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焦丽燕: 作品数：10 被引量：37H指数：3; 供职机构：军事医学科学院更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金北京市科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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肝癌细胞蛋白差异凝胶电泳技术系统评估方法被引量：2: 2006年; 利用二维差异凝胶电泳技术(two-d im ensional d ifferential in-gel electrophoresis,2D-D IGE)研究肝癌细胞与正常细胞的差异时应先对其蛋白样品进行标记系统评估,以确保正式实验的成功。在细胞水平上展开蛋白质组研究应尽可能提取到细胞的所有蛋白,为此本研究先比较了机械刮除法、胰酶消化法和PBSE消化法收获肝癌细胞后的细胞形态与蛋白得率,结果显示PBSE消化法收集肝癌细胞时细胞形态完整,提取的蛋白得率最高。然后将提取的细胞蛋白经D IGETM试剂盒的3重荧光(Cy2、Cy3、Cy5)标记后再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和双向电泳(2DE,two-d im ensional electrophoresis)。前者图像使用Im ageQuant软件进行分析,结果说明肝癌细胞蛋白提取液与该染料能相互兼容,样品得到了有效的标记。2DE的扫描图像使用DeCyder 5.0软件的胶内分析(d ifferential in-gel analysis,D IA)和胶间分析(b iological variation analysis,BVA)模式,结果表明,Cy3和Cy5标记的蛋白质定量结果基本一致,但该染料标记肝癌细胞蛋白后会造成极少量蛋白出现位置偏差,给蛋白定量带来一定的误差影响,而BVA中的反标策略能够有效纠正这种由于不同荧光标记带来的定量误差。总之,本研究首次报道了用同一肝癌样品进行不同荧光标记后进行2DE的评估方法,该方法支持了D IGE体系定量的可靠性,而且能给出定量的误差范围,完善了评估体系,为D IGE技术平台的质量控制提供了参考。; 方勤美孙薇焦丽燕钱小红姜颖夏春贺福初; 关键词：肝癌细胞蛋白提取

4例接受抗病毒治疗的艾滋病患者HIV-1核苷类反转录酶抑制剂类耐药基因突变的选择动力学研究被引量：2: 2008年; 目的阐明接受抗病毒治疗的艾滋病患者核苷类反转录酶抑制剂（nucleoside reverse transcriptase inhibitor，NRTI）类耐药基因突变分子进化特征。方法从中国中部农村某抗病毒治疗艾滋病病例研究队列中选择4例服药依从性较好，治疗初期为野生型毒株，在治疗过程中逐渐产生NRTI类耐药基因突变的患者为研究对象，对每位患者的4～5次随访血浆样本的反转录酶（RT）基因进行克隆测序分析，观察每个克隆的基因型耐药性特征。结果共检测855个克隆，平均每份血液样本47．5个±22．8个克隆，得到4例患者历次克隆序列中带各种NRTI类耐药基因突变的构成图谱：某些患者随治疗时间延长逐渐表现为典型的TAMs-1型突变模式，如L210W、T215Y、M41L突变，并且随治疗时间延长，优势种所携带的突变数目有累加趋势；某些患者表现为较明显的TAMs-2型突变，如K70R、D67N、K219Q等突变；其中，某些患者的克隆同时含有T215Y（TAMs-1型）和K70R、D67N（TAMs-2型）突变。结论总结出4例患者HIv-1NRTI类耐药基因突变的选择动力学特征。4例患者表现出不同的NRTI类耐药基因突变演变途径：TAMs-1型、TAMs-2型以及TAMs-1／TAMs-2融合型，该类突变表现出逐级累加的趋势，最先筛选出来的耐药突变往往能够成为最后的优势种。; 李珏焦丽燕李韩平李林刘永健庄道民刘思扬鲍作义李宏王哲李敬云; 关键词：耐药基因突变

两种HIV-1耐药准种分析方法的比较被引量：4: 2010年; 目的比较两种HIV-1耐药准种分析方法 ---克隆PCR产物测序法和单基因扩增法(单基因组测序法,single-genome sequencing,SGS)。方法以本室贮存的某接受高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviraltherapy,HAART)的艾滋病患者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)为样本,分别用克隆PCR产物序列测定法和SGS方法得到HIV-1pol区准种序列,对准种序列进行离散率、耐药相关突变组合构成比等分析。结果克隆方法得到19条pol区序列,SGS方法得到18条pol区序列。对两种方法的核苷酸和蛋白质序列的平均离散率进行成对样本均值分析,采用t检验,P值(单尾)为0.311,差异没有显著性意义;两种方法检测出各种突变组合构成比的2检验结果 ,P>0.25,差异也没有显著性意义。但是,准种中占较少比例的突变模式在两种方法检测的结果不一致,如T215Y/K103N/Y181C/H221Y以及M41L/F116L/T215Y/K103N/Y181C/H221Y两种突变组合模式只在克隆方法中检测到,而携带M41L/A62V/T69Si/T215Y/A98G/K103N/Y181C以及K103N突变的两种毒株仅在SGS方法中出现。结论两种分析HIV-1耐药突变准种方法检测该例样本的核苷酸序列和蛋白质准种序列无显著性差异,检出的主要突变组合的构成比也无显著性差异,对优势准种的检测中两种方法差异不大,但在劣势准种的检测中两种方法有一定差异。; 焦丽燕刘永健郭东星王铮耿庆茂李林庄道民鲍作义刘思扬李韩平李敬云; 关键词：克隆测序聚合酶链反应

