武嘉男
- 作品数：25 被引量：67H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家高技术研究发展计划转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 4种禽病毒抗体可视化蛋白芯片的制备及应用被引量：8
- 2009年
- 【目的】研制可同时鉴别检测AI、ND、IB、IBD等4种禽病血清抗体的可视化蛋白芯片。【方法】用超速离心法和蔗糖密度梯度法分别纯化了4种病毒蛋白抗原,调整到合适浓度后点于醛基修饰的片基上,制备蛋白芯片;分别用4种禽病阳性血清杂交,再与金标二抗杂交,银染显色后读取结果,建立4种禽病的可视化蛋白芯片工作平台;进一步对此芯片的特异性以及灰度值与抗体浓度的相关性进行了研究;最后对18个现地血清样品进行了初步应用检测。【结果】结果显示经过条件优化后,芯片检测探针可特异性的相应的抗体进行杂交,呈现较强的杂交信号,且无交叉杂交。信号灰度值在抗体浓度为50～300μg·ml-1范围内成线性关系。用芯片和其它传统抗体检测方法同时检测18份现地样品,结果发现可视化蛋白芯片具有很好的特异性,并且灵敏性明显高于传统检测手段。【结论】研究表明该方法可用于同步鉴别4种禽病抗体,是一种有效的抗体检测新方法。
- 石霖王秀荣杨忠苹陶启蒙蔡冬冬武嘉男王馥梅田国彬陈化兰
- 关键词：可视化蛋白芯片禽病
- 高致病性PRRSV HuN4株Nsp4的原核表达及其抗体水平检测被引量：2
- 2011年
- 为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp4的免疫学特性,本研究根据PRRSV HuN4株序列,设计并合成用于扩增PRRSV HuN4株Nsp4基因的引物。将扩增产物与原核表达载体pGEX-6P-1连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。Western blot试验显示,Nsp4在大肠杆菌中获得较高水平的表达,并且具有良好的反应活性。利用该蛋白建立ELISA方法,检测PRRSV HuN4株感染仔猪的不同时间内的血清,并比较抗Nsp4,囊膜蛋白和M蛋白,N蛋白的抗体水平,结果表明Nsp4抗体升高的时间晚于囊膜蛋白和M蛋白、N蛋白出现的时间,同时抗体水平也低于其他蛋白。
- 董建国刘永刚石文达武嘉男王刚刘鹤徐明明荣福龙李丽琴田志军蔡雪辉
- 关键词：NSP4原核表达抗原性
- 禽流感、新城疫可目视化诊断蛋白芯片的制备及初步应用被引量：14
- 2009年
- 本研究制备了可以同时鉴别诊断禽流感(AI)、新城疫(ND)2种禽病血清抗体的可视化蛋白芯片。以超速离心法和蔗糖密度梯度法分别纯化了2种病毒蛋白抗原,用点样缓冲液稀释后点于醛基修饰的片基上,制备蛋白芯片;将芯片与待检血清杂交后,再与胶体金标记的二抗杂交,银染显色后根据灰度值判定结果,从而建立了2种禽病的可视化蛋白芯片鉴别诊断方法。采用该方法对18份现地血清样品进行初步检测,结果显示该芯片可特异性的与相应的抗体杂交,无交叉反应,而且呈现较强的杂交信号,其信号灰度值在阳性血清浓度为50μg/mL～300μg/mL范围内成线性关系(Y=0.426X+4.225)。用该芯片方法和琼扩(AGP)抗体检测方法对18份现地样品进行符合率检测,结果表明该可视化蛋白芯片具有很好的特异性,并且检测灵敏度为是AGP方法的400倍以上。研究表明该方法可用于同步鉴别2种禽病,是一种有效的抗体检测新方法。
- 石霖王秀荣杨忠苹陶启蒙王煜武嘉男蔡冬冬包红梅陈化兰
- 关键词：禽流感新城疫可视化蛋白芯片
- 单链标记与芯片结合鉴别AIV主要亚型的研究
- 结合单链标记和基因芯片两种技术,构建可同时区分AIV的H5、H7、H9血凝素亚型及N1、N2神经氨酸酶亚型的基因芯片。分别T\A克隆部分禽流感病毒的M基因,H5、H7、H9亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因,并构建重组...
