杨冬霞
- 作品数：31 被引量：92H指数：5
- 供职机构：广东省农业科学院动物卫生研究所更多>>
- 发文基金：广东省农业攻关项目广东省农业科技重大专项资助项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5对豚鼠树突状细胞成熟及功能影响被引量：3
- 2011年
- 为研究副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)外膜蛋白P5对豚鼠骨髓来源的树突状细胞(Dendriticcell,DC)刺激淋巴细胞增殖功能及细胞因子分泌的影响,以GM-CSF、IL-4联合诱导骨髓细胞生成未成熟DC,加入不同剂量副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5,观察DC形态,检测混合淋巴细胞反应,ELISA法测IL-6、IL-12p70、TNF-α分泌情况。结果显示:经副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5刺激后,可获得具有典型树突状突起形态的DC;经5μg.mL-1P5刺激的DC较对照IL-6、TNF-α分泌量极显著增加(P<0.01),IL-12的分泌量有所增加(P>0.05);50μg.mL-1P5刺激的DC较对照IL-6分泌量极显著增加(P<0.01),IL-12p70和TNF-α分泌量均极显著下降(P<0.01)。诱导后的DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力极显著增强(P<0.01)。本研究证明P5能影响骨髓细胞来源的DC的分化、成熟及功能的发挥,且不同剂量的P5对DC的成熟程度影响有差异。
- 佘志成范红结李春玲王贵平贾爱卿杨冬霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌树突状细胞细胞因子
- 副猪嗜血杆菌hhdB-A基因的鉴定和分析
- 2010年
- 为了明确副猪嗜血杆菌致病菌株的毒力相关因子,从广东省不同地区发病猪场送检病猪中分离到9株细菌(H1～H9),并对其hhdB-A基因进行了鉴定和分析。结果显示,所分离的9株细菌经形态观察、生化特性鉴定和PCR鉴定为副猪嗜血杆菌阳性,并具有卫星现象和不溶血特征。用hhdB-A基因引物从分离菌株中扩增到了特异性片段,序列分析表明,所获得的hhdA基因序列与GenBank中副猪嗜血杆菌SH0165,HPS59的hhdA基因同源性为98%～100%,分离菌株hhdA基因之间序列同源性为99.0%～99.9%;hhdB基因序列与SH0165的hhdB基因同源性为99%,分离菌株hhdB基因之间序列同源性为97.5%～99.8%;推导的氨基酸序列与少数放线杆菌、杜克雷嗜血杆菌的溶血素蛋白具有一定的相似性。RT-PCR扩增到了hhdB-A基因的目的条带,表明该基因在分离菌株中得到了相应的表达。
- 宋帅李春玲李淼杨冬霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌克隆
- 应用抑制性差减杂交筛选副猪嗜血杆菌4型菌株可能毒力基因被引量：2
- 2012年
- 为了寻找副猪嗜血杆菌可能毒力基因,采用抑制性差减杂交技术,以HPS有毒力菌株SW124(血清4型)和无毒力菌株H465(血清11型)为研究对象,构建差减杂交文库,利用Southern Blot分析和PCR鉴定进行差异基因片段的筛选。从构建的文库中共筛选得到7个特异性差异基因片段,经同源性分析,其中5个片段分别与噬菌体重组蛋白、糖基转移酶/荚膜多糖磷酸转移酶、磷酸核糖甲酰甘氨脒合酶、核糖体蛋白丙氨酸转移酶和ABC型硝酸盐/磺酸盐/碳酸氢盐转运系统周质蛋白等编码的基因有同源性;2个差异基因片段与功能未知蛋白或假定蛋白编码基因有关。利用PCR对上述可能与毒力相关的差异基因片段在9种不同血清型HPS中的分布进行了检测,结果表明,7个片段存在于多数的有毒力菌株(血清4,5,12,14,15型)中,而在无毒力菌株(血清3,11型)中均未检测到。利用SSH技术成功构建了HPS有毒力菌株SW124和无毒力菌株H465的差异表达基因差减文库,筛选获得了7个差异基因片段,且上述片段在HPS不同血清型有毒力菌株中分布广泛。
- 李淼李春玲宋帅杨冬霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌抑制性差减杂交毒力基因
- 广东地区猪链球菌宿主多样性调查被引量：1
- 2014年
- 通过调查广东地区不同宿主(猪肉类、鱼类、禽类、宠物等)体内猪链球菌带菌情况,以期评估猪链球菌的流行风险。分别从不同地区采集不同种类样本,分离培养猪链球菌,经PCR鉴定为阳性后,进一步进行生化试验及药敏试验分析。从采集的848份样本中共分离到31株猪链球菌,其中血清9型11株(占35.5%),血清2型、8型、18型、26型及31型各1株,且所分离的菌株均呈现多重耐药性。猪链球菌在多种不同宿主中均能检测到,特别是血清9型,提示可能带来的猪链球菌流行风险应予以重视。
- 李淼谢乐新杨冬霞宋帅岳磊李春玲
- 关键词：猪链球菌分子流行病学
- 副猪嗜血杆菌hhdA基因的克隆与分子特征
- 根据GenBank上发表的副猪嗜血杆菌hhdA的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物，从分离的副猪嗜血杆菌中扩增其目的基因，将扩增产物纯化与pMD18-T载体连接并转化DH5α菌株，用凝胶电泳、PCR和BamH Ⅰ、Hin...