生物质谱与蛋白质组学被引量：15: 2004年; 蛋白质组学是后基因组学时代最受关注的研究领域之一,其核心的鉴定技术———生物质谱近年来在仪器设计以及鉴定通量、分辨率和灵敏度等各方面均有质的飞跃,促进了蛋白质表达谱作图、定量蛋白质组分析、亚细胞器蛋白质组作图、蛋白质翻译后修饰以及蛋白质相互作用等蛋白质组研究各个领域的飞速发展。本文综述了生物质谱技术的最新进展,及其在蛋白质组学研究中的应用。; 应万涛焦丽燕钱小红; 关键词：生物质谱蛋白质组学翻译修饰

肿瘤研究中的蛋白质组学研究策略被引量：6: 2005年; 焦丽燕应万涛蔡耘钱小红; 关键词：蛋白质组肿瘤

血浆RNA和PBMCs DNA HIV-1耐药准种多态性和分子进化研究: 人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)是高度变异的人类病原体,在抗逆转录病毒药物压力下,快速突变产生耐药性,导致抗逆转录病毒治疗(antiretroviral therapy,...; 焦丽燕; 文献传递

HIV-1耐药突变及突变型被引量：1: 2009年; 目前已有25个治疗HIV-1的抗逆转录病毒药物（ARV）批准上市：9个核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI），4个非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTI），9个蛋白酶抑制剂（PI），1个融合抑制剂，1个CCR5抑制剂，1个整合酶抑制剂。首个CCR5抑制剂和整合酶抑制剂于2007年批准，有的将融合抑制剂、CCR5抑制剂和整合酶抑制剂统称为侵入抑制剂（EI）。; 焦丽燕李敬云; 关键词：HIV-1复制非核苷类逆转录酶抑制剂耐药突变突变型整合酶抑制剂融合抑制剂

荧光差示凝胶电泳技术的建立及其在角质细胞特异性Smad4剔除小鼠表皮差异蛋白质组学研究中的应用: Smad4是转化生长因子-β/(TGF-β/)超家族信号转导途径中一个共同的中介因子，在哺乳动物的生长发育过程中有重要作用。为了研究Smad4在皮肤发育中的作用，杨晓教授/(军事医学科学院生物工程研究所发育和疾病遗传学研...; 焦丽燕; 关键词：蛋白质组学角质细胞凝胶电泳转化生长因子; 文献传递

体外无药物选择压力条件下HIV-1耐药基因突变的演变被引量：3: 2010年; 目的分离培养体外稳定传代的原代HIV-1耐药毒株,观察失去药物压力下,耐药毒株的体外生长以及主要耐药突变的演化趋势.方法采集15例服用拉米夫定＋司他夫定＋萘韦拉平（3TC＋D4T＋NVP）的HIV-1感染者的外周血单个核细胞（PBMC）,用体外共培养的方法从中分离原代HIV-1毒株;RT-PCR扩增耐药毒株历代培养上清的HIV-1 pol区基因并测序,在Stanford HIV Drug Resistance Database数据库进行耐药性分析.结果 15例患者中病毒载量〉1000拷贝/ml的有8例,均成功分离出稳定传代的原代毒株,其中2株为耐药毒株,所携带的主要耐药突变分别是K103N/K238T和M184V/K103N/Y181C/H221Y,分别对NVP和3TC/NVP高度耐药;无药物压力的体外培养过程中,M184V、K103N、Y181C和H221Y等耐药突变可以稳定传代,但是K238T发生了回复突变.结论分离出2株稳定传代的HIV-1耐药毒株,无药物压力情况下,携带K103N突变的毒株具有较好的复制适应性,可稳定传代;携带M184V和K103N/Y181C/H221Y的毒株也能够稳定复制;本研究中发现K238T耐药突变在失去药物的条件下稳定性差,提示该位点易发生回复突变.; 焦丽燕鲍作义李韩平郭东星王铮庄道民李林耿庆茂刘永健刘思扬李敬云; 关键词：耐药突变

接受抗病毒治疗的AIDS患者HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂类耐药基因突变的选择动力学研究被引量：2: 2009年; 目的研究接受抗病毒治疗的AIDS患者非核苷类逆转录酶抑制剂（non—nucleoside reverse transcriptase inhibitor，NNRTI）类耐药基因突变分子进化特征。方法从我国中部农村抗病毒治疗AIDS患者研究队列中选择4例服药依从性较好，治疗初期为野生型毒株，在治疗过程中逐渐产生NNRTI类耐药基因突变的患者为研究对象，对每位患者的4～5次随访血浆样本的逆转录酶（reverse transcriptase，RT）基因进行克隆测序分析，观察每个克隆的基因型耐药性特征。结果共检测了855个克隆，得到4例患者历次克隆序列中带各种NNRTI类耐药基因突变的构成图谱：4例患者表现出不同的HIV-1 NNRTI类耐药突变途径，发现4条主要NNRTI类耐药基因突变演变途径：（1）G190A，常伴随F227L突变出现，在长期的治疗过程中还有继续累加P236V突变的趋势；（2）Y188C，多单独出现，有时与P236V等同时发生；（3）Y181C，多与V179D或K103N同时出现，不同的患者选择趋向不同；（4）K103N，多与Y181C或M230L突变联合出现。结论总结出4例患者HIV-1 NNRTI类耐药基因突变的选择动力学特征。4例患者表现出不同的NNRTI类耐药基因突变演变途径，最先筛选出来的耐药突变往往能够成为最后的优势种.; 李珏焦丽燕李韩平李林刘永健庄道民鲍作义刘思扬李宏王哲李敬云; 关键词：获得性免疫缺陷综合征逆转录酶抑制剂突变

焦丽燕

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