熊华章 作品数:40 被引量:91 H指数:6 供职机构: 遵义医学院附属医院 更多>> 发文基金: 贵州省科学技术基金 贵州省科技厅社会发展攻关项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 更多>>
睾酮干预雄兔膝骨关节炎软骨中胰岛素样生长因子1的表达 2011年 背景:睾酮对骨关节炎的作用尚无一致的观点,其调节软骨代谢的作用鲜有文献报道。目的:观察睾酮对膝骨关节炎雄兔关节软骨中胰岛素样生长因子1表达的影响。方法:24只雄兔随机分成4组,采用改良Hulth法建立右膝骨关节炎模型;假去势组不切除睾丸,其余3组切除双侧睾丸。第8周末处死假去势组和去势8周组兔取材。第9周开始,激素组肌注生理剂量十一酸睾酮(6mg/kg,2周1次),去势16周组正常喂养,并于16周末处死并取材。结果与结论:大体和组织学观察显示各组兔膝关节软骨的病变程度为假去势组优于去势8周组,激素组优于去势16周组。免疫组化染色显示胰岛素样生长因子1在所有兔膝关节软骨中均有表达,阳性细胞个数假去势组高于去势8周组(P<0.05),激素组高于去势16周组(P<0.05),去势8周组与去势16周组差异无显著性意义(P>0.05)。说明睾酮可通过上调去势雄兔关节软骨中胰岛素样生长因子1的表达,延缓软骨退变。 吴术红 刘毅 熊华章 邹刚关键词:睾酮 软骨 胰岛素样生长因子1 去势 骨关节炎 人羊膜间充质干细胞与人脱细胞羊膜支架的生物相容性 被引量:6 2018年 背景:前交叉韧带损伤越来越多见,传统治疗方式主要是前交叉韧带重建,随着组织工程研究在临床广泛运用,韧带组织工程治疗前交叉韧带损伤已成为目前研究的热点。目的:探讨人羊膜间充质干细胞和人脱细胞羊膜支架的体外生物相容性。方法:采用酶消化法获得人羊膜间充质干细胞并对其进行鉴定。采用酶消化法和化学去污法对新鲜人羊膜进行脱细胞处理,以苏木精-伊红染色以及免疫荧光染色检测细胞成分移除情况以及细胞外基质破坏情况。取第3代人羊膜间充质干细胞,分别使用人脱细胞羊膜浸提液(实验组)与普通L-DMEM/F12培养基(对照组)培养,CCK-8法检测两组细胞增殖能力。人羊膜间充质干细胞与人脱细胞羊膜共培养14 d后,扫描电镜与倒置显微镜观察人脱细胞羊膜上的细胞黏附及生长情况。结果与结论:①倒置相差显微镜观察显示人羊膜间充质干细胞呈漩涡状、贴壁生长,高表达波形蛋白,低表达CK-19,具有成骨、成脂、成软骨诱导分化能力;②苏木精-伊红染色显示人脱细胞羊膜上皮细胞及间充质干细胞已完全移除,细胞外基质成分无明显破坏;免疫荧光染色显示Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原均呈阳性表达;③人脱细胞羊膜浸提液对人羊膜间充质干细胞无细胞毒性,不影响其增殖活性;④倒置相差显微镜及扫描电镜均显示人脱细胞羊膜可以促进人羊膜间充质干细胞增殖及黏附,二者具有良好的生物相容性。 杨继滨 朱喜忠 熊华章 李豫皖 金瑛 刘毅关键词:人羊膜间充质干细胞 干细胞 生物相容性 韧带损伤 前交叉韧带 睾酮对膝关节骨关节炎去势雄兔的软骨修复作用 2017年 目的探讨睾酮对膝关节骨关节炎(KOA)睾丸切除(去势)雄兔的软骨修复作用。方法将18只雄兔采用改良Hulth法建立右侧KOA模型并去势,8周时随机处死6只,确认模型建立成功。将剩余12只兔随机分为观察组和对照组,每组6只。观察组每隔2周肌注十一酸睾酮6 mg/kg,对照组同时肌注等量生理盐水,共8周(4次)。