王洪财
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 细胞外信号调节激酶参与调节鱼藤酮介导的嗜铬细胞瘤细胞损伤被引量：3
- 2009年
- 目的探讨细胞外信号调节激酶（extracellular signal—regulated kinase，ERK）1／2在鱼藤酮介导的多巴胺能细胞损伤中的信号调节机制。方法鱼藤酮处理体外培养的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PCI2）细胞株，建立帕金森病细胞模型。采用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐（MTT）比色法检测鱼藤酮对PCI2细胞活力的影响，免疫组织化学方法观察鱼藤酮对磷酸化ERKl／2（p-ERK1／2）表达的影响，免疫印迹法研究p-ERKl／2蛋白表达随时问变化的趋势，并检测ERK1／2上游激酶抑制剂PD98059对鱼藤酮诱导ERK1／2磷酸化及细胞活力的影响。结果PCI2细胞随鱼藤酮（5Ixmol／L）作用时间的增加，细胞吸光度（％）出现下降，1h降至对照组的75．46±5．47，2、4、8h分别降至70．42±1．94、65．23±0．96、59．04±2．85，24h降至29．64±1．63，各时间点差异有统计学意义（F=143．014，P=0．000）；与对照组（100．00±2．89）比较，q值分别为17．07、20．58、24．19、28．50、48．95，均P〈0．叭。镜下观察显示鱼藤酮处理的细胞中有明显p-ERKl／2聚集；免疫印迹实验结果显示，随鱼藤酮作用时间的增加，p-ERK1／2出现双相表达升高，30min开始升高，1—2h达高峰，4h转而降低，8h又重新升高，16h后基本消失；PD98059明显抑制鱼藤酮导致的ERK1／2磷酸化，明显减低了细胞损伤的程度。结论在鱼藤酮介导的多巴胺神经元损伤中呈现ERKl／2双相活化，该过程可能在调控PD多巴胺能细胞损伤中起重要作用。
- 王洪财张振涛王涛曹学兵孙圣刚
- 关键词：PCI2细胞鱼藤酮
- CDK5在鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元凋亡中的作用被引量：3
- 2012年
- 目的探讨CDK5在鱼藤酮介导的SH-SY5Y细胞凋亡中的作用以及通过干预CDK5表达对细胞凋亡的影响。方法使用鱼藤酮处理多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,Annexin-V/PI染色,流式细胞仪检测不同实验组细胞凋亡率,采用Western blot法检测不同实验组CDK5的表达以及p25/p35蛋白的表达比。结果经鱼藤酮处理后细胞活力呈浓度依赖性下降,细胞凋亡率增高,且CDK5表达增高,p25/p35比值增高。CDK5抑制剂MDL28170或Olomoucine预处理细胞能够降低CDK5的表达水平,降低p25/p35蛋白的表达比,同时可以减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤。结论 CDK5在鱼藤酮介导的SH-SY5Y细胞凋亡中可能发挥着重要作用,抑制CDK5的活性可能具有神经保护作用。
- 黄杰张振涛陈春暖王洪财熊婧王涛
- DNA聚合酶beta在鱼藤酮(ROT)介导的细胞周期异常调控中的作用
- 目的 观察各种PD相关的神经损伤因素对细胞周期分布的影响以及DNA聚合酶beta (DNA polβ)的表达在ROT介导的细胞周期异常调控中的作用.方法 体外培养多巴胺能细胞SH-SY5Y细胞,分别采用不同浓度的H2O2...
- 王洪财张萍刘玲吴萍汪顶安郭可心张国新黄金莎熊念王涛
- DNA聚合酶β抑制剂齐墩果酸对帕金森病小鼠模型的保护作用被引量：3
- 2014年
- 目的观察DNA聚合酶β抑制剂齐墩果酸对帕金森病小鼠模型的保护作用。方法利用MPTP腹腔注射法制作小鼠帕金森病模型,在MPTP注射前后分别给予DNA聚合酶β抑制剂齐墩果酸干预,用免疫组织化学染色法检测小鼠中脑酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元,免疫印迹法检测中脑腹侧TH蛋白和活化的Caspase-3表达水平,HPLC法检测纹状体中多巴胺及其代谢产物的水平。结果小鼠腹腔注射MPTP后出现行为学异常,中脑黑质多巴胺能神经元损伤,中脑腹侧TH表达降低,活化的caspase-3水平增高,同时纹状体多巴胺及其代谢产物3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)水平降低。齐墩果酸干预能够显著改善小鼠的行为学评分,增加黑质多巴胺能神经元数量,抑制caspase-3活化,并增加纹状体多巴胺和DOPAC水平。结论齐墩果酸可能对帕金森病小鼠多巴胺能神经元具有保护作用。
