段海清
- 作品数：36 被引量：163H指数：8
- 供职机构：电子科技大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“十一五”国家科技攻关计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 蛇毒类凝血酶Calobin cDNA的设计合成与克隆被引量：11
- 2003年
- 人工合成了朝鲜蝮蛇(Agkistrodoncaliginosus)类凝血酶Calobin的编码序列。在设计引物时选择大肠杆菌和酵母菌的偏爱密码子,通过相互搭桥的方式,将全长为789bp的编码序列分成14个片段,每个片段长度为78个碱基左右,采用“核心模板法”并加以改进,通过4次PCR延伸反应,得到了全长基因。经扩增后回收目的片段,双酶切后连接到克隆载体,将得到的转化子酶切鉴定后,任意选择6个克隆进行双向测序,得到了全序列正确的3个克隆。本工作为类凝血酶在大肠杆菌和酵母系统中的高效表达奠定了基础,也为长度为700～900bp片段的合成提供了帮助。
- 袁盛凌段海清张兆山
- 关键词：蛇毒类凝血酶基因合成聚合酶链式反应
- 合成生物学被引量：14
- 2006年
- 合成生物学研究是个新兴而颇具前景的研究领域。该研究对多种天然的或人工设计的生物学元件进行了合理而系统的组合以获得重构的或非天然的“生物系统”。从解构到重构生命体、由破到立的认识方式转变,是对生物系统认识深入发展的必然结果。合成生物学研究就是连接这一过程的桥梁。本文对这一前沿领域的研究思路、近期主要研究成果及发展趋势做一概述。
- 凌焱段海清陈惠鹏
- 关键词：合成生物学系统生物学人工生命体
- 新型低基础表达Tet-on基因表达系统的构建与鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的:构建一种新型的具有更低基础表达的Tet-on调控系统,以用于毒性蛋白及+RNA病毒的真核细胞调控合成。方法:对目前常用的Tet-on系统中的四环素调控蛋白(rtTA、tTS)的表达途径进行改进,使得在非诱导条件下调控蛋白的基础诱导活性进一步降低。结果:相比原有的Tet-on系统,新构建的Tet-on系统非诱导状态下的基础表达值下降了一半以上。结论:成功构建基础表达值更低的Tet-on调控系统,为真核调控表达毒性蛋白或合成+RNA病毒打下了基础。
- 胡伟李玉霞凌焱毛赟赟宋兰高原段海清周围张京生陈惠鹏梁龙
- 关键词：TET-ON
- 用Red系统敲除大肠杆菌O157∶H7的ecs4553以及ecs4563基因被引量：6
- 2007年
- 目的:用Red系统快速敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7中的分子伴侣基因,构建EHEC O157∶H7的突变体。方法:本研究首先合成一对引物(每一条的5′端与ecs4553或者ecs4563基因同源,3′端与卡那霉素抗性基因同源),用pKD4为模板扩增出带有卡那霉素抗性基因的PCR产物,然后电击转化至大肠杆菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过卡那霉素抗性基因两侧的ecs4553或者ecs4563基因序列在体内与ecs4553或者ecs4563基因发生同源重组,置换掉基因组中的ecs4553或者ecs4563基因,最后利用卡那霉素抗性基因两端的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将卡那霉素抗性基因剔除。结果:获得了ecs4553或者ecs4563基因被精确敲除且不带卡那霉素抗性基因的EHEC O157∶H7突变菌株。结论:为进一步研究EHEC O157∶H7的致病机制奠定了基础。
- 刘徐兵周围李玉霞张京生凌焱胡伟张书祥张部昌段海清梁龙
- 关键词：大肠杆菌O157:H7RED同源重组
- 毒素源性大肠杆菌CFA/Ⅰ、CS3重组菌株粘附力、免疫原性和保护性研究
- 1995年
