梁中锟
- 作品数：17 被引量：26H指数：3
- 供职机构：南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源膀胱癌特异性抗体基因库被引量：2
- 2013年
- 目的构建大容量且能高效展示于哺乳动物细胞表面的全长人源膀胱癌特异性抗体基因库。方法分离膀胱癌患者的外周血单核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,用RT-PCR方法扩增全套IgG1重链可变区(VH)和Kappa型轻链全长(LCκ)基因,经过相应的限制性内切酶酶切后分别插入pDGB-HC-TM载体,分别构建膀胱癌特异性的抗体重链基因库和轻链基因库(一级抗体库)。随机挑取20个单克隆测定抗体基因序列,并瞬时转染FCHO细胞,结合流式细胞仪检测细胞表面抗体的表达。将上述构建好的轻重链基因库通过4片段连接方法插入双表达载体pDGB4,构建二级抗体库,转染FCHO后用流式细胞仪检测细胞表面抗体表达。结果分别成功构建了膀胱癌特异性的重链基因库和轻链基因库,随机挑取的轻重链单克隆各有7个和9个含有正确的抗体基因编码序列,且能展示于哺乳动物细胞表面,理论库容量达到3.32×10^(11)[(1.7×10~6×70%)×(3.1×10~5×90%)]。成功构建了膀胱癌二级抗体库,库容量为9×10~5。结论利用哺乳动物细胞表面展示技术,我们成功构建了膀胱癌特异性的全长人源抗体基因库,一级抗体库的库容量达到3.32×10^(11),二级抗体库库容量达到9×10~5,为下一步筛选特异性、高亲和力抗膀胱癌抗体奠定了基础。
- 蓝开健张哲欢梁中锟王俊洁娄海波周元平刘叔文李长征谭万龙周辰
- 关键词：膀胱癌流式细胞仪检测
- CD-TK双自杀基因联合染料木黄酮治疗前列腺癌的实验研究
- 2011年
- 目的:研究CD-TK双自杀基因联合染料木黄酮对鼠前列腺癌的体内治疗作用。方法:取鼠前列腺癌细胞RM-1接种于鼠C57BL/6背部皮下建立移植瘤模型。将荷瘤鼠随机分为对照组、术黄酮组、TK/DC治疗组及TK/CD+染料术黄酮联合治疗组进行相应处理,实验结束后比较各组肿瘤体积、全部肿瘤标本行常规病理检验及bcl-2免疫组化检测。结果:对照组肿瘤体积为(1008.73±126.73)mm^3.染料木黄酮组肿瘤体积为0359.06±53.17)mm^3,双自杀基因组肿瘤体积为(222.60±26.79)mm^3.两者联合时肿瘤体积为(25.31±9.24)mm^3。双自杀基因组鼠肿瘤体积比染料木黄酮组小(P<0.01).两者联合时肿瘤体积最小(P=0.00。病理切片中显示对照组几乎未见细胞坏死.而联合用药组肿瘤大片坏死;免疫组化检测肿瘤标本中bcl-2含量显示对照组显强阳性.而联合治疗组仅见微弱阳性。结论:联用染料木黄酮能明显增强CD-TK双自杀基因系统对前列腺癌的治疗作用。
- 杜跃军朱文辉梁中锟姜耀东郑少斌谭万龙
- 关键词：前列腺癌自杀基因基因疗法染料木黄酮
- 新方法简便高效建立小鼠原位膀胱癌模型被引量：10
- 2009年
- 目的用物理化学的方法建立小鼠原位表浅膀胱癌模型,并对影响成瘤率的因素进行探讨,筛选出高效简便建立小鼠原位表浅膀胱癌模型的方法。方法用改造过的静脉留置针经小鼠尿道插入膀胱腔内,实验组用酸碱腐蚀的方法对小鼠膀胱粘膜进行预处理,按观察目的的不同分为4组;对照组不作预处理。PBS冲洗后将MB49灌注入膀胱,构建小鼠原位表浅膀胱癌模型。所有小鼠观察一般情况和肿瘤生长情况。按计划处死小鼠并解剖观察膀胱肿瘤生长情况及有无转移,取标本做病理切片。结果病理显示膀胱粘膜已预处理的小鼠接种肿瘤细胞后可在膀胱部位成瘤(成瘤率100%);丝裂霉素能显著减缓膀胱肿瘤的生长(P=0.000,P<0.05);对照组接种肿瘤细胞后未见成瘤。结论膀胱粘膜处理的时间以酸20s,碱5s较合适;简便的物理化学方法成功建立了可靠性、稳定性和重复性均好的小鼠原位表浅膀胱癌模型,为表浅膀胱癌术后复发的防治研究尤其是抗癌药物的筛选和免疫治疗研究提供了理想的动物实验模型。
