王克平
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 解藻酸弧菌株ATCC 17749中海藻酸裂解酶基因的克隆与鉴定被引量：1
- 2013年
- 以解藻酸弧菌株(Vibrio alginolyticus)ATCC 17749为研究对象,利用生物信息学寻找并预测得到5个可能的海藻酸裂解酶基因algV1、algV2、algV3、algV4和algV5。通过构建5个以pET-28a(+)为载体的大肠杆菌表达质粒pET28a-algV1、pET28a-algV2、pET28a-algV3、pET28a-algV4和pET28a-algV5,实现了5个基因的异源表达,并经海藻酸裂解酶定量和定性的活性分析,确定5个基因的编码产物都具有海藻酸裂解酶活性,其中重组的algV1、algV2和algV3为胞外酶,algV4和algV5为胞内酶。
- 胥晴晴朱云霞王克平叶江张惠展
- 关键词：大肠杆菌异源表达酶活测定
- 基于转录机器全局扰动筛查迟钝爱德华菌毒力相关基因
- 2013年
- 目的通过转录机器(RNA聚合酶)σE因子过量表达实现全局转录扰动,筛查迟钝爱德华菌(Edwardsiellatarda,E.tarda)毒力相关基因。方法从E.tarda EIB202中PCR扩增RNA聚合酶σE因子编码基因rpoE,连接到载体pACYC184上,构建rpoE基因过量表达菌株;在克隆rpoE基因时引入突变,使该基因表达失活,构建移码突变失活菌株。感染模式生物斑马鱼,检测各菌株半数致死剂量(LD50),RT-PCR法检测各菌株rpoE及其下游调控基因degP、fkpA、plsB、lpxD、yfiO mRNA的转录水平。结果重组质粒pACYC184-rpoE经双酶切及测序证实构建正确;在102、103、104和105CFU/g注射浓度下,空载体转染菌株和rpoE基因过量表达菌株的毒力差异无统计学意义(P>0.05);与空载体转染菌株相比,rpoE基因过量表达菌株rpoE基因mRNA的转录水平上调9.5倍;与rpoE基因移码突变失活菌株相比,rpoE基因过量表达菌株rpoE基因下游调控基因degP、fkpA、plsB、lpxD、yfiO分别上调6.9、2.64、2.85、2.38、1.34倍。结论成功构建了E.tarda rpoE基因过量表达菌株以及移码突变失活菌株,初步确定degP、fkpA、plsB、lpxD、yfiO 5个基因与E.tarda毒力相关。
- 王晓波叶江宋姗姗王克平张惠展
- 迟钝爱德华氏菌EIB202 Sigma(54)编码基因rpoN的敲除及功能研究
- 迟钝爱德华氏菌EIB202是一类高毒力革兰氏阴性病原菌，同时它是一种人畜共患机会致病菌，能够引起鱼类溃疡病，给海洋水产养殖造成了极大的损失。RpoN是σ54家族的唯一成员，在很多菌属中它是一系列毒力、压力相关基因的重要调...
- 王克平
- 关键词：迟钝爱德华氏菌生物被膜毒力测定
- 文献传递
- 迟钝爱德华氏菌RNA提取及痕量基因组DNA去除方法探究被引量：2
- 2012年
- 迟钝爱德华氏菌EIB202是一类细胞壁结构特殊的革兰氏阴性菌,高质量RNA提取相对较难。为了从转录组水平研究这类致病菌的致病机理,需要摸索有效的RNA提取及RNA样品中痕量基因组DNA去除方法。对常规RNA提取步骤进行改进,增加PBS清洗、反复冻融及较高浓度溶菌酶处理等步骤;另外,利用小体系基因组DNA去除系统,Mg2+与Mn2+协同激活DNase I去除RNA样品中基因组DNA污染。利用优化方法提取的RNA在质量及浓度(1 740 ng/μL)方面均有了显著改善,并建立了一套完全去除RNA样品中痕量基因组DNA污染的程序。
- 王克平叶江张惠展
- 关键词：迟钝爱德华氏菌基因组DNASERT-PCR
