杨永涛
- 作品数：13 被引量：20H指数：3
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 金黄色葡萄球菌L型感染大鼠肺炎模型的建立
- 目的:用金黄色葡萄球菌ATCC25923的稳定L型感染SD大鼠,观察L型细菌感染动物后其肺脏的病理改变,建立L型细菌感染大鼠肺炎模型。方法:SD大鼠150g 30只,雌雄并用,分3组进行实验。A组:无菌L型高渗培养基对照...
- 王冬梅饶贤才杨永涛陈志瑾熊坤胡珍杨杰原薇薇
- 文献传递
- sCR1-SCR15-18蛋白减轻补体介导的大鼠脑缺血/再灌注损伤被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨补体在大鼠大脑缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤中的作用及重组人可溶性补体受体Ⅰ型SCR15-18蛋白(sCR1-SCR15-18)的保护作用。方法:75只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、I/R组和sCR1-SCR15-18保护组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型(middle cerebral artery occlusion MCAO),缺血2h,再灌注24h后,进行神经功能学评分,测定脑梗死体积、大脑皮质髓过氧化物酶(myeloperoxi-dase,MPO)活性,观察大脑皮质区补体C3b沉积和病理改变。结果:缺血/再灌注24h后,sCR1-SCR15-18保护组神经功能学评分,脑梗死体积及脑皮质MPO活性明显低于I/R组(P<0.05);sCR1-SCR15-18保护组缺血脑组织补体C3b沉积明显减少,病理损伤减轻。结论:补体在脑I/R损伤中起一定作用,sCR1-SCR15-18蛋白对大鼠I/R损伤脑具有保护作用。
- 何莉杨永涛郭光金刘高科汪正清
- 关键词：补体脑缺血再灌注损伤炎症
- 人补体受体1型活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定
- 补体系统是先天和获得性免疫的重要组成部分,但过量的补体活化片段也是炎症反应的始动因子。体内补体级联的活化受到一系列膜蛋白和血浆蛋白的抑制调节,补体异常过度活化则可以引起缺血再灌注损伤、超敏反应、移植反应和肾小球肾炎等多种...
- 刘高科何莉杨永涛汪正清
- 文献传递
- 双功能域小分子CR1衍生物的构建、表达、纯化及生物功能鉴定
- 补体是存在于人和脊椎动物血清与组织液中的一组具有酶活性的蛋白质,在机体抗感染第一线防御中起重要作用。补体系统的异常过度活化是缺血再灌注损伤、异种器官移植急性排斥反应等许多炎症性疾病的发生和发展的重要始动因素之一。血清补体...
- 杨永涛何莉刘高科谭兵汪正清
- Numb分子在肠粘膜屏障形成中的作用及其机制研究
- 背景&目的
肠黏膜屏障包括：机械屏障、免疫屏障、化学屏障和生物屏障。肠粘膜粘液屏障是上皮细胞表面覆盖的由粘蛋白形成的水化的凝胶样粘液，而肠黏膜上皮屏障是肠上皮本身及其紧密连接构成的在体内外环境之间形成一种组织学屏障...
- 杨永涛
- 关键词：肠粘膜屏障NOTCH信号通路微丝骨架
- 重组双功能域补体受体Ⅰ型分子在Vero细胞中的稳定表达及其抑制补体活化的初步研究
- 补体系统的异常活化参与了如缺血再灌注损伤、异种器官移植超急性排斥反应等疾病的发生与发展。抑制补体的异常活化是治疗这些疾病的一个新的可能途径。补体受体1(CR1)是补体调节剂家族中的对多种途径的C3和C5转化酶同时具有加速...