分组处理第8、12、16周,采用电化学发光免疫分析法检测血清睾酮;分组处理第16周末处死,取出右股骨髁,肉眼观察标本大体情况,采用免疫组化法检测软骨组织胰岛素样生长因子1(IGF-1)表达,并进行关节软骨Mankin's评分。结果两组第8周血清睾酮水平比较差异无统计学意义(P>0.05),观察组第12、16周血清睾酮水平均明显高于对照组(P均<0.05)。对照组右膝关节明显肿大,关节软骨面变薄、粗糙,软骨表面色泽变暗,溃疡较深,边缘骨赘形成明显。观察组右膝关节肿大程度轻于对照组,软骨表面有光泽,可见小溃疡和不规则裂隙。观察组软骨组织IGF-1阳性表达率高于对照组,Mankin's评分低于对照组(P均<0.05)。结论睾酮可促进KOA去势雄兔的软骨修复;其机制可能与促进IGF-1表达有关。 熊华章 刘毅 王胜民 吴术红 桑鹏关键词:骨关节炎 膝关节 睾酮 去势法 胰岛素样生长因子1 软骨修复 Scleraxis和碱性成纤维细胞生长因子-1联合修饰对单层骨髓间充质干细胞向韧带成纤维细胞特异性分化的影响 被引量:3 2016年 目的探讨共培养的骨髓间充质干细胞(BMSCs)和韧带成纤维细胞(LFs)经Scleraxis和人碱性成纤维细胞生长因子-1(bFGF-1)联合修饰后,细胞活性、增殖能力和韧带特异性基因及蛋白表达和合成情况。方法取3个月龄SD大鼠12只,通过密度梯度离心法结合贴壁法分离培养BMSCs,胶原酶消化法获得LFs。取第3代BMSCs和LFs,实验分为6组,分别为未诱导单纯BMSCs组(A组)、未诱导单纯LFs组(B组)、未诱导单层共培养组(C组)和诱导后单纯BMSCs组(D组)、诱导后单纯EFs组(E组)、诱导后单层共培养组(F组)。倒置相差显微镜及噻唑蓝(MTT)法观测各组细胞生长情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白浓度;实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测韧带特异性蛋白(Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白、细胞黏合素C、基质金属蛋白酶-2)基因表达。结果倒置相差显微镜观察,共培养细胞可形成一单细胞层生长,F组最快融合至90%以上。MTY检测结果显示,培养9d时,F组吸光度(A)值最高,D组次之,B组最低,与其余组比较差异均有统计学意义(F=1.281,1.593,P〈0.05);A、C、E组间比较差异无统计学意义(F=0.482,0.529,P〉0.05)。ELISA检测结果显示细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白浓度中,F组浓度显著高于其余各组(F=2.282,P〈0.05);比较Ⅰ型胶原蛋白浓度,B、C组间及D、E组间比较差异无统计学意义(F=0.482,0.529,P〉0.05)。比较Ⅲ型胶原蛋白浓度,C组显著高于B组,E组高于D组,差异均有统计学意义(F=1.830,1.938,P〈0.05)。A~F组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白浓度比值分别为1.17、1.19、1.10、1.25、1.17、1.18,D组明显高于其余组。