杨慧翠
- 作品数：17 被引量：25H指数：3
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省卫生厅科研基金江苏省医学重点人才培养基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- Ad-ING4对人前列腺癌细胞PC-3体内外抑癌效应的研究被引量：14
- 2009年
- 背景与目的:腺病毒作为载体已被广泛用于肿瘤的基因治疗。ING4是生长抑制因子家族中的一个成员,是一种潜在的抑癌基因。本研究旨在探讨腺病毒介导的人ING4基因(Ad-ING4)对人前列腺癌细胞PC-3的体内外抑癌效应及其分子机制。方法:将扩增的Ad-ING4重组腺病毒感染PC-3细胞,用RT-PCR法检测ING4在PC-3细胞中的转录;MTT法检测ING4基因对PC-3细胞增殖的影响;流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡的变化;半定量RT-PCR法检测ING4基因的表达对PC-3细胞中的bcl-2、bax、p53和caspase-3凋亡相关基因表达的影响。用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠PC-3移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,15d后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重;用免疫组化法检测瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和CD34蛋白的表达。结果:腺病毒介导的人ING4基因在PC-3细胞中成功转录,明显抑制PC-3细胞增殖,上调p53、bax、caspase-3基因表达和下调bcl-2基因表达,并诱导细胞凋亡。Ad-ING4重组腺病毒能显著抑制裸鼠PC-3移植瘤的生长,瘤重的抑制率达37%,与空病毒载体Ad-GFP组和细胞对照PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示Ad-ING4重组腺病毒能明显上调Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,下调Bcl-2和CD34蛋白的表达水平。结论:腺病毒介导的ING4基因在体内外均可明显抑制人前列腺癌细胞PC-3的生长,诱导其凋亡,其机制可能是上调P53、Bax、Caspase-3蛋白和下调Bcl-2蛋白表达水平。
- 杨慧翠盛伟华谢宇锋缪竞诚魏文祥杨吉成
- 关键词：ING4基因PC-3细胞前列腺癌肿瘤抑制
- RMP基因沉默对肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响被引量：4
- 2010年
- 目的:建立RMP(RPB5-mediating protein)基因沉默的稳定细胞株,研究RMP小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的抑制作用。方法:首先,体外合成3条RMP基因的siRNA,并转染到SMMC-7721细胞中,RT-PCR检测3条siRNA对RMP基因表达的抑制作用,筛选出最佳干扰序列;然后,pGPU6-Neo-RMP-484真核表达载体转染,G418筛选出稳定干扰RMP基因的细胞株,RT-PCR法检测该稳定细胞株中RMP基因的干扰效率,MTT法检测RMP-siRNA对SMMC-7721细胞增殖及细胞黏附能力的影响,划痕实验检测细胞迁移能力的变化。结果:利用RNA干扰技术成功建立了RMP基因下调的稳定细胞株,与SMMC-7721细胞对照组比较,其RMP mRNA表达水平下调了(83.67±2.56)%。稳定转染siRNA的细胞株细胞增殖受到抑制,增殖抑制率可达(74.33±0.58)%。稳定转染细胞株的细胞黏附能力有所增加,迁移率则相应降低。结论:成功筛选出了稳定转染RMP-siRNA重组载体的细胞株。pGPU6-Neo-RMP-484重组载体能有效抑制RMP基因在肝癌SMMC-7721细胞内的表达,可作为RMP分子机制研究的细胞模型。RMP基因的下调能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,使其黏附率增加,同时细胞的迁移率降低。
- 连晓宁杨慧翠曹锴李敏盛伟华王晓婷郭云兰魏文祥
- 关键词：RNA干扰细胞增殖细胞运动
- 针对RMP基因的siRNA及其应用
- 本发明公开了针对RMP基因的siRNA及其应用，所述siRNA的正义链序列为：5′-GGA UUU GCU AGC UGA UAA ATT-3’，反义链为：5’-UUU AUC AGCUAG CAA AUC CTT-3′...