- 杨永涛汪正清
- 文献传递
- 双功能域小分子补体受体1型衍生物的构建、表达、纯化及生物功能鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的克隆表达出能够抑制补体活化的双功能域小分子补体受体1型（complement receptor type 1，CR1）衍生物。方法从外周血提取总RNA，进行RT—PCR扩增出功能性片段I（CR1-SCR1—3）；以本室构建的pET-32a—CR1-SCR15—18为模板扩增功能性片段Ⅱ（CRl-SCR15—17）；利用重叠延伸PCR（SOE—PCR）法扩增出包含双功能域的融合基因。将融合基因重组于pET-32a（＋）载体，转化大肠杆菌Rosetta，经酶切及DNA序列测定鉴定后，IPTG诱导表达，SDS—PAGE和Western blot对表达蛋白质进行分析鉴定。蛋白质经Ni柱亲和层析及透析复性后，采用50％补体溶血抑制试验（CH50）进行功能鉴定。结果酶切及DNA序列测定证实成功构建出了pET-32a—CR1-SCR（1-3＋15-17）重组表达载体，IPTG诱导表达后在相对分子质量（Mr）为63×10^3处有一明显的条带，经Western blot鉴定为目的蛋白，Ni柱亲和层析获得纯度约为92％的目的蛋白，功能试验证实，在0～200μg／ml的融合蛋白剂量范围内，随着浓度的增加，补体抑制活性增强。结论成功构建并在大肠杆菌内表达了具有较高生物活性的重组双功能域小分子CR1衍生物，为体内保护实验研究提供实验数据。
- 杨永涛何莉刘高科谭兵汪正清
- 关键词：补体受体1型重叠延伸PCR原核表达蛋白纯化生物学活性分析
- 重组工程菌pET32a-CR1-SCR15-18/BL21(DE3)高密度发酵工艺研究被引量：2
- 2011年
- 目的建立重组工程菌pET32a-CR1-SCR15-18/BL21(DE3)的高密度发酵工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,扩大至发酵罐发酵,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如发酵培养基、培养温度、pH值、活化时间、诱导时间及分批补加营养物质等条件进行优化。结果采用改良M9-CA培养基、37℃活化4 h后以0.2 mmol/L IPTG诱导表达4 h,以甘油为碳源,在生长期和诱导期分别以40 ml/h和70 ml/h的速率连续流加补料,全程滴加氨水保持培养基pH值保持在7.5,调节转速控制溶解氧在40%左右。最终菌体产量提高至40 g/L以上,CR1-SCR15-18蛋白表达率达28%以上。结论高密度发酵工艺显著提高了工程菌的产量和CR1-SCR15-18蛋白的表达水平。
- 何莉鲜尽红刘高科杨永涛汪正清
- 关键词：高密度发酵大肠杆菌
- 人补体受体1型活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的实现人补体受体1型(complement receptor type 1,CR1)活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的分泌表达。方法用PCR从原核表达质粒pET32a-sCR1-SCR15-18上扩增CR1-SCR15-18的编码基因,并克隆到毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9,构建重组质粒pPIC9-CR1-SCR15-18,鉴定后测序;重组质粒电转化整合到毕赤酵母GS115基因组中,菌落PCR技术筛选阳性转化株;经摇瓶发酵和甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白的表达;Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化目的蛋白,并用体外抑制补体溶血反应实验测定目的蛋白的生物活性。结果成功构建重组表达质粒pPIC9-CR1-SCR15-18;SDS-PAGE和Western blot证实目的基因在毕赤酵母中成功分泌表达;表达产物经镍柱快速纯化后,能够明显抑制补体的体外溶血。结论在毕赤酵母中成功实现了CR1-SCR15-18蛋白的分泌表达,该蛋白具有较高的抑制补体溶血的生物活性。
- 刘高科何莉杨永涛汪正清
- 关键词：补体受体1型毕赤酵母分泌表达
- 重组双功能域补体受体Ⅰ型分子在Vero细胞中的稳定表达及其抑制补体活化的初步研究
- 2010年
- 构建包含人重组双功能域人补体受体Ⅰ与绿色荧光蛋白(GFP)的重组质粒,观察融合蛋白在非洲绿猴肾细胞(Vero)内表达并检测其抑制补体活化的能力。PCR方法扩增出重组双功能域CR1分子,限制性内切酶XhoⅠ和SalⅠ将重组分子连入真核表达载体pEGFP-N2中,构建出重组质粒pEGFP-N2/CR1-2D,脂质体转染Vero细胞中。新霉素G418筛选出稳定表达细胞克隆,荧光显微镜下观察绿色荧光融合蛋白在细胞内的表达。用Vero细胞和免疫小鼠获得的抗Vero细胞多克隆抗体激活补体后,通过检测乳酸脱氢酶的释放来分析重组蛋白抑制补体活化的功能。结果显示pEGFP-N2/CR1-2D质粒经酶切及测序分析证实载体构建正确。转染细胞后,荧光显微镜下观察到重组质粒pEGFP-N2/CR1-2D在Vero细胞中能够大量表达,G418筛选出了稳定表达细胞克隆,乳酸脱氢酶活性检测显示,与对照组相比CR1-2D能够显著的抑制补体的活化(P<0.05),初步证实了其能够抑制补体的活化。
- 杨永涛田衍平何莉汪正清
- 关键词：克隆真核表达补体活化乳酸脱氢酶