FQ.PCR检测结果显示,Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤维连接蛋白基因表达量F组最高,细胞黏合素CD� 吴术红 刘毅 熊华章 桑鹏关键词:骨髓间充质干细胞 SCLERAXIS 骨形态发生蛋白9基因修饰人羊膜间充质干细胞体外向韧带成纤维细胞分化研究 被引量:1 2018年 目的:探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)基因修饰对人羊膜间充质干细胞(h AMSCs)在体外向韧带成纤维细胞(LFs)分化是否有促进作用,并研究其分子机制。方法:体外分离培养h AMSCs及LFs,观察并比较两种细胞形态学差异。经Ad MAX系统体外构建BMP9基因腺病毒载体,经提纯及荧光法病毒滴度测定后转染P3代h AMSCs。实验分为三组,A组:携带绿色荧光蛋白(GFP)的空腺病毒载体转染h AMSCs(h AMSCs-GFP);B组:携带BMP9基因的腺病毒载体转染h AMSCs(h AMSCs-BMP9);C组:韧带成纤维细胞组(LFs)。于体外分别培养7天后使用荧光定量PCR检测并比较各组韧带相关基因Scleraxis(Scx)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、细胞连接素(TNC)、纤维连接蛋白(Fib)及腱调蛋白(Tnmd)m RNA的表达量。使用免疫荧光检测并比较三组细胞体外培养7天后ColⅠ的表达量。结果:在倒置相差显微镜下,h AMSCs原代呈多角形贴壁生长,传代后呈长梭状漩涡状生长。LFs原代呈长梭状贴壁生长,传代后呈漩涡状集落样生长。A、B组细胞转染8 h、24 h后,生长增殖缓慢,轮廓清晰,细胞形态未发生变化。荧光显微镜观察显示A组在转染8 h后可见GFP荧光表达,24 h后表达荧光的数量和强度均增多。实时荧光定量PCR显示,转染7天时B组SCX、Tnmd、ColⅠ、Fib及TNC的表达量均高于A组(P<0.05),而SCX、Fib、TNC及Tnmd的表达量低于C组(P<0.05),ColⅠ的表达量高于C组(P<0.05)。荧光免疫组化显示,转染7天后,B组ColⅠ的表达量均高于A组和C组。结论:BMP9基因可促进h AMSCs向LFs定向分化,并促进韧带特异性基因的表达和细胞外基质的产生,为h AMSCs作为韧带组织工程种子细胞提供了实验基础。 朱喜忠 刘子铭 吴术红 熊华章 金瑛 李豫皖 杨继滨 尤奇 刘毅关键词:人羊膜间充质干细胞 细胞分化 基因工程 膝关节半月板囊肿的微创治疗 被引量:5 2017年 [目的]探讨膝关节半月板囊肿的微创治疗方法。[方法]2009年1月~2014年12月,对36例膝关节半月板囊肿行关节镜下囊肿切除,硬膜外穿刺针引导2号骨科缝线由外向内缝合消除囊肿的残腔,皮外的缝线用硬膜外穿刺针引导至一个针孔,皮下打结。[结果]36例患者获得随访,随访时间2~7年,无1例囊肿复发,按国际膝关节评分委员会(IKDC)膝关节功能评分,手术前为(69.7±3.8)分,末次随访为(96.5±4.2)分,36例结果均为优。[结论]关节镜下囊肿切除、硬膜外穿刺针引导骨科缝线微创治疗半月板囊肿治疗效果满意,不仅去除了囊肿,还保留了半月板结构,从而减少了继发性骨性关节炎的风险。 邹刚 刘毅 熊华章 吴术红 桑鹏关键词:半月板囊肿 关节镜 硬膜外穿刺针 微创治疗 涂有rhBMP-2的克氏针对长管状骨骨折愈合作用的影响 2013年 目的:观察涂有重组人骨形态发生蛋白-2(recombinant human bone morphogenetic protein 2,rhBMP-2)克氏针对骨折愈合影响。