- 魏文祥沈百荣蒋敬庭杨慧翠李敏
- 文献传递
- RMP在肝癌细胞基因组稳定性和凋亡中的作用
- 研究RPB5调节蛋白(RMP)在正常肝细胞及肝癌细胞基因组稳定性中的作用,并探讨其与细胞凋亡的相关性。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从mRNA水平检测正常细胞系及多种肿瘤细胞系中RMP的表达。不同剂量60Coy...
- 李敏杨慧翠杨吉成盛伟华连晓宁曹锴魏文祥
- 关键词：肝癌细胞RNA干扰放疗基因组稳定性
- RMP基因干扰对肝癌细胞周期的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:建立RMP(RPB5-Mediating Protein)基因干扰的稳定细胞株,研究RMP基因干扰对正常肝细胞及其肝癌细胞周期的影响。方法:构建RMP基因的短发卡RNA(short-hairpin RNA,shRNA)真核表达载体pGPU6-Neo-RMPi-484。通过脂质体转染的方法转染到SMMC-7721肝癌细胞中,G418筛选出干扰RMP基因的细胞株;RT-PCR检测RMP基因的表达;流式细胞仪PI染色检测细胞周期;RT-PCR检测周期相关基因的表达。结果:成功构建pGPU6-Neo-RMPi真核表达载体,筛选出稳定干扰细胞株,并且发现干扰RMP基因能够明显引起SMMC-7721肝癌细胞的G2/M期阻滞。结论:干扰RMP基因引起SMMC-7721肝癌细胞G2/M期阻滞,可能是通过下调G2/M期检验点相关基因CyclinB、P21和CDK1的表达实现的。
- 郭云兰杨慧翠连晓宁曹锴王晓婷仲蕾魏文祥
- 关键词：肝癌细胞细胞周期
- Ad-ING4对人膀胱癌移植瘤的生长抑制作用
- 2015年
- 目的:探讨Ad-ING4人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其分子机制。方法:1Ad空载体腺病毒(Ad-GFP)、Ad-ING4单基因腺病毒(Ad-ING4)分别经QBI-293A细胞感染多轮扩增后获得高效价重组病毒;2将浓度为4×107个/ml的T24膀胱癌细胞悬液在裸鼠右前肢腋下皮下注射,建立T24人膀胱癌裸鼠移植瘤模型;3将15只荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组(PBS组)、Ad-GFP组、Ad-ING4组,3组均使用瘤体内注射干预用药,隔日1次,共6次。观测瘤体生长情况,测量肿瘤长径和短径,用公式:肿瘤体积=ab2/2(a为长径,b为短径),计算肿瘤体积,治疗3周后将裸鼠脱颈处死,摘瘤称重,用10%甲醛溶液固定标本,石蜡包埋,进行HE染色和免疫组织化学检测,并按Weidner的方法检测微血管密度(MVD)。结果:治疗后Ad-ING4组肿瘤重量为(0.93±0.06)g,分别与PBS组(1.73±0.05)g及Ad-GFP组(1.69±0.06)g相比,差异有统计学意义(P<0.05)。AdING4的抑瘤率达45%。Ad-ING4组肿瘤组织中细胞凋亡相关因子Bax和caspase-3的表达明显上调,Bcl-2的表达明显下调,肿瘤血管形成相关因子CD34表达下调,MVD降低(P<0.05)。结论:1Ad-ING4可以显著抑制膀胱癌移植瘤生长。2Ad-ING4的抑瘤机制可能和激活细胞凋亡及抑制血管形成有关。
- 龙建华杨慧翠杨吉成张治国侯健全欧阳骏
- 关键词：ING4移植瘤
- 腺病毒介导的IL-24表达对PC-3人前列腺癌细胞体内外抑癌效应被引量：2
- 2010年