- 梁中锟张琳胡志明陈忠黄鑫石向华谭万龙高基民
- 关键词：膀胱肿瘤C57BL/6小鼠丝裂霉素
- IL-21膜表面修饰MB49细胞疫苗治疗小鼠转移性膀胱癌的实验研究
- 2012年
- 目的制备白细胞介素21(IL-21)膜表面修饰的小鼠膀胱癌MB49细胞疫苗,评价其在小鼠膀胱癌皮下转移模型中诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL s)的效应和治疗作用。方法将SA-IL-21锚定在经30%酒精灭活后的MB49细胞膜表面而制成IL-21膜表面修饰疫苗。建立C57BL/6小鼠皮下MB49膀胱癌模型,将荷瘤小鼠随机分为5组:IL-21膜表面修饰疫苗组、单纯游离IL-21组、GFP膜表面修饰疫苗组、单独灭活MB49肿瘤疫苗组、PBS组。利用上述制备的疫苗进行治疗,通过检测各组小鼠肿瘤体积变化及CTL来评价疫苗的抗肿瘤功能。结果成功制备了IL-21膜表面修饰MB49疫苗。IL-21/MB49疫苗可显著抑制肿瘤生长并产生长期特异性免疫反应(P<0.05)。在同一效靶比下IL-21/MB49疫苗组的CTL杀伤活性显著高于其他组(P<0.05)。结论采用蛋白膜锚定技术可将IL-21高效锚定于MB49细胞膜表面制备成IL-21膜表面修饰膀胱癌肿瘤疫苗,该疫苗既可保持IL-21生物学活性又可明显增强CTL杀伤BCa肿瘤活性。
- 彭俊铭石小军陈定南梁中锟蓝开健高基民谭万龙
- 关键词：转移性膀胱癌肿瘤疫苗免疫治疗白介素21
- 小鼠正位膀胱癌模型的建立
- 目的用物理化学的方法对雌性C57BL/6小鼠膀胱粘膜表面进行处理,简便高效地建立小鼠正位表浅膀胱癌模型,并观察其生物学特性及其对丝裂霉素治疗的反应,为表浅膀胱癌的防治研究提供一种理想的动物实验模型。方法将雌性C57BL/...
- 谭万龙梁中锟杜跃军石向华郑少斌
- 文献传递
- 腺病毒介导TK/GCV基因系统联合肿瘤坏死因子对膀胱癌细胞的体外杀伤作用被引量：3
- 2008年
- 目的研究腺病毒介导TK/GCV系统联合肿瘤坏死因子(TNF-α)对膀胱癌细胞的体外杀伤作用。方法采用含有TK基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因的复制缺陷腺病毒(adv+)转染MB49细胞,观测转染率,RT-PCR检测转染细胞TK基因产物。以MB49细胞为对照,测定不同浓度TNF-α作用下MB49细胞、不同浓度GCV作用下MB49/TK细胞的存活率,采用GCV联合低浓度TNF-α对MB49/TK细胞进行体外杀伤研究;流式细胞仪检测TK/GCV、TNF-α、TNF-α+TK/GCV对MB49细胞作用8h后细胞凋亡情况。结果随着浓度的增高GCV对MB49/TK细胞、TNF-α对MB49细胞的生长抑制率逐渐增高。GCV联合TNF-α对细胞杀伤率均较同浓度下单纯GCV及单纯TNF-α作用时的细胞杀伤率有明显增强,且随TNF-α浓度增高联合治疗组杀伤效率增强:单纯50μg/mlGCV组、5μg/mlTNF-α+50μg/mlGCV组、20μg/mlTNF-α+50μg/mlGCV组杀伤率分别(24.39±1.10)%、(40.05±0.97)%、(65.47±0.67)%。流式细胞仪检测细胞周期示TK/GCV、TNF-α、TK/GCV+TNF-α组作用细胞8h均可见典型sub-G1期细胞凋亡峰,联合作用组凋亡率最高。结论TNF-α能明显增强TK/GCV自杀基因系统对膀胱癌的杀伤作用,两者联合能够有效促进膀胱癌细胞的凋亡。
- 石向华谭万龙朱文辉梁中锟杜跃军
- 关键词：TK基因
- 链亲和素标记的GM-CSF治疗膀胱癌疗效的初步观察被引量：1
- 2010年
