王力华
- 作品数：42 被引量：146H指数：8
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 2009年江西省新分离流行性乙型脑炎病毒株全基因组分子生物学特性研究被引量：2
- 2010年
- 目的对2009年分离自江西省蚊虫标本的流行性乙型脑炎(乙脑)病毒JX0939株进行全基因组序列测定,分析其基因组特征。方法使用针对乙脑病毒全基因组测序引物进行PCR扩增基因组片段,PCR产物直接测序,拼接后获得全基因组序列。利用生物信息学软件进行核苷酸序列及氨基酸序列分析和病毒的系统进化分析。结果新分离乙脑病毒JX0939株基因组全长10965个核苷酸,从97位到10392位,共10296个核苷酸编码一个开放阅读框,编码3432个氨基酸。与GenBank中登录的所有59株乙脑病毒全基因组序列比较发现,其核苷酸总体差异率为1%～17%,氨基酸总体差异率为0.1～5%。与目前使用的减毒活疫苗株SA-14-14-2株相比较,只有88%的核苷酸同源性,全基因组共存在1237个核苷酸差异,83个氨基酸差异。提取GenBank登录的及本实验室测定的不同省份的乙脑病毒全基因组序列,进行全基因组序列系统进化分析显示JX0939株属于基因1型乙脑病毒。结论新分离的乙脑病毒JX0939株属于基因1型,与2007年中国分离株SH17M-07进化关系最接近,与疫苗株SA-14-14-2相比关键位点氨基酸未见变异。
- 王力华李铭华付士红姜红月陈维欣唐松戴新平应彩霞詹漫华施勇梁国栋
- 关键词：乙型脑炎病毒全基因组系统进化分析
- Banna病毒TaqMan探针法RT-PCR检测方法的建立被引量：11
- 2006年
- 目的建立Banna病毒核酸特异的快速、敏感的TaqMan探针RT-PCR检测方法。方法首先对从GenBank中检索到的所有Banna病毒的序列进行同源性分析及引物、探针的设计。病毒在BHK21细胞或C6/36细胞上繁殖扩增后提取病毒RNA和逆转录。以cDNA为模板分别进行TaqMan探针法RT-PCR和传统的PCR检测,并对方法的种内广谱性和特异性、检测灵敏性以及用于蚊虫和临床标本的适用性等进行评价。结果Banna病毒核酸特异的TaqMan探针RT-PCR检测方法具有较好的种内广谱性和特异性,可以检出所有12株Banna病毒,而其他虫媒病毒如辛德毕斯病毒、乙型脑炎病毒、batai病毒和环状病毒检测结果均为阴性。与传统PCR相比,敏感性高100倍以上,可以检出每50μl标本中含有0·5CCID50的Banna病毒。单链RNA变性条件(65℃)进行逆转录使检测结果的敏感性比99℃变性法最少低10倍。病毒在室温保存1天和4℃保存1周后,检出敏感性会比原来低10倍左右。该方法在检测模拟感染Banna病毒的人血清标本以及蚊虫标本时,均显示出较好的特异性。112份蚊标本中检出6份标本阳性,4份可疑阳性,病毒分离结果3份阳性。结论本实验成功建立了Banna病毒特异性核酸的TaqMan探针RT-PCR检测方法,并初步证实可用于血清标本和媒介蚊虫标本的检测,为开展Banna病毒的流行监测及临床早期诊断提供了新的技术手段。
- 徐丽宏曹玉玺何丽芳王焕琴何英付士红孙肖红王环宇刘卫滨王力华梁国栋
- 关键词：虫媒病毒聚合酶链反应
- 盖塔病毒全基因组序列、扩增方法及引物
- 盖塔病毒全基因组序列、扩增方法及引物，该基因组全长包括11690个核苷酸，不包括5’端帽子结构、3’端的多聚核苷酸尾，整个基因组编码一个多聚蛋白，5’端2/3编码非结构蛋白，3’端1/3编码结构蛋白；扩增用引物覆盖整个病...
