王勇祥
- 作品数：9 被引量：28H指数：3
- 供职机构：四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 细菌非编码小RNA研究进展被引量：2
- 2014年
- 细菌非编码小RNA（Small non-coding RNAs,sRNAs）是一类长度在40～500个核苷酸,通常位于细菌染色体基因间区转录但不编码蛋白的一类RNA分子.1967年,从大肠杆菌中分离出第一个sRNA-6SRNA,然而经历了30多年的时间才阐明其生物学功能.sRNAs广泛存在于生物界中,目前原核生物中以大肠杆菌和沙门菌中发现的sRNA数量最多,在霍乱弧菌、沙眼衣原体、产单核细胞李氏杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌以及产气荚膜梭菌中也均有发现.
- 王勇祥孟霞孟宪臣聂佳佳朱国强
- 关键词：小RNA非编码金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌产气荚膜梭菌生物学功能
- 肠炎沙门菌Ⅰ型菌毛主要亚单位FimA原核表达及纯化被引量：2
- 2014年
- 为探讨肠炎沙门菌非编码小RNA(non-coding small RNA)IsrE在转录后水平是否参与对fimA的调控作用,在大肠杆菌中构建并表达FimA重组蛋白,并对其培养条件进行优化,制备高纯度FimA重组蛋白。利用原核表达载体p ET-28a(+)构建出能表达fimA的重组质粒,并分别对IPTG浓度、诱导温度和诱导时间等条件进行优化,以提高目的蛋白的产量和增大其可溶性,最后经Ni-NTA亲和层析分离纯化FimA重组蛋白。通过酶切、测序和Western blot鉴定分析,成功构建并表达肠炎沙门菌I型菌毛主要亚单位FimA,蛋白分子质量约为19.3 kDa,且主要以包涵体的形式表达,经Ni-NTA亲和层析纯化后的重组蛋白在SDS-PAGE中显示单一条带。本研究构建、表达并获得纯度较高的重组蛋白FimA,为进一步研究和验证肠炎沙门菌非编码sRNA IsrE是否在转录后水平参与对fimA的调控奠定了基础。
- 王勇祥孟霞段进坤周明旭周明旭杨溢陶洁
- 关键词：肠炎沙门菌ISRE原核表达
- 蛋鸡沙门菌分离株生物被膜与耐药相关性研究被引量：5
- 2017年
- 为调查我国部分地区规模化蛋鸡场沙门菌生物被膜(BF)与耐药的相关性,2014~2015年从四川、云南、湖北、辽宁、天津、安徽六省规模化蛋鸡养殖场送检的病死鸡分离鉴定出40株沙门菌。玻片凝集法显示分离株包括6种血清型,其中以鼠伤寒沙门菌为主。结晶紫染色法检测生物被膜结果表明,15%(6/40)菌株形成强生物被膜;52.5%(21/40)菌株形成中强生物被膜;32.5%(13/40)菌株不形成生物被膜。K-B纸片法进行药敏试验的结果显示,产BF的27个沙门菌分离株对环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、复方新诺明、多西环素、四环素、链霉素、氨苄西林和青霉素9种药物均为多重耐药,耐药率100%,其中对多黏菌素B和头孢噻肟的敏感性显著降低。不产BF的13株沙门菌对以上受试抗生素药物均敏感,耐药率为0。结果表明蛋鸡沙门菌生物被膜与耐药存在相关性。
- 师红萍周雪雁王勇祥邹文成王红宁
- 关键词：沙门菌生物被膜耐药性蛋鸡
- 禽伤寒沙门氏菌SG9R株asd基因缺失株平衡致死系统平台的构建
- 2015年
- 为研发以禽伤寒沙门氏菌(SG)SG9R弱毒疫苗株为载体表达外源基因的活菌疫苗,本研究利用Red同源重组系统对SG9R株基因组中编码天冬氨酸β-半醛脱氢酶的asd基因进行敲除,构建SG9R△asd缺失突变株。该突变株在缺乏外源DAP培养条件下溶菌死亡,而在添加DAP或导入表达链球菌asd+质粒p YA3342后才能够恢复增殖能力,以此建立了以asd营养基因为筛选标志的SG染色体-质粒平衡致死系统。并且进一步采用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,将其克隆于asd+质粒p YA3342中,电转化于SG9R△asd缺失突变株中,通过无DAP培养条件的筛选,获得了表达GFP外源基因的SG重组菌,经体外连续25次传代后,鉴定结果显示,GFP仍能够在重组SG中持续稳定的表达。本研究结果为以SG弱毒疫苗菌株作为活载体的基因工程疫苗的研制提供简便易行的操作平台。
- 王小舟杨样胡会杰宋玉洁王勇祥谢静李芙蓉陆广富朱国强
- 关键词：绿色荧光蛋白
- 肠炎沙门氏菌非编码小RNA STnc640对菌毛相关基因的调控分析被引量：3
- 2015年
