林剑伟
- 作品数：18 被引量：141H指数：6
- 供职机构：福建农林大学作物科学学院农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金引进国际先进农业科技计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 斑茅cDNA中抗病基因同源序列的分离和表达特性分析(英文)被引量：3
- 2009年
- 植物抗病基因具有一些特定的保守结构域。本研究根据已知植物同源抗病基因(RGAs)保守序列设计简并引物,从甘蔗近缘植物斑茅的cDNA中扩增出6条抗病基因同源序列,它们在NCBI上登录号分别为EU685835、EU685836、EU685837、EU685838、EU685839和EU685840。序列分析表明,这些RGAs均含有典型的NBS-LRR类抗病基因保守结构域P-loop、kinase-2a、kinase-3a和疏水结构域(hydrophobicdomain,HD)。氨基酸序列的同源性比对表明,6条RGAs序列同11条参试的抗病基因之间的同源性为8.3%～93.0%,而6条RGAs之间的氨基酸序列同源为30.5%～45.6%。另外,本实验所克隆的6条斑茅抗病基因同源序列中,kinase-2(LLVLDDVW/D)最后一个氨基酸皆为色氨酸,推测所克隆的NBS-LRR类抗病基因都属于non-TIR-NBS-LRR类。定量PCR分析表明,6条斑茅抗病基因同源序列在根、茎和叶片中组成型表达,同时这些抗病基因同源序列的表达会受外源信号分子水杨酸和过氧化氢的上调作用,可能在斑茅的抗病性中具有一定的作用。
- 阙友雄许莉萍林剑伟徐景升张木清陈如凯
- 关键词：斑茅抗病基因同源序列定量PCR
- 甘蔗品种黑穗病抗性评价体系的建立(英文)被引量：33
- 2006年
- 为了建立甘蔗品种黑穗病抗性评价体系,选用9个引进品种,设计一个包括6个对照品种在内的田间试验。首次采用混合小种进行人工浸渍接种,通过整个新植蔗生长季病害进展曲线下的面积、茎感染率和株感染率3个病情指数,以及病害流行学参数潜伏侵染期和持续发病期的分析,对其抗病性进行评价。在分析以上参数相关程度的基础上,引进了系统聚类分析法进行进一步评价。结果显示:9个引进甘蔗品种中,ROC26属于感病品种,其余属于抗病或高抗品种;3个病情指数和持续发病期的两两相关均为显著正相关,潜伏侵染期与这些参数的相关为负相关,但未达到显著水平;在类间距离大于1.0的条件下,可将15个品种聚为6类,进一步明确了各品种抗黑穗病性的相似程度;抗性鉴定标准对照种NCo310、F134、NCo376和Ya71-374的应用,明确了接种源为小种1和小种2,通过一次接种试验,明确了供试品种对2个小种的抗性水平,标准对照种的抗性表现,还说明了本生长季发病条件基本是适宜的。本文建立的甘蔗品种抗黑穗病评价体系是切实可行的。
- 阙友雄许莉萍林剑伟陈天生陈如凯李依龙
- 关键词：甘蔗黑穗病抗性评价相关系数
- 甘蔗杂交后代黑穗病抗性评价与抗感池构建被引量：4
- 2009年
- 为研究甘蔗杂交后代黑穗病抗性的遗传变异,构建抗病、感病近等基因池,配置了2个杂交组合,其中组合1为CP84-1198×科5,组合2为ROC20×桂糖73-167,对2个组合部分后代进行2次新植人工接种黑穗病抗性鉴定,调查并分析了5个病害参数的关系。相关分析结果显示,病害有关参数中,发病持续期(SSD)与最大累计丛感染率(IPmax)、最大累计茎感染率(ISmax)、病情消长曲线下的面积(∑AUDPC)存在极显著的正相关,IPmax与最短潜伏期(LP)在不同作物季间重演性高。应用2个病害流行学参数SSD和LP以及3个病情指数IPmax、ISmax和∑AUDPC作为聚类指标,采用欧氏距离及最长距离法,对2个组合的杂交后代部分个体的抗性进行聚类分析,构建了2对遗传背景不同的抗、感黑穗病近等基因池,为后续研究奠定了基础。
- 阙友雄林剑伟黄文华林玮许莉萍
- 关键词：甘蔗杂交后代黑穗病抗性
- 甘蔗杂交后代抗黑穗病性评价与抗感池构建
- 甘蔗黑穗病是世界和我国大陆最重要的真菌性病害,病株无蔗茎,产量损失严重,抗病育种是唯一有用的策略.为研究甘蔗杂交后代抗黑穗病性的遗传变异,构建抗病、感病近等基因池,配置了2个杂交组合,其中组合1为CP84-1198x科5...
