖超数排卵FSH