方法:36只新西南大白兔,随机分成两组,在其双侧胫骨制作骨折模型,扩髓,实验组胫骨骨折髓腔内插入rhBMP-2/左消旋聚乳酸(poly-D,L-lactide,PDLLA)涂层的克氏针固定骨折,对照组髓腔内插入单纯PDLLA涂层的克氏针固定骨折,术后分别于4、8、12周处死大白兔,取胫骨骨折标本进行骨形态学分析和生物力学测定,比较两组骨折处新骨形成、生物力学情况。结果:实验组新骨形成优于对照组;实验组断裂应力、最大应力高于对照组(P<0.05)。结论:rhBMP-2、PDLLA混合后涂抹在克氏针表面来固定骨折,随着PDLLA降解,缓慢释放rhBMP-2,促进骨折愈合,缩短骨折愈合时间。 邹刚 吴术红 刘毅 熊华章 王小艳关键词:涂层 骨折愈合 关节镜治疗右膝内侧盘状半月板损伤1例 被引量:1 2017年 盘状半月板是引起膝关节内环境紊乱的原因之一,多数发生于膝关节外侧,这种解剖变异亚洲人比其他种族更为常见[1],发生率高达20%左右。然而,盘状半月板发生在内侧却很少见,双膝关节更为罕见[2 3]。关节镜下对变异并出现症状的半月板修整成形或切除以恢复其正常的月牙形状及生理弧度是治疗的金标准。我院2015年1月收治1例右膝内侧盘状半月板患者,行关节镜下内侧盘状半月板修整成形术,效果满意。本文对此例膝内侧盘状半月板患者的影像学资料、临床特点及关节镜微创治疗报告如下,以期为相关病症的诊治提供参考。 桑鹏 刘毅 孙鹏鹏 熊华章关键词:关节镜 膝关节韧带组织工程的研究进展 被引量:6 2017年 目的:对目前膝关节组织工程韧带在体内外的研究进展,应用及价值进行综述。方法:查阅国内外近年来关于组织工程韧带构建治疗膝关节韧带损伤的相关应用文献,对包括种子细胞、生长因子和支架材料三大要素对构建膝关节组织工程化韧带的研究进展进行总结。结果:种子细胞、支架材料的筛选和适当的生长因子是构建膝关节组织工程韧带的核心和必要条件。种子细胞培养条件的优化和生长因子的浓度选择及配比是构建良好组织工程韧带的关键,而实现膝关节组织工程韧带在体内存活和更好发挥生物学效用,仍需进一步研究。随着生物医学及材料科学的发展,膝关节组织工程韧带的构建方法及方式在不断改进。 李豫皖 金瑛 熊华章 刘毅关键词:膝关节 组织工程韧带 种子细胞 金骨莲胶囊对兔膝关节骨关节炎保护作用的实验研究 被引量:7 2016年 目的:探讨金骨莲胶囊对家兔膝骨关节炎的保护作用。方法:30只家兔完全随机法分为A组、B组、C组三组,每组10只,按改良Hulth法全部家兔切除右膝关节前交叉韧带和右膝内侧半月板,A组术后第1天开始灌服生理盐水,7.5mL/kg,1次/d,连续灌服8周。B组术后第1天开始灌服金骨莲胶囊,150mg/kg,1次/d,连续灌服8周。C组术后第1天开始灌服盐酸氨基葡萄糖片剂150mg/kg,1次/d,连续灌服8周。8周后处死全部家兔,取右侧膝关节软骨行病理学苏木精-伊红、番红染色,依据染色切片进行Mankin评分评估膝关节软骨关节炎程度。RT-PCR法分析测定膝关节软骨中IL-1β基因表达水平。结果:B,C两组家兔股骨髁大体标本、软骨苏木精-伊红及番红染色与A组存在差异。Mankin评分及IL-1β基因相对表达量,B组和C组两组均低于A组(P<0.05),差异有统计学意义;Mankin评分及IL-1β基因相对表达量B组与C组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:金骨莲胶囊对兔膝关节炎有一定的保护作用且与氨基葡萄糖对软骨的保护作用近似,降低IL-1β表达是金骨莲胶囊产生软骨保护作用的途径之一。 曾乐 刘毅 熊华章 邹刚关键词:骨关节炎