王世春
- 作品数：11 被引量：27H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 视黄醇结合蛋白研究被引量：8
- 2000年
- 王世春徐琪寿
- 关键词：视黄醇结合蛋白基因
- 大肠杆菌CM/PDT抗反馈抑制突变体的构建及其性质
- 2002年
- 为了获得具有高催化活性且抗反馈抑制的大肠杆菌分支酸变位酶 预苯酸脱水酶 (chorismatemutase prephenatedehydrataseCM PDT) [EC5 .4 .99.5 EC4 .2 .1.5 1],通过相关菌种CM PDT氨基酸序列同源比较 ,寻找高度保守位点 .用定点突变及PCR法构建突变酶M1(缺失 30 4T、30 5G、Q30 6K)、M2 (缺失W 338)、M3(缺失 30 1～ 386位氨基酸 )、M32 9(E32 9A)和M374 (C374A) ,野生型及各突变型基因与pET2 8a(+ )载体连接后 ,表达融合蛋白 .在非变性条件下 ,由TALON金属螯合亲和层析柱纯化野生型和突变体的酶蛋白 .酶活性测定表明 ,突变体M3的PDT活性下降为野生型活性的 2 9% ,但保持了CM活性 .突变体M374保持了CM ,PDT两种酶的活性 ,突变体M1、M2、M32 9的CM ,PDT活性有一定程度的提高 .酶抗反馈抑制作用检测表明 ,突变体M3、M374解除了苯丙氨酸的反馈抑制作用 ,M1、M2、M32 9部分解除了苯丙氨酸的反馈抑制作用 .与含野生型pheA基因的E .coliBL2 1菌株相比 ,含突变基因的E .coliBL2 1菌株对 10mmol L的苯丙氨酸代谢类似物具有强的抗反馈抑制作用 ,其中M1,M2 ,M3对 2 0mmol
- 刘云王世春张学清刘志红高波徐琪寿
- 人视黄醇结合蛋白基因的毕赤酵母表达载体构建被引量：2
- 2004年
- 用PCR方法从pGEX-hRBP中扩增人视黄醇结合蛋白(retinolbingdingprotein,RBP),用限制性内切酶EcoRⅠ、NotⅠ分别酶切此基因和毕赤酵母表达载体pPIC9,然后用T4连接酶将目的片段克隆到pPIC9载体中。分别用PCR方法和酶切方法验证了此载体构建成功,为下一步使用毕赤酵母进行真核表达人视黄醇结合蛋白打下基础。
- 查娜王世春徐琪寿
- 关键词：基因表达PCR酶切法
- 大肠杆菌tktA基因的克隆表达被引量：5
- 2002年
- tktA是芳香族氨基酸生物合成共同途径的关键酶基因之一,在大肠杆菌中,tktA编码转酮酶A,在磷酸戊糖途径生成4-磷酸赤藓糖中起主要作用。采用PCR方法从大肠杆菌K-12株中扩增到tktA,并实现了高效表达,TktA活性提高了3.9倍,并且使芳香族氨基酸生物合成共同途径中关键中间产物DAHP的产量有所提高。
- 李永辉刘云王世春张学清宋文全程莉徐琪寿
- 关键词：大肠杆菌克隆生物合成代谢工程
- 视黄醇结合蛋白L35和Q98位点突变及其对与视黄醇结合的影响被引量：1
- 2002年
- 根据视黄醇结合蛋白 (RBP)晶体结构和计算机模拟对拟突变位点所作出的结构预测 ,筛选出 2个可能对RBP结合能力有影响的氨基酸位点 .利用定点突变技术分别将 35位亮氨酸突变为能引入较大构象变化的甘氨酸 ,将 98位谷氨酰胺突变为亲水、带正电的精氨酸 .将突变后的RBP基因转入表达宿主菌获得表达后 ,对突变体蛋白实现了变性条件下的分离纯化 .复性后与视黄醇的荧光增强饱和滴定试验表明 ,35位突变为甘氨酸后对RBP结合能力没有产生明显的影响 ,但 98位突变为精氨酸后 ,则显著的提高了与视黄醇的结合能力 ,说明 98位是影响RBP与视黄醇结合和解离的重要位点 .
- 王世春刘云胡远东张学清李松徐琪寿
- 关键词：视黄醇结合蛋白突变
- 代谢工程方法构建苯丙氨酸生物工程菌株
- 苯丙氨酸生物台成途径中的关键酶DAHP合成酶(DS)、分支酸变位酶/预苯酸脱水酶(CM/PD)、氨基转移酶(AT),分别由基因aroG,pheA,TyrB编码.本研究通过代谢工程方法构建苯丙氨酸生物工程菌株.在基因序列同...
- 刘云张学清王世春徐琪寿马立人
- 文献传递
- 视黄醇结合蛋白的分离纯化被引量：1
- 2004年
- 押在变性条件下,应用Sephacryl-100凝胶过滤和Source-30Q阴离子交换两步分离,实现了分离纯化性质不稳定、易于降解的视黄醇结合蛋白(RBP)之目的。最后经过分步缓慢复性,获得具有生物活性的RBP,为其单克隆抗体制备及最终应用于临床营养评价和相关疾病的诊断创造了条件。
- 王世春刘云李永辉徐琪寿
- 关键词：视黄醇结合蛋白纯化复性单克隆抗体
- 视黄醇结合蛋白构效关系及其相互作用蛋白的研究
- 视黄醇结合蛋白（Retinol-binding protein,RBP)是体内维生素A的运载蛋白,以高度特异性和可调控的方式转运视黄醇,以满足个体生长发育,视觉维护和细胞分化等生命活动需要.是临床上评价营养不良,维生素A...
- 王世春
- 关键词：视黄醇结合蛋白分离纯化相互作用蛋白
- 文献传递
- 酵母双杂交筛选与视黄醇结合蛋白有相互作用的蛋白质
- 2004年
- 为了研究视黄醇结合蛋白 (RBP)在维生素A代谢调控中的作用和与相关疾病发生、发展的关系 ,以RBP作为诱饵基因构建了融合表达载体pGBKT7 RBP ;在排除自身转录激活活性的基础上 ,与人肾脏cDNA预转库融合筛选 (PretransformedMATCHMAKERLibraries) ,经营养缺陷型和X α gal显色鉴定 ,从中筛选出三种与RBP有相互作用的新蛋白质 。
- 王世春刘云李永辉徐琪寿
- 关键词：视黄醇结合蛋白相互作用酵母双杂交维生素A基因克隆
- 大肠杆菌莽草酸途径限速酶多基因盒的构建及基因替换被引量：2
- 2004年
- 优化大肠杆菌芳香族氨基酸生物合成代谢途径 ,构建莽草酸代谢途径限速酶的多基因盒PtacaroAaroCaroBkan .利用Red重组系统 ,在破坏整体调控基因csrA时 ,替换多基因盒 .Southern印迹证实 ,基因破坏和基因替换是成功的 .摇瓶发酵表明 ,构建的基因工程菌株比原始菌株基础产酸率提高了 4 5
- 李永辉王世春刘云郭长江蒋与刚徐琪寿
- 关键词：RED重组系统