- 目的:研究腺病毒介导的IL-24基因表达对前列腺癌细胞体内外的抑癌效应及分子机制。方法:将扩增的Ad-IL-24感染PC-3细胞,用RT-PCR和Western blot法检测IL-24基因在PC-3细胞中的表达;MTT法检测IL-24基因表达对PC-3细胞的生长影响;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡变化;RT-PCR法检测IL-24基因的表达对PC-3细胞中的Bcl-2、Bax、p53和Caspase3凋亡相关基因表达的影响。用Ad-IL-24在裸鼠PC-3移植瘤的瘤体内注射治疗,通过免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、CD34等与细胞凋亡和血管形成相关因子的表达。结果:IL-24基因在PC-3细胞中成功表达,对PC-3细胞增殖有明显抑制作用,可上凋p53、Bax、Caspase-3基因和下凋Bcl-2基因表达,进而诱导细胞凋亡。Ad-IL-24能显著抑制裸鼠前列腺癌移植瘤生长,瘤重的抑制率可达54%;免疫组化结果显示Ad-IL-24不仅能明显上调Bax和Caspase-3基因和下调Bcl-2基因表达,而且能引起与血管形成标记基因CD34表达水平下降。结论:腺病毒介导的IL-24基因表达在体内外可明显抑制PC-3细胞的生长,诱导其凋亡。其机制可能与上凋P53、Bax、Caspase-3基因和下凋Bcl-2和CD34基因表达水平有关。
- 张治国杨吉成杨慧翠盛伟华谢宇锋龙建华丁翔欧阳骏
- 关键词：IL-24基因前列腺癌肿瘤抑制
- RMPs iRNA对SMMC-7721肝癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响
- 目的建立RMP(RPB5-Mediating Protein)基因沉默的稳定细胞系,并研究小干扰RNA(siRNA)对SMMC-7721人肝癌细胞RPB5调节蛋白(RMP)表达的抑制作用及抑制癌细胞增殖和侵袭迁移的作用。...
- 杨慧翠连晓宁曹锴李敏盛伟华王晓婷郭云兰魏文祥
- 腺病毒介导的ING4基因对人膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制被引量：7
- 2010年
- 目的 探讨腺病毒介导的人生长抑制因子4（ING4）基因对人膀胱移行细胞癌T24细胞体外抑癌效应及其分子机制.方法 将含ING4的重组腺病毒（Ad-ING4）转染T24细胞,以空载体组、未转染组细胞作对照.应用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹法检测各组ING4基因及蛋白质在T24细胞中的表达 四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组T24细胞生长情况 流式细胞术（FCM）和Hochest 33258染色法检测各组T24细胞凋亡变化 半定量RT-PCR法检测各组细胞中凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病基因-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x（Bax）、p53、缺氧诱导因子（HIF）1α和半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的表达 Western印迹法检测各组细胞中caspase-3蛋白的表达.结果 腺病毒介导的ING4基因在T24细胞中成功表达,能明显诱导T24细胞凋亡,其凋亡率可达17.2%±4.1%,高于空载体组（4.7%±1.2%）和未转染组（4.8%±1.2%,P〈0.05） 外源性ING4基因可引起T24细胞中p53、Bax基因表达上凋（1.40±0.11比0.27±0.04,1.50±0.12比0.60±0.05）和Bcl-2、HIF-1α基因表达下凋（0.19±0.02比1.20±0.08,0.33±0.03比0.98±0.06,均P〈0.05）,并促进caspase-3活化.结论 腺病毒介导的ING4基因在体外可通过上凋p53、Bax/Bcl-2基因和下凋HIF-1α基因表达,导致caspase-3的活化而抑制人膀胱移行细胞癌T24细胞的生长,并诱导其凋亡.
- 张治国欧阳骏韩从辉杨吉成杨慧翠龙建华丁翔
- 关键词：膀胱肿瘤细胞凋亡
- 针对RMP基因的siRNA及其应用
- 本发明公开了针对RMP基因的siRNA及其应用，所述siRNA的正义链序列为：5’－GGA UUU GCU AGC UGA UAA ATT－3’，反义链为：5’－UUU AUC AGCUAG CAA AUC CTT－3’...
- 魏文祥沈百荣蒋敬庭杨慧翠李敏
- 文献传递