- 目的:将链亲和素标记的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(SA-GM CSF)原位锚定成瘤小鼠膀胱,探求该新疗法的可行性和有效性。方法:选择雌性C57BL/6小鼠50只,随机均分成5组,组1到组4建立原位表浅膀胱癌模型后,按照处理的不同又分为PBS组、GM CSF组、SA-GFP组和SA-GM-CSF组,分别给予相应治疗;6次治疗后,SA-GM-CSF组和组5(对照组)接受第二次肿瘤细胞攻击;观察所有小鼠的一般情况、肿瘤情况和生存期,并对死亡小鼠进行解剖,留取器官组织做病理切片或免疫组织化学染色。结果:SA-GM CSF组与其它各组比较,肿瘤出现的时间晚,肿瘤生长速度慢,小鼠生存期长(P_(max)=0.023,P<0.05);MB49细胞二次攻击后,SAGM-CSF组与对照组相比,生存期差异有显著统计学意义(x^2=9.551.P=0.002)。结论:SA GM-CSF原位锚定于雌性C57BL/6成瘤小鼠膀胱黏膜,有效抑制了膀胱肿瘤的生长,延长了小鼠的生存时间,并且能抵抗同源肿瘤的再次攻击,提示可能诱导了小鼠针对MB49的免疫保护作用;SA-GM-CSF原位锚定治疗比单纯细胞因子灌注法疗效更好。
- 梁中锟张琳谭万龙高基民陈忠黄鑫
- 关键词：膀胱肿瘤生物素链亲和素粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子
- 胸苷激酶／更昔洛韦系统联合肿瘤坏死因子-α治疗鼠膀胱癌被引量：1
- 2012年
- 目的观察腺病毒介导胸苷激酗更昔洛韦（TK／GCV）系统联合肿瘤坏死因子-a（TNF-a）对鼠膀胱癌的杀伤作用。方法构建MB49小鼠皮下模型，随机分为对照组、TK／GCV组、TNF-a组、联合治疗组。按治疗计划分组进行病毒及药物注射，实验结束测量肿瘤体积大小，进行组织病理学检查。结果体外实验验证低浓度TNF-a联合GCV较单纯GCV对细胞的杀伤率明显增强，差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞仪检测，联合治疗组较单独用药组凋亡率明显提高，差异有统计学意义（P〈0．01）。动物实验结柬后肿瘤体积对比：TK／GCV组为（93．43±2．10）mm3、TNF-a组为（53．95±2．61）mm3、对照组为（171．52±4．33）mm3、联合治疗组为（18．23±1．11）mm3，联合治疗组肿瘤体积较其他各组明显缩小，差异有统计学意义（P〈0．01）。苏木素-伊红（HE）染色见各治疗组均出现细胞坏死凋亡，其中联合治疗组仅于周边见少量肿瘤细胞存活。结论GCV对转染腺病毒MB49细胞及TNF-a对MB49细胞均有良好的抑制生长作用，且呈浓度依赖性；TK／GCV、TNF-a均能有效诱导凋亡，且两者具有协同作用；TK／GCV系统联合小剂量TNF—a能增强自杀基因系统对小鼠膀胱癌的治疗作用。
- 石向华谭万龙李民杜跃军梁中锟
- 关键词：肿瘤坏死因子-A膀胱癌脱噬作用
- CD—TK双自杀基因系统联合染料木黄酮对鼠前列腺癌的治疗作用
- 2009年
- CD-TK双自杀基因包含单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV—TK）和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）基因，能将丙氧鸟苷（GCV）及5-氟胞嘧啶（5-Fe）等无毒的前体药物转化成毒性药物，抑制RNA及DNA合成，从而导致肿瘤细胞的凋亡，研究表明二者协同可以显著增强对肿瘤细胞的杀伤作用。
- 朱文辉杜跃军梁中锟姜耀东郑少斌谭万龙
- 关键词：自杀基因系统CD-TK染料木黄酮前列腺癌单纯疱疹病毒胸苷激酶
- 链亲和素标记的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子治疗表浅性膀胱癌的实验研究
- 链亲和素标记的粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（SA-GM-CSF）原位锚定治疗表浅膀胱癌的方法目前尚无相关报道。本研究将链亲和素标记的细胞因子锚定于细胞表面，探求该方法的可行性与有效性，为链亲和素标记的双功能蛋白分子治疗表...
- 梁中锟
- 关键词：生物素化膀胱肿瘤链亲和素粒细胞巨噬细胞膀胱癌
- 文献传递
