- 新基因Restin的克隆及比较生物学分析被引量：12
- 2002年
- 采用PCR介导的减法杂交技术,从全反式维甲酸诱导的HL-60细胞中克隆得到一新基因,该基因编码219个氨基酸.借助生物信息学分析技术,发现该基因表达蛋白与神经细胞生长抑制因子（Necdin）的功能结构域高度同源（49％）,均为碱性蛋白,命名为Restin（细胞静息相关蛋白）.更有意义的是,同源搜索发现Restin,Necdin和Mages（黑色素瘤相关抗原家族）为同一蛋白家族,提示Restin和Mages是两类具有某种联系而功能又不同的蛋白质.对所有这些蛋白进行综合分析发现,它们分别属于两个不同的亚家族,碱性蛋白家族和酸性蛋白家族,其中Restin,Necdin和Mage D1含有碱性同源结构域（理论pI为8.6～10.1）,主要在终末分化细胞中表达,在肿瘤组织极少表达或不表达,实验结果表明,Necdin可以与转录因子（E2F1）及p53相互作用,从而抑制细胞增殖,推测此类蛋白可能与细胞静息状态相关;而 Mage A,C等表现为酸性同源结构域（理论pI为4.2～4.9）,主要在肿瘤组织和胎儿组织中表达,推测此类蛋白可能与细胞增值有关.这两类蛋白是否构成一对与细胞周期调控相关的正负系统值得进一步深入研究.
- 赵忠良路凡朱峰杨辉柴玉波陈苏民
- 关键词：基因克隆生物信息学
- 人血管生成素cDNA的克隆与表达被引量：7
- 2000年
- 血管生成素 ( angiogenin,ANG)广泛存在于多种肿瘤组织中 ,在肿瘤发生的不同阶段刺激新生血管的形成 .利用 RT- PCR方法从培养的人肺癌细胞系 A549扩增得到了 ANG c DNA片段 ,测序正确后克隆入融合表达载体 p RSETB中 ,构建了原核表达菌株 .经 IPTG诱导 ,表达了 N端融合His6的 ANG融合蛋白 ,表达量占菌体总蛋白的 1 0 % ,纯化后的血管生成素体外能够有效地刺激鸡胚绒毛尿囊膜的血管形成 .
- 杨辉张英起颜真韩苇药立波苏成芝
- 关键词：RT-PCR基因克隆基因表达
- 234例颌面颅脑复合伤的观察和护理体会
- 2001年
- 总结颌面并发颅脑伤的救治环节和护理要点
- 赵丽羊玉荣李光宇洪霞杨辉
- 关键词：颌面颅脑复合伤护理
- 人存活素基因编码区的克隆和序列分析被引量：1
- 2005年
- 目的 :克隆人存活素 (survivin)基因编码区cDNA并进行序列分析。 方法 :以人骨肉瘤细胞系MG6 3的mR NA为模板 ,采用RT PCR方法得到人存活素的编码区cDNA ,克隆至载体pUC19中 ,酶切鉴定后进行序列分析。结果 :获得人存活素编码区基因和重组质粒pUC19 SURVIVIN ,DNA序列分析证实所获得的存活素基因编码区cDNA序列和文献报道一致。 结论 :采用基因克隆的方法获得人存活素基因 ,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。
- 陈翔马保安杨彤涛张勇杨辉范清宇
- 关键词：存活素基因克隆
- 大肠杆菌表达人新型肿瘤坏死因子的纯化被引量：15
- 1997年
- 目的：制备符合临床要求的高纯度新型人肿瘤坏死因子（ｎｈＴＮＦ），建立简单、高效的纯化途径．方法：用本室构建的ｎｈＴＮＦ基因工程菌，经发酵、收菌、裂菌、硫酸铵盐析，Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ及Ｓ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ层析，得到高活性、高纯度的ｎｈＴＮＦ单一色谱峰，比活性达１×１０９Ｕ／ｍｇ蛋白．结果：ｎｈＴＮＦ纯度达９８％以上，活性回收率为７９％．结论：纯化方法简单，且达到较好效果，为ｎｈＴＮＦ的大规模制备和临床应用打下基础．
- 杨辉张英起李芳梅王俊楼赵宁朱宝娥颜真苏成芝
- 关键词：肿瘤坏死因子液相色谱蛋白质纯化
- 人可溶型破骨细胞分化因子的克隆原核表达及活性分析被引量：1
- 2007年