- 采用可逆性肠结扎成兔腹泻(RITARD)动物模型检测了毒素源性大肠杆菌(ETEC)定居因子抗原Ⅰ(CFA/I)和表面抗原3(CS3)重组菌各1株的肠道粘附力,免疫原性和保护性。经肠道及口服接种重组菌株对肠道均有较强的粘附力,与CFAs阴性宿主菌相比P<0.0025。口服免疫家兔时,第4周血清抗体滴度达到高峰,滴度分别为1:9000和1:80000;肠道免疫家兔后血清效价在第2周达到高峰,滴度分别为1:8000和1:60000。在抗体滴度高峰时进行ETEC野生株攻毒,结果显示口服组抗腹泻保护率为66.7％～75％,肠道组为50.1％～71.4％。攻毒后免疫家兔的排菌天数较对照组明显减少。
- 张蓓宁张兆山董自正汪江段海清黄翠芬
- 关键词：免疫原性腹泻
- 中国汉族人群遗传性聋基因座位STR位点的遗传多态性研究
- 2004年
- 目的 研究中国汉族人群 10个遗传性聋基因座位的短串连重复序列 (STR)的遗传多态性。方法 应用PCR方法对 10个位点进行扩增 ,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 ,记录基因型。采用PPAP软件计算正常人各STR位点等位片段频率、基因型频率、预期基因型频率、多态信息量 (PIC)和Hardy Weinberg平衡吻合性检验。结果 中国汉族人群D6S2 87、D8S1132、D13S12 75、D15S130、D1S2 72 6、D4S30 38、D2S2 380、D2 2S2 82、D14S10 4 2、D7S5 2 9各位点分别检出 10个、 9个、 8个、 7个、 7个、 7个、 6个、 6个、 6个及 5个等位片段 ,多态性分布均符合Hardy Weinberg平衡定律。各位点PIC值分别为 0 879、 0 85 4、 0 86 4、 0 82 1、 0 6 86、 0 794、 0 76 4、 0 732、 0 773、0 712 ;杂合度均高于 0 7。结论 中国汉族人群 10个位点STR均具有较高的杂合度和多态信息量 ,是较理想的遗传标记。
- 叶胜难曹菊阳段海清于黎明韩东一张兆山杨伟炎姜泗长
- 关键词：杂合度汉族基因座位STR位点
- 抑瘤素M的研究进展
- 1994年
- 抑瘤素M(Oncostatin M,OSM)是继白细胞介素6(IL-6)、白血病抑制因子(LIF)、肿瘤坏死因子(TNF)等细胞因子之后发现的又一重要生物反应调节剂。体外实验证明:OSM可以通过多种途径产生化瘤和抑瘤活性。同时根据它与其它细胞调节因子如LIF、G-CSF、CNTF及IL-6间相互区别而又相互联系的生物学特点,可以认为:OSM在机体免疫应答网络、细胞抗感染免疫及多种细胞因子间的功能协调等方面发挥着广泛而又重要的作用。
- 段海清
- 关键词：生物反应调节剂抑瘤活性抗感染免疫机体免疫应答白血病抑制因子
- 幽门螺杆菌vacA基因的克隆和序列分析被引量：1
- 2002年
- 空泡毒素是幽门螺杆菌产生的已知的唯一蛋白毒素,该毒素与感染者胃肠上皮损伤和溃疡形成密切相关,同时也是幽门螺杆菌免疫预防和免疫治疗的重要候选组分。从幽门螺杆菌NCTC11637染色体DNA中经PCR方法获得了2.9kb的该基因成熟肽全长序列,将该基因克隆至载体pET22b+,经PCR扩增和酶切鉴定后序列分析表明,该基因与已知序列完全一致。
- 刘纯杰张兆山陶好霞李淑琴李眅刘秀丽段海清黄翠芬
- 关键词：幽门螺杆菌克隆测序VACA基因
- 抑瘤素M研究新进展
- 1994年
- 仰瘤素Ｍ（ＯｎｃｏｓｔａｔｉｎＭ，ＯＳＭ）是继白细胞介素６（ＩＬ－６）、白血病抑制因子（ｌｅｕｋｅｍｉａｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ，ＬＩＦ）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）等抗瘤细胞因子之后发现的又一重要生物反应调节剂。体外实验证明：ＯＳＭ可以通过多种不同途径产生抑瘤或化瘤活性。同时根据ＯＳＭ与其它细胞调节因子如ＬＩＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＣＮＴＦ及ＩＬ－６间相互区别而又相互联系的生物学特点。可以认为：ＧＳＭ在机体免疫应答网络、细胞抗感染免疫及多种细胞因子间的功能协调等方面发挥着广泛而又重要的作用。
- 段海清张兆山
- 关键词：抑瘤素M细胞因子肿瘤
- α-银环蛇毒素基因在大肠杆菌中的表达及其活性分析
- 1999年
- 段海清张兆山李淑琴黄翠芬
- 关键词：Α-银环蛇毒素基因表达原核表达载体