- 陶启蒙王秀荣武嘉男石霖李雁冰包红梅陈化兰
- 关键词：基因芯片
- 文献传递
- 检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用
- 采用杂交瘤细胞融合技术,获得了一株具有分泌抗猪圆环病毒2型(PCV2)中和活性的单克隆抗体,利用该株单抗建立了一种阻断ELISA方法。用于检测该病毒感染猪血清中和抗体.该方法先用病毒多克隆抗体包被ELISA板以捕获已知病...
- 黄立平刘长明危艳武陆月华郭龙军温士刚武嘉男吴洪丽
- 关键词：猪圆环病毒2型单克隆抗体阻断ELISA
- 文献传递
- 蛋白质组学主要实验技术的研究进展被引量：5
- 2009年
- 蔡冬冬王秀荣石霖武嘉男陶乐蒙王馥梅包红梅陈化兰
- 关键词：蛋白质组学人类基因组计划后基因组时代生命现象基因数量
- 猪源伪狂犬病病毒gB基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：7
- 2015年
- 为加强对猪源伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）的监测,在PRV gB基因的保守区设计特异性引物,并建立了检测猪源PRV的实时定量PCR。该方法可检测PRV的最低TCID50为2×10^1/mL,比伪狂犬病诊断技术国家标准中的PCR方法敏感100-1 000倍,且特异性、重复性好。利用该方法测定了PRV SC株在感染Vero细胞后的复制动态;结果显示,PRV在感染后第12小时进入复制高峰期,在感染后第24小时达到平台期。本方法具有快速、敏感和重复性好等特点,能够为研究病毒的复制动态或临床样品的检测提供技术支持。
- 高嘉聪叶超赵款常晓博郭金潮姜成刚王淑杰武嘉男蔡雪辉安同庆
- 关键词：伪狂犬病病毒GB基因
- 致病性马兽疫链球菌的分离鉴定、生物学特性及其M-like基因的序列分析被引量：11
- 2012年
- 为鉴定锦州某猪场引起关节炎病疫情的病原,本研究将患猪关节液在血平板培养基上培养进行细菌分离;对分离细菌进行形态学观察、生化反应、致病性试验及药物敏感性试验;并对其M-like基因进行克隆和测序分析。结果在显微镜下观察到周围具有透明的β溶血环的革兰氏阳性中长链球菌,经生化反应及M-like基因鉴定为马兽疫链球菌(命名为10JZ12);分离株10JZ12对小鼠的致死剂量为1.75×108cfu;并对苯唑西林、青霉素G、红霉素、克拉霉素、克林霉素、米诺环素、环丙沙星、左氟沙星、多粘菌素B、呋喃妥因敏感,对氯霉素、四环素、诺氟沙星、复方新诺明不敏感。
- 王淑杰姜成钢武嘉男刘永刚金家民刘鹤蔡雪辉张秀英
- 关键词：PCR
- 黑龙江省部分地区鸡传染性支气管炎剖检病变调查被引量：1
- 2009年
- 鸡传染性支气管炎（Avian Infectious Bronchitis,IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus,IBV）引起的一种急性、高度接触传染性呼吸道疾病。临床表现为咳嗽、打喷嚏、气管罗音、肾脏病变,蛋鸡产蛋数量和蛋的品质下降,雏鸡可因为感染后的呼吸道和肾脏的病变造成死亡。
- 迟国文解晓萍李大龙武嘉男张加勇孙刚
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒传染性呼吸道疾病变调剖检肾脏病变
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体Sn和CD163 TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立
- 2012年
- 为建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)允许细胞表面的Sn和CD163受体的方法,本研究设计针对Sn和CD163基因的特异性引物和荧光探针,建立了检测PRRSV Sn和CD163受体的荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法在检测101copies/μL～108copies/μL模板范围内具有良好的线性关系。标准曲线的相关系数r值均大于0.996,扩增效率分别为100%和107%;该检测方法对Sn和CD163的检测下限均为10拷贝,敏感性高;批内重复试验和批间重复试验的变异系数均小于5%,具有良好的重复性。利用该方法对PRRSV感染肺泡巨噬细胞(PAM)72 h后Sn和CD163受体mRNA的转录水平进行了检测,结果表明Sn和CD163受体的转录水平显著上调。本研究为PRRSV病毒感染后两种主要受体变化趋势的研究提供了有效的检测方法。
- 韩梓峰刘永刚石文达王刚何玉利王淑杰刘鹤董建国武嘉男蔡雪辉
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR
