段君兰
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 供职机构：南京医科大学口腔医学院口腔医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CdtB保守区的DnaseI酶活性金属结合位点突变体具有细胞周期阻滞功能
- 段君兰李璐徐艳杨迷芳
- 关键词：牙周炎伴放线放线杆菌HELA细胞
- 伴放线放线杆菌cdtB基因克隆及其表达蛋白的体外生物学活性检测被引量：4
- 2010年
- 目的 体外构建伴放线放线杆菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa）CdtB蛋白的原核表达载体并诱导其表达,通过变性、复性获得有Ⅰ型脱氧核糖核酸酶（deoxyribonuclease Ⅰ,DNase Ⅰ）样活性的重组CdtB蛋白,为进一步研究AaCdtB的功能以及Aa细胞致死性扩张毒素三聚体全毒素在牙周炎发生、发展过程中的分子致病机制奠定基础.方法 以AaATCC29522基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应（PCR）法获得cdtB基因,经双酶切、连接的定向克隆技术构建原核表达载体pET-15b-cdtB.转化大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导CdtB蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）及蛋白质印迹法检测并鉴定蛋白表达.纯化的重组CdtB体外与超螺旋质粒（pET-32a）DNA孵育,观察其生物学活性.结果 经测序鉴定,构建的原核表达载体pET-15b-cdtB转染的感受态大肠杆菌携带有cdtB基因,该基因片段与GenBank中已收录的AacdtB基因序列一致性高达99%.SDS-PAGE观察到32 000左右的高表达蛋白条带,蛋白质印迹法发现带有6个组氨酸蛋白标签标记的目的 蛋白CdtB.超螺旋质粒DNA与CdtB体外孵育后发生了解螺旋现象.结论 本项研究成功构建了AaCdtB的原核表达载体并诱导CdtB蛋白的体外表达,获得了具有DNaseⅠ样活性的重组CdtB蛋白.
- 李璐段君兰王晓茜杨迷芳徐艳
- 关键词：基因克隆
- cdt基因亚基cdtA的克隆及其原核表达载体的构建被引量：1
- 2009年
- 目的:进行伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)cdtA基因的克隆并构建其原核表达载体,为进一步研究CdtA蛋白功能以及CDT全毒素的功能做准备。方法:从AaATCC29522中通过PCR获得cdtA基因片段,克隆到中间载体pMD19-TVector中,再经双酶切得到cdtA片段克隆到原核表达载体pET-15b中,得到融合表达载体pET-15b-cdtA。结果:成功构建pET-15b-cdtA,经PCR鉴定以及测序鉴定插入cdtA基因序列正确,阅读框架完整,未发现突变。结论:成功克隆了cdtA基因,并在原核载体上得以表达。
- 李璐徐艳王晓茜杨迷芳段君兰
- 关键词：原核表达载体
- 伴放线放线杆菌细胞致死性扩张毒素研究进展被引量：1
- 2014年
- 细胞致死性扩张毒素(cytolethal distending toxin,CDT)是近年来新发现的一种伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)的毒力因子(Aa CDT),研究发现该毒力因子在Aa的牙周致病机制中发挥着重要的作用。本文就Aa CDT的结构和功能、作用机制及致病机制等方面的研究进展作一综述,以期进一步了解Aa的致病机理。
- 段君兰徐艳
- 关键词：伴放线放线杆菌
- 伴放线放线杆菌细胞致死性扩张毒素的细胞毒性研究
- 2011年
- 目的:体外诱导表达伴放线放线杆菌(Aqqregatibacter actinomycetemcomitans,Aa)细胞致死性扩张毒素(cytolethal distending toxin,CDT),观察其对中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO cell)和人宫颈癌上皮细胞(HeLa cell)的毒性作用。方法:诱导重组蛋白Aa CdtA、CdtB、CdtC的体外表达,采用镍亲和层析柱法纯化目的蛋白,体外重构Aa CDT全毒素。通过体外酶活性实验检测重组蛋白CdtB的生物学活性,并通过细胞克隆形成实验(Colony-forming experiment)及3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphe nyltetrazolium bromide,MTT]比色法进一步观察CDT对CHO细胞和HeLa细胞的毒性作用。结果:由重组蛋白Aa CdtA、CdtB、CdtC体外重构获得的Aa CDT全毒素不仅抑制CHO细胞增殖,导致CHO细胞克隆形成单位(Colony-Forming Unit,CFU)数目减少甚至消失。也可抑制He-La细胞增殖并引起包括细胞体积增大及细胞核增大增多的细胞形态学改变,并且此增殖抑制作用呈浓度依赖性。结论:体外成功构建了具有生物学活性的Aa CDT全毒素,且Aa CDT毒性发挥需要三个亚基CdtA、CdtB、CdtC同时存在并构成三聚体。
- 段君兰李璐徐艳杨迷芳
- 关键词：伴放线放线杆菌中国仓鼠卵巢细胞HELA细胞