- 梁国栋王力华付士红
- 文献传递
- 云南省狂犬病病毒糖蛋白全编码区序列特征研究被引量：3
- 2015年
- 目的 测定云南省狂犬病病毒糖蛋白全编码区基因序列,阐明它们的分子生物学特征.方法 用直接免疫荧光法进行病毒抗原检测,对阳性标本提取病毒RNA,用逆转录聚合酶链式反应对病毒糖蛋白基因进行全序扩增,并对目的基因核苷酸和氨基酸进行同源性和进化树分析以及氨基酸位点分析.结果 在云南省获得18株狂犬病病毒糖蛋白全编码区基因序列,它们的核苷酸序列和推导氨基酸序列同源性分别为98.2％ ～99.9％和97.3％ ～99.8％,与国内外参考株核苷酸序列和推导氨基酸序列的同源性分别为85.7％ ～ 99.9％和93.1％ ～99.8％.进化分析表明,云南流行株分别与我国南方及东南亚流行株亲缘关系较近,但云南株间进化关系较为复杂,可分为六个进化亚群.它们的主要抗原性、致病性、毒力及糖基化等功能位点均未发生明显改变.结论 云南狂犬病病毒流行株具有多样性特点,与省内外、境内外及省内不同地区间犬类流动并传播该病毒相关.云南株狂犬病病毒糖蛋白重要功能位点未发生变异,仍然保持其特有的抗原性和毒力等特征.
- 何健丁继超陶晓燕章域震杨卫红冯云杨杜鹃张娟张云智李浩申辛欣王力华唐青张海林
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白基因同源性系统进化
- 狂犬病病例的实验室诊断
- ＜正＞我国是狂犬病疫情最严重的地区之一,年报告死亡人数仅次于印度,位居世界第二。20世纪50年代以来,我国狂犬病先后出现了3次流行高峰。1981年全国狂犬病报告死亡7037人,为新中国成立以来报告死亡数最高的年份。目前我...
- 王力华
- 文献传递
- 首次从云南蚊虫分离到辛德毕斯病毒及其鉴定被引量：13
- 2008年
- 目的了解云南省虫媒病毒的存在和流行情况。方法2005年8月,在云南省勐海县采集蚊虫,蚊虫标本经研磨后,上清液接种BHK21细胞以分离病毒,用间接免疫荧光试验和RT-PCR等方法进行鉴定,并对病毒的分子生物学特征进行分析。结果采集到蚊虫标本9400只,其中分离到一株对BHK-21细胞能产生明显细胞病变的病毒(MX10)。该病毒经间接免疫荧光试验提示为甲病毒。用甲病毒属特异引物和Sindbis病毒E1基因特异引物对MX10病毒的RT-PCR扩增为阳性,经核酸序列测定分析证实该序列与Sindbis病毒泰国分离株(AF492770)同源性最高,为90.0%;与1987年分离自云南发热患者的YN87448株和1991年新疆按蚊分离株XJ-160的同源性分别为73.1%和72.0%。结论本次从勐海县蚊虫分离到的MX10病毒株为Sindbis病毒,并可能是Sindbis病毒的新亚型或新株系。
- 王静林张海林孙肖红付士红冯云王力华梁国栋
- 关键词：辛德毕斯病毒蚊虫
- 从病毒性脑炎患者标本分离的基因I型乙脑病毒全基因组序列特征研究被引量：2
- 2012年
- 目的通过现代分子生物学理论与技术测定和分析了从脑炎患者脑脊液标本分离的基因I型乙脑病毒（GZ56株）全基因组序列特征，以了解其致病性的分子基础。方法采用RT．PCR法和核酸序列测定法获得病毒基因组全序列，并利用DNASTAR、ClustalX version2．0．9及MEGAversion4．1等生物学软件分析该乙型脑炎病毒核苷酸序列、氨基酸序列及系统进化等。结果研究结果表明从病毒性脑炎患者脑脊液标本分离的基因I型乙脑病毒（GZ56株）基因组全长为10965nt，编码3432个氨基酸。病毒全基因组分子进化分析显示GZ56株全基因组与国际上第一株从蚊虫分离的基因I型乙脑病毒（M-28株）处于同一进化分支。GZ56株与其他基因I型乙脑病毒核昔酸和氨基酸序列同源性分别为96．2％～98．6％和98．2％～99．7％。病毒E基因与乙脑病毒灭活疫苗株P3相比存在11个氨基酸差异位点，而与乙脑病毒减毒活疫苗株SA14-14-2相比，在E蛋白上存在14个氨基酸差异位点。结论本研究提示，从病毒性脑炎患者标本分离的基因I型乙脑病毒全基因组未见明显变化，从基因组水平可以推测该病毒可以被现行的乙脑疫苗所保护。