- 张振涛王洪财张国新胡丹熊婧张兆辉
- 关键词：DNA聚合酶Β齐墩果酸帕金森病多巴胺能神经元
- 钙蛋白酶通过降解突触蛋白Ⅰ介导脑出血后继发性神经元损伤被引量：3
- 2014年
- 目的观察钙蛋白酶在实验性脑出血后继发性神经元损伤中的作用及其机制。方法脑内注射自体血液法制作小鼠脑出血模型,将10周龄雄性C57BL/6J小鼠实验动物随机分为4组:0 h组(对照组)、2 h组、12 h组和24 h组,每组10只小鼠。收集血肿周围脑组织后检测血肿周围组织钙蛋白酶活性水平,免疫印迹法检测突触蛋白Ⅰ表达水平。重组的突触蛋白Ⅰ与钙蛋白酶共孵育后检测其降解过程,并观察钙蛋白酶抑制剂ALLN和MDL28170的作用。在体外培养的神经元样大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)中加入钙蛋白酶,观察其细胞损伤作用和对突触蛋白Ⅰ的降解。结果脑出血后2 h血肿周围脑组织钙蛋白酶活性升高,至24 h达到高峰。脑出血0 h、2 h、12 h和24 h后钙蛋白酶活性读数分别为234.32、343.87、425.29和597.36,12 h组和24 h组与对照组相比差异具有显著性(P<0.05)。同时突触蛋白Ⅰ水平逐渐降低,提示其降解。至血肿形成后24 h下降到对照组的67.00%(P<0.01)。纯化的重组突触蛋白Ⅰ与钙蛋白酶共孵育后出现降解,孵育30 min后突触蛋白Ⅰ含量下降至对照组(0 h组)的57.75%(P=0.001),在钙蛋白酶抑制剂ALLN(50μmol/L)和MDL28170(10μmol/L)存在的情况下,突触蛋白Ⅰ水平分别为对照组的87.00%和84.75%(与单纯钙蛋白酶处理组30 min组相比,P<0.05)。外源性钙蛋白酶与PC12细胞共孵育12 h后细胞活力下降到对照组的58.25%(P<0.01),而ALLN和MDL28170处理组细胞活力升高到对照组的83.00%和80.25%(与单纯钙蛋白酶处理组相比,P<0.01)。结论钙蛋白酶通过降解突触蛋白Ⅰ参与脑出血后的继发性神经损伤,有可能成为脑出血的治疗靶点。
- 张振涛张国新王洪财熊婧胡丹张兆辉
- 关键词：钙蛋白酶脑出血
- 细胞外信号调节激酶(ERK1/2)与帕金森病被引量：5
- 2009年
- 细胞外信号调节激酶(ERK1/2)类属丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,能在生理和病理条件下参与神经可塑性调节。近年来发现,体外持续ERK1/2通路活化在多巴胺神经毒素介导的损伤中起直接作用。此外,在剖检的帕金森病患者中脑黑质神经元中存在磷酸化ERK1/2积聚,提示ERK1/2与多巴胺能神经损伤有关联。本文结合近几年帕金森病的研究进展,简要回顾ERK1/2通路活化与帕金森病的相关性。
- 王洪财王涛
- 关键词：细胞外信号调节激酶帕金森病氧化性损伤
- 钙蛋白酶在MPP^+诱导的多巴胺能神经元损伤中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的观察钙蛋白酶在MPP+诱导的多巴胺能神经元损伤中的作用,探讨帕金森病的发病机制。方法使用神经生长因子诱导PC12细胞神经元样分化,然后使用MPP+处理神经元样分化的PC12细胞,制作帕金森病细胞模型。使用免疫印迹法检测细胞内总钙蛋白酶和活化的钙蛋白酶的表达水平,使用钙蛋白酶活性检测试剂盒观察钙蛋白酶活化水平,使用钙蛋白酶抑制剂ALLN和MDL28170抑制钙蛋白酶活性后采用MTT法检测其对细胞活性的影响,用流式细胞术观察细胞凋亡变化。结果神经元样分化的PC12细胞经MPP+处理后总的钙蛋白酶水平保持稳定,但活化的钙蛋白酶表达水平逐渐增高,钙蛋白酶活性也逐渐增高,MPP+处理12 h后达到高峰。ALLN和MDL28170能够显著抑制钙蛋白酶活性,并减轻MPP+诱导的PC12细胞损伤。钙蛋白酶抑制剂也能够明显抑制MPP+诱导的细胞凋亡。结论钙蛋白酶参与MPP+诱导的多巴胺能神经元损伤,可能是帕金森病新的治疗靶点。
- 张振涛张国新王洪财熊婧胡丹张兆辉
- 关键词：帕金森病多巴胺能神经元钙蛋白酶PC12
- 中国汉族人群NCAPD2基因单核苷酸多态性与帕金森病相关性研究
- 目的 NCAPD2是染色体浓缩的重要蛋白,既往研究表明其基因多态性与阿尔滋海默病相关.目前尚无NCAPD2基因多态性与帕金森病的相关性研究.本研究将讨论NCAPD2与中国中部汉族帕金森病人群发病相关性.方法 选取中国中部...
- 张萍刘玲吴萍汪顶安郭可心张国新黄金莎王洪财熊念王涛