- 宋帅李春玲李淼杨冬霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌分子特征
- 文献传递
- 噬菌体展示技术筛选副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的抗原表位被引量：1
- 2013年
- 为了研究副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白P5的抗原表位,应用噬菌体展示随机12肽库,以抗HPS外膜蛋白P5的单克隆抗体作为固相分子,进行了3轮筛选。对随机挑选出的10个分离间隔良好的噬菌斑进行ELISA和Western blot等检验,最终确定了4个各结果均为阳性的优势短肽。将4个短肽序列与GenBank中HPS外膜蛋白p5的序列进行比对分析,发现这些序列没有同源性或同源性较低,但竞争ELISA结果显示这些短肽与单抗的结合都能够被外膜蛋白P5有效的抑制。以上结果显示,通过噬菌体展示技术成功获得了4个HPS外膜蛋白P5的模拟表位,为后期开展以抗原表位为基础的诊断、表位疫苗等研究提供了依据。
- 许达李春玲李淼宋帅杨冬霞陈金顶
- 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白噬菌体展示模拟抗原表位
- 广东与四川地区发病猪副猪嗜血杆菌分离株omp5基因的克隆及序列分析
- 2011年
- 为了比较副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白P5(omp5)基因的同源性及抗原性,试验设计合成1对特异性引物,通过PCR方法从广东省和四川省发病猪的30株分离菌中扩增出HPS omp5基因,然后将PCR产物克隆至pMDTM18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,并进行序列测定与分析。结果表明:30株HPS omp5基因的完整序列有3种长度,分别为1 116 bp、1 104 bp、1 098 bp;与已发表的血清5型HPS SH0165的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列比较,广东分离菌株核苷酸同源性为90.5%～100%,氨基酸同源性为88.8%～100%;而四川分离菌株的核苷酸序列同源性为90.8%～94.1%,氨基酸同源性为89.9%c93.0%;进化树分析显示,HPS omp5基因无论是在不同血清型之间还是不同地区之间都具有较高的同源性,说明OMP5蛋白比较保守,有望作为型间共用性抗原。
- 陈善真李春玲王贵平曾振灵贾爱卿杨冬霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌克隆
- 副猪嗜血杆菌hhdA基因的克隆与分子特征
- 根据GenBank上发表的副猪嗜血杆菌hhdA的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,从分离的副猪嗜血杆菌中扩增其目的基因,将扩增产物纯化与pMD18-T载体连接并转化DH5α菌株,用凝胶电泳、PCR和BamHⅠ、Hind...
- 宋帅李春玲李淼杨冬霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌分子特征
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌和猪链球菌双重PCR方法的建立与应用被引量：5
- 2009年
- 针对副猪嗜血杆菌和猪链球菌16S rRNA序列各设计1对特异性引物,分别能扩增出822 bp和294 bp的DNA片段,并据此建立了快速准确鉴别副猪嗜血杆菌和猪链球菌的双重PCR方法,临床试验证明该方法具有很好的特异性、敏感性,能对临床病料进行鉴别诊断。对161份临床样本检测结果显示,副猪嗜血杆菌的检出率为23.75%,猪链球菌的检出率为43.48%,二者混合感染率为9.94%。
- 贾爱卿李春玲王贵平杨冬霞何丽丽王金生
- 关键词：猪链球菌副猪嗜血杆菌PCR
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的B细胞抗原表位鉴定被引量：4
- 2014年
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5能诱导机体产生免疫保护反应，同时可以用于特异性的血清学诊断，本试验选取P5蛋白进行抗原表位鉴定。首先通过PCR扩增P5F1（1～204aa），P5F2（170～296aa）及P5F3（280～371aa）3个片段，PCR产物分别定向克隆到表达载体pET32a（＋）中表达纯化。根据ELISA和Western blotting结果确定P5F3片段（280—371aa）是OmpP5的免疫优势决定区。为了进-步对该免疫优势决定区进行抗原表住鉴定，设计了-套11个部分重叠的短肽，这些短肽覆盖全部280～371aa片段。每-个短肽合成1对寡核苷酸链，退火后插入表达载体pGEX-6p-1，与GST进行融合表达。用HPS阳性血清进行ELISA和Western blotting扫描，鉴定出其表位位于”。TGNTCDAVKGRKALIT351。通过序列分析证实该抗原表位在不同的HPS菌株中高度保守。本试验确定了位于HPSOmpP5上的-个抗原表位，为建立-种方便、快捷、适用于现地大规模样品检测的鉴别诊断方法奠定了基础，同时也为HPS新型亚单位疫苗的研制，以及研究病原茵感染和机体免疫过程中P5蛋白与宿主体内相应分子之间的相互作用提供了有用信息。
- 李淼李春玲岳磊宋帅杨冬霞
- 关键词：副猪嗜血杆菌抗原表位