- 李佳付士红王力华高晓艳王环宇叶旭芳赵苏晔刘纯婷朱武洋王兰梁国栋
- 关键词：脑脊髓液种系发生
- RNAi抑制XJ-160病毒复制的研究被引量：4
- 2005年
- 目的通过建立RNA干扰(RNAinterference,RNAi)抑制XJ160病毒复制的模型,在序列特异性、位置效应和量效关系等方面,探讨RNAi对XJ160病毒复制的影响,为进一步研究RNAi的抗病毒作用和机制奠定基础。方法按照siRNA(shortinterferencingRNA)的设计要求合成XJ160病毒特异siRNA,脂质体法转染BHK21细胞后感染XJ160病毒,通过测定病毒滴度、蛋白表达量及XJ160病毒RNA合成研究siRNA对XJ160病毒复制的抑制。结果成功建立了RNAi抑制XJ160病毒复制的模型,探讨了RNAi抑制该病毒复制作用的特点。结论外源导入的siRNA能够抑制XJ160病毒的复制,并且这种抑制作用具有明显的序列特异性、位置效应和存在量效关系等特点;siRNA是通过降解病毒RNA实现抑制病毒复制作用的。
- 邓娟杨益良付士红王力华金冬雁梁国栋
- 关键词：BHK-21细胞序列特异性病毒RNA脂质体法抑制病毒
- 辛德毕斯病毒荧光PCR检测方法的建立被引量：3
- 2005年
- 目的建立辛德毕斯病毒核酸的SYBRGREENΙ荧光PCR检测方法。方法根据辛德毕斯病毒基因组核苷酸序列特性设计引物。病毒在BHK21细胞上繁殖扩增后提取RNA和逆转录。以病毒cDNA为模板分别进行SYBRGREENΙ荧光PCR和常规RTPCR扩增,并对SYBRGREENΙPCR法的灵敏性、特异性、重复性等进行分析。结果最适退火温度为55℃,最适引物浓度为0.5μmol/L。用该方法检测2株SIN病毒株YN87448和XJ160结果均为阳性,而对其他虫媒病毒如甲病毒属Geta病毒、乙脑病毒、Batai病毒、Banna病毒、环状病毒及西方马脑炎病毒合成模板检测时结果均为阴性。根据病毒空斑形成实验结果,将YN87448病毒悬液进行连续10倍稀释后分别用常规PCR和SYBRGREENΙ荧光PCR方法进行检测。结果SYBRGREENΙ荧光PCR检测敏感性比常规PCR方法要高近100倍,检出下限可达0.1PFU/ml。对模拟感染的人血清标本检测结果表明人血清中成分对检测体系无明显影响。对151份不明原因发热和病毒性脑炎患者的血清或脑脊液标本进行检测,结果检测到6份标本阳性。结论本实验建立了辛德毕斯病毒特异性核酸的SYBRGREENΙ荧光PCR检测方法,实验结果显示了较好的特异性、广谱性,初步证实可应用于临床标本的检测,为将来用于临床和调查辛德毕斯病毒在我国的流行情况提供了新的技术手段。
- 何丽芳徐丽宏曹玉玺王力华刘卫滨付士红梁国栋
- 关键词：逆转录聚合酶链反应
- 我国实验室确诊狂犬病输入病例诊断及感染来源分析被引量：1
- 2015年
- 目的 诊断刚入境以色列患者是否患狂犬病,并确定其传染来源.方法 对患者唾液及脑脊液标本进行RT-PCR检测,检测阳性标本进行病毒N基因序列测定,并通过种系发生分析确定毒株来源.结果 患者唾液标本为狂犬病病毒阳性,病毒N基因序列种系发生分析显示,患者感染病毒株与印度野生动物狂犬病毒亲缘关系最近.结论 该以色列患者为我国首例实验室确诊的狂犬病输入病例,感染来源为印度.
- 李浩陶晓燕朱武洋吕新军申辛欣王力华于鹏程唐青刘宏图
- 关键词：狂犬病基因