- STnc640是一种功能未知的沙门氏菌非编码小RNA(sRNA),为研究其对肠炎沙门氏菌(SE)菌毛相关基因的调控作用,本研究通过λ噬菌体Red同源重组系统构建了SE50336株stnc640缺失突变株(50336△stnc640),并利用表达载体p BR322构建了回补株50336△stnc640/pstnc640。利用荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)检测STnc640在SE50336株不同生长时期的转录水平,结果显示,细菌生长的稳定后期STnc640转录水平最高,为对数生长早期表达量的16.5倍;同时检测主要菌毛亚单位sefA、safA、stbA、sthA、csgA、csgD、peg 和外膜蛋白基因ompD的表达,结果显示,相比亲本株50336,50336△stnc640中sef A、csgD和ompD基因的表达均显著下调,而50336△stnc640/pstnc640回补株中以上各基因的表达均得到恢复。本实验结果表明STnc640对SE部分菌毛基因的表达具有调控作用。
- 孟霞孟宪臣朱春红王亨王金秋倪杰王勇祥朱国强
- 关键词：肠炎沙门氏菌菌毛
- 肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
- 2014年
- 为探究肠炎沙门菌伴侣蛋白Hfq对nmpC的调控机理及其基因编码产物OmpD在致病过程中参与的生物学功能,采用PCR方法扩增肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD基因nmpC,并将其克隆至原核表达载体pColdTM TF,构建重组表达载体pColdTM TF-nmpC。将其转化受体菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导和Ni-NTA亲和层析获得高纯度的融合蛋白OmpD。用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,获得鼠源抗OmpD抗体。结果显示,经酶切、测序和Western blot鉴定分析,本研究成功构建并表达肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD,经纯化后免疫BALB/c小鼠,获得特异性的鼠源OmpD多克隆抗体,为进一步探究肠炎沙门菌外膜蛋白OmpD在致病过程中参与的生物学功能奠定基础。
- 王勇祥陆广富孟霞杨样王小舟张琪宋玉洁朱国强
- 关键词：肠炎沙门菌原核表达多克隆抗体
- 肠炎沙门氏菌sRNA伴侣蛋白Hfq表达与纯化被引量：8
- 2013年
- 利用pET原核表达系统和亲和层析表达纯化肠炎沙门氏菌sRNA伴侣蛋白Hfq。首先构建含靶基因hfq的重组表达质粒pET28a(+)-hfq,经PCR及双酶切鉴定构建正确,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的基因高效表达。SDS-PAGE及Western blot结果表明:Hfq在大肠杆菌中成功表达,蛋白分子质量约为16.6ku,且主要存在于上清中,以可溶形式表达。进一步对表达产物进行Ni 2+亲和层析纯化,获得纯度较高的融合蛋白,为研究Hfq蛋白与sRNA的相互作用以及sRNA的调控机制提供基础。
- 孟宪臣孟霞聂佳佳厚华艳王勇祥朱国强
- 关键词：肠炎沙门氏菌SRNA纯化
- 蛋鸡和种鸡沙门菌的净化研究被引量：8
- 2016年
- 沙门菌是一种重要的人畜共患病原菌，沙门菌病是具有重要公共卫生意义的人畜共患病之一，禽蛋、禽肉产品是其重要传播媒介。为了保障蛋鸡和种鸡养殖健康和蛋品、肉品安全，国家蛋鸡产业技术体系把蛋鸡和种鸡沙门菌的净化作为重点任务开展研究。文章报道了2009～2015年对沙门菌流行病学的调查，沙门菌检测方法，蛋鸡和种鸡场鸡沙门菌溯源，蛋鸡和种鸡场沙门菌的净化规程及生物安全措施研究取得的进展。根据研究结果对蛋鸡和种鸡沙门菌净化提出建议：进一步对沙门菌的检测方法进行改进和标准化，检测淘汰阳性鸡，完善种鸡沙门菌净化标准；规模化鸡场沙门菌净化应以生物安全措施为重点，落实“鼠不进舍、料不见天，粪不落地、精准消毒”等生物安全措施。
- 王红宁雷昌伟杨鑫张安云张鹏向荣杨永强王勇祥刘必慧韩潇潇袁齐武
- 关键词：蛋鸡种鸡沙门菌规模化生物安全
- 肠炎沙门菌非编码小RNA isrC基因缺失株的致病性
- 2015年
- 细菌非编码小RNA(sRNA)是一类可在转录后水平调控基因表达的调节子。IsrC是存在于鼠伤寒沙门菌毒力岛上的一种与毒力相关的sRNA,可调节巨噬细胞存活蛋白MsgA的表达。本研究克隆了肠炎沙门菌50336菌株isrC基因,通过λ-Red同源重组系统构建了isrC缺失突变株50336△isrC,并利用表达载体pBR322构建了回补株50336△isrC/pisrC。将野生株,isrC突变株和回补株分别接种1日龄清远麻鸡,比较三者之间的致病性差异。结果显示,肠炎沙门菌isrC基因与鼠伤寒沙门菌同源性为100%;成功构建了isrC缺失突变株和回补株;野生株,突变株和回补株对雏鸡的半数致死量(LD50)分别为2.81×108 CFU,2.02×108 CFU和3.10×108 CFU,相比野生株50336,突变株50336△isrC的LD50明显下降,表明isrC基因的缺失增强了肠炎沙门菌的毒力。
- 孟霞孟宪臣王金秋王亨朱春红倪杰王勇祥朱国强
- 关键词：肠炎沙门菌