- 阙友雄林剑伟黄文华林玮许莉萍
- 关键词：甘蔗杂交后代黑穗病抗性聚类分析
- 文献传递
- 重组甘蔗花叶病毒E株系外壳蛋白的纯化及其多克隆抗体制备被引量：4
- 2009年
- 目的:制备可用于甘蔗花叶病毒(ScMV)E株系(ScMV-E)检测用多克隆抗体。方法:将ScMV-E外壳蛋白(CP)基因连接到pET29a(+)上,经PCR检测、酶切及测序鉴定获得重组质粒pET29a-CP,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达重组ScMV-E外壳蛋白;采用His Trap Kit纯化目的蛋白,作为抗原免疫新西兰大白兔,制备特异性抗体;通过间接ELISA、Western blot和组织印迹法检测所制备抗体的特异性。结果:SDS-PAGE分析表明,重组融合蛋白含6个组氨酸标记,相对分子质量约43000;Western blot检测显示所获得的抗体特异性良好,间接ELISA法测得血清的效价为1:81 920;甘蔗叶片的组织印迹检测结果显示杂交效果良好。结论:制备的多克隆抗体可直接用于ScMV-E检测,并有望用于制备ScMV-E检测试剂盒。
- 阙友雄江克清许莉萍郭莺林剑伟陈如凯
- 关键词：甘蔗花叶病毒外壳蛋白原核表达多克隆抗体
- 利用斑茅cDNA芯片研究甘蔗受黑穗病菌侵染后基因差异表达被引量：7
- 2009年
- 为了解甘蔗抗黑穗病的分子机制,利用斑茅干旱胁迫cDNA芯片检测了甘蔗受黑穗病菌胁迫后的基因差异表达。经杂交,在cDNA芯片的3860个模板中,有效差异表达(Ratio值≥2.0或≤0.5)的基因为101个,其中上调55个,下调46个。部分基因的定量PCR验证表明,芯片杂交结果可靠。上调表达基因经测序、冗余序列剔除,一共获得36个uniqueESTs。已知功能的22个上调表达基因,涉及多条生理代谢途径,如光合作用、离子转运和核酸代谢途径;以及多种分子水平的进程,如基因转录、蛋白质合成与修饰以及细胞信号转导等。另外,还检测到14个未知功能基因。结果表明,甘蔗对黑穗病的抗性具有复杂的机制。本研究为解释甘蔗受黑穗病菌胁迫后的基因差异表达及其网络构建奠定了基础,还为今后系统研究甘蔗对生物与非生物胁迫的响应机制提供技术支持。
- 阙友雄许莉萍林剑伟徐景升张积森张木清陈如凯
- 关键词：甘蔗黑穗病菌斑茅CDNA芯片差异表达基因
- 核糖体DNA的内转录间隔区序列标记在真菌分类鉴定中的应用被引量：45
- 2007年
- 传统的真菌分类主要根据真菌菌株的形态特征、生长特性与生理生化指标进行,而分子生物学技术的发展提升了真菌分类鉴定研究的手段。真菌核糖体DNA内转录间隔区(ITS)在进化上比编码区快,种内的不同菌株之间高度保守,但在种间变化极大,故可为真菌学的研究提供丰富的遗传信息。简要综述了ITS序列分析技术在真菌分类鉴定中的应用现状、相关问题及前景。
- 林剑伟阙友雄陈天生许莉萍张木清
- 关键词：核糖体DNA内转录间隔区真菌
- 甘蔗与黑穗病菌互作的叶片差异蛋白分析
- 本研究以高抗和高感黑穗病的甘蔗品种NCo376和Ya71-374为供试材料,在接种甘蔗黑穗病菌后分离叶片全蛋白,采用双向电泳技术,分析甘蔗黑穗病菌侵染后甘蔗叶片蛋白质表达谱的变化.研究结果表明,病菌侵染后,品种间、同一品...
- 阙友雄林剑伟徐景升阮秒鸿许莉萍张木清陈由强陈如凯
- 关键词：甘蔗种植甘蔗黑穗病菌双向电泳串联质谱
- 文献传递
- RS基因的植物表达载体和酵母表达载体构建被引量：1
- 2008年
- 白藜芦醇合酶(RS)是Res生物合成的关键酶之一,它催化1分子4-香豆酰辅酶A和3分子丙二酰辅酶A反应合成Res。以花生中克隆的RS基因为基础,成功构建了RS基因的以Ubi为启动子的单子叶植物表达载体pBIL-RS,为以后的基因工程遗传转化果蔗和其他单子叶植物改良其品质提供条件。同时构建了酵母表达载体pVT102U-RS,为下一步研究真核表达蛋白的生物活性提供条件,并为利用酵母生产Res提供了可能。
- 方珊茹阙友雄林剑伟陈如凯
- 关键词：白藜芦醇合酶酵母基因工程
- 一个可区分甘蔗品种抗感黑穗病性的SCAR标记
- 为建立甘蔗品种抗感黑穗病性分子检测技术，采用集群分离分析法与RAPD相结合，对杂交亲本ROC20、桂11和部分杂交后代以及标准对照种进行PCR扩增，筛选到一条可区分甘蔗品种抗感黑穗病性的多态性片段。采用pMD18-T克隆...
- 阙友雄陈天生林剑伟许莉萍张木清陈如凯
- 关键词：生物化学分子生物学黑穗病分子检测
- 文献传递