- 目的克隆人可溶型破骨细胞分化因子（sODF）基因，构建融合表达载体，在大肠杆菌中表达，并制备抗体。方法采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法得到人可溶型破骨细胞分化因子（ODF）编码区cDNA，克隆入原核表达载体pGEX-4T-3，转化大肠杆菌感受态细胞JM109，0．1mmol／L β—D一半乳糖苷（IPTG）诱导后收集菌体蛋白，行十二烷基硫酸钠-多丙烯酰胺冻胶电泳（SDS—PAGE）。纯化蛋白，体外诱导破骨细胞分化。结果获得人sODF基因cDNA，构建原核表达载体pGEX—ODF，转化菌株可表达人GST—ODF蛋白，蛋白相对分子质量约为43000，Western分析证实为GST—sODF融合蛋白。纯化后的表达产物体外培养人外周血淋巴细胞有破骨细胞形成，象牙片上有骨吸收陷窝形成。结论成功获得人sODF基因cDNA，并在大肠杆菌中表达了人GST-ODF融合蛋白。成功表达的人sODF蛋白有诱导破骨细胞分化的活性。为该蛋白的进一步应用研究提供了依据。
- 杨彤涛周勇马保安杨辉范清宇刘继中陈苏民
- 关键词：破骨细胞分化因子活性分析可溶型克隆人基因CDNA反转录聚合酶链反应
- 重症口底蜂窝组织炎的救治与护理被引量：4
- 2005年
- 赵丽李光宇羊玉荣杨辉
- 关键词：口底蜂窝组织炎重症救治护理坏死性农村
- 碱性MAGE家族新成员restin在大肠杆菌中的表达和抗体制备被引量：4
- 2005年
- 目的:从维甲酸诱导的白血病细胞系HL60中,克隆编码219个氨基酸的新基因restin,构建原核表达载体、制备抗血清并进行初步应用。方法:采用PCR技术,以维甲酸诱导的白血病细胞的cDNA为模板,扩增出restin的编码区。将其克隆入大肠杆菌表达载体中。经过温度诱导获得restin表达蛋白。利用SDS-PAGE纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备该蛋白的抗血清。以该抗体做间接免疫荧光,初步观察restin在COS-7细胞内的表达分布。结果:大肠杆菌中表达的restin蛋白的Mr为26000。将其初步纯化后免疫新西兰白兔制备的抗血清,用Westernblot检测其效价为1∶800。间接免疫荧光显示,restin蛋白主要分布在细胞核内。结论:成功地制备抗restin的抗体,为进一步研究restin蛋白在组织中的表达、细胞内亚定位以及信号转导通路提供了前提条件。
- 路凡杨辉王孝功蒲勤李毅赵文明赵忠良
- 关键词：抗血清间接免疫荧光
- 人破骨细胞分化因子基因的克隆及在COS-7细胞中的表达
- 2003年
- 目的 克隆人破骨细胞分化因子 (ODF)基因并在真核细胞中表达。方法 以人骨肉瘤细胞系MG6 3的总RNA为模板 ,采用反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法得到ODF的编码区cDNA ,构建真核表达载体pcDNA 3 1(+) ODF ,在脂质体介导下转染非洲绿猴肾细胞系 (COS) 7,经G4 18压力筛选建立稳定转染人ODF的细胞系 ,Western印迹检测其在COS 7细胞中的表达。结果 获得的人ODFcDNA序列与文献报道的核苷酸序列一致 ,Western印迹证实稳定转染人ODF的COS 7细胞系中有ODF的表达。结论 构建了人破骨细胞分化因子 (ODF)的真核表达载体 ,并在COS 7细胞中获得稳定表达。
- 杨彤涛杨辉范清宇刘继中马保安张勇纪宗玲陈苏民
- 关键词：基因克隆基因表达骨保护素类风湿关节炎
- 咽旁颞下区肿瘤的围术期护理
- 2005年
- 对53例咽旁颞下区肿瘤手术患者的围术期护理进行了总结,探讨了术前完善的准备工作和术后全身及局部护理的要点,指出因咽旁颞下区手术经常涉及多个解剖部位,在此类手术围术期护理中,需要综合各方面的护理知识,才能提高围术期的护理水平。
- 赵丽羊玉荣李光宇杨辉
- 关键词：咽旁颞下区肿瘤围术期护理
