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人B淋巴细胞刺激因子融合蛋白的表达与功能鉴定: 2012年; 目的:构建人B淋巴细胞刺激因子(hBAFF)的真核表达质粒,表达具有生物学功能的Fc-hBAFF融合蛋白。方法:PCR扩增hbaff胞外区编码基因,加入HA信号肽与hIgG1 Fc后,连入pTT3真核表达载体,采用磷酸钙法转染293T细胞。培养上清经蛋白G纯化后,SDS-PAGE与Westernblot鉴定目的蛋白的表达。流式细胞术检测Fc-hBAFF对人B细胞的增殖情况。结果:成功构建pTT3-HA-hIgG1 Fc-hBAFF融合表达质粒,体外大量表达纯化的Fc-hBAFF蛋白经SDS-PAGE与Western blot鉴定正确,并发现Fc-hBAFF蛋白对人外周血B细胞有明显促增殖作用。同时通过尾静脉高压注射的方式证实该质粒能在体内持续表达7 d。结论:体外表达并获得了具有生物学功能的Fc-hBAFF融合蛋白。; 王婷婷王焱冰游思维王璇王东辉; 关键词：B淋巴细胞刺激因子 B细胞自身免疫性疾病

草原兔尾鼠卵透明带3融合蛋白抗原的制备及免疫反应性被引量：2: 2007年; 目的大量制备重组的草原兔尾鼠卵透明带3（Recombinant Lagurus lagurus zona pellucida 3, r-LZP3 ）融合蛋白，并检测其免疫反应性。方法经密码子优化的Lzp3基因在E.coli BL21（DE3）中以包涵体形式表达融合蛋白，表达产物经洗涤、纯化、溶解、复性后，用Western blot、ELISA和抗生育试验鉴定免疫反应性。结果得到纯度达93％的r-LZP3蛋白。Western blot显示表达产物与LZP3小鼠抗血清出现特异性反应条带。ELISA表明免疫小鼠血清中LZP3抗体滴度达1：45000以上。抗生育试验表明r-LZP3蛋白免疫小鼠的避孕率为25％，平均每胎产仔数减少4-5只。结论已获得了大量具有显著免疫活性的r-LZP3蛋白，为控制草原兔尾鼠鼠害的研究提供了重要的抗原。; 王焱冰李轶杰张富春; 关键词：草原兔尾鼠卵透明带3 融合蛋白免疫反应性免疫不育

壳聚糖介导增强DNA疫苗皮肤免疫效果的研究被引量：5: 2006年; 目的:探讨壳聚糖(chitosan)包裹DNA疫苗皮肤免疫效果。方法:以chitosan包裹不同的草原兔尾鼠卵透明带3(LZP3)基因DNA疫苗pcDNA3-Lzp3(pLzp3)和pLC,通过皮肤擦拭免疫小鼠,以ELISA方法检测抗体水平,对卵巢做病理切片检测。结果:ELISA结果显示用chitosan包裹的pLC组在皮肤免疫中显示出优势,卵巢病理切片结果正常。结论:Chitosan包裹质粒皮肤免疫小鼠较纯质粒免疫效果更为显著。; 王焱冰李轶杰潘鑫艳陈蓉张富春; 关键词：卵透明带3 皮肤免疫

分子佐剂C3d增强草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗的免疫应答被引量：13: 2006年; 为增强免疫不育的效果,探讨分子佐剂C3d对草原兔尾鼠透明带3(LaguruslagurusZonaPellucida3,LZP3)基因免疫的调节作用。构建了含3个拷贝C3d的lzp3基因真核细胞表达质粒pcDNA3-LZP3-C3d3(pcD-LC),以不含C3d的质粒pcDNA3-LZP3(pcD-L)为对照,体外转染HeLa细胞,RT-PCR和Westernblot分别检测到lzp3mRNA和蛋白的表达。对NIH雌性小鼠肌肉进行基因免疫注射,ELISA结果表明pcD-LC免疫诱导的特异性抗LZP3-IgG水平明显高于pcD-L对照组(P<0.05),且有长期免疫应答效应;MTT结果显示pcD-LC能够诱导淋巴细胞增殖活性的提高。抗生育实验表明pcD-LC免疫组显著降低窝产仔数(P<0.05),且卵巢切片正常。研究结果证实C3d能够增强lzp3DNA疫苗的特异性免疫应答并达到抗生育效果,为DNA疫苗控制草原兔尾鼠的深入研究提供了基础。; 王焱冰李轶杰张富春; 关键词：草原兔尾鼠卵透明带3 DNA 免疫应答抗生育

草原兔尾鼠ZP3基因密码子优化及其在酵母中的表达被引量：1: 2006年; 目的:提高草原兔尾鼠(L agurus lagurus)卵透明带3(LZP 3)基因在酵母细胞中表达的水平.方法:利用重叠PCR技术,定点突变LZP 3基因上6个稀有的密码子簇,将LZP 3基因中11个稀有的密码子更换成毕赤酵母(P ich ia Pastoris)最常用的相应密码子.将获得的LZP 3突变基因(LZP 3m)插入pGAPZαA中,构建穿梭表达载体.以重组体转化P ich ia Pastoris SM D 1168菌株进行表达.结果:LZP 3m基因的表达量比野生型LZP 3基因明显提高.结论:通过密码子优化,能显著提高LZP 3基因在酵母细胞中的表达水平.; 李轶杰张钰胡俊王焱冰张富春; 关键词：草原兔尾鼠卵透明带3 重叠PCR 密码子优化毕赤酵母

优化密码子提高草原兔尾鼠ZP3融合蛋白的原核表达被引量：4: 2005年; 目的:探讨提高草原兔尾鼠(Lagurus lagurus)卵透明带3(LZP3)基因在原核细胞中表达的水平。方法:利用重叠PCR技术,定点突变LZP3基因上3个稀有的密码子簇,将LZP3基因中7个稀有的密码子更换成大肠杆菌(E.coli)最常用的相应密码子。将获得的LZP3突变基因(LZP3m)插入pGEX4T-1中,构建重组表达载体。以重组体转化E.coliBL21(DE3)菌株进行表达。结果:LZP3m基因的表达量比野生型LZP3基因明显提高。结论:通过密码子优化,能显著提高LZP3基因在原核细胞中的表达水平。; 李轶杰张富春张钰王焱冰; 关键词：草原兔尾鼠卵透明带3 重叠PCR 密码子优化原核表达

草原兔尾鼠卵透明带3基因原核表达条件的优化: 2004年; 目的 :通过大肠杆菌原核表达系统制备草原兔尾鼠卵透明带 3(LZP3)融合蛋白 ,作为草原兔尾鼠疫苗免疫抗生育研究的抗原物质。方法 :将LZP3基因的核心片段构建到融合表达载体pGEX - 4T - 1中GST的 3’端 ,形成GST -LZP3融合基因 ,经酶切鉴定和序列分析证实基因序列的正确性。在不同温度、不同时间和不同IPTG浓度进行诱导后 ,用SDS -PAGE检测融合蛋白的表达 ,发现有一条分子量约 6 3kD的新增蛋白条带。结果 :研究表明在 37℃、2 5℃的不同温度条件下均能诱导出LZP3蛋白 ,经SDS -PAGE和间接ELISA法检测 ,初步证明了LZP3基因能够在大肠杆菌中有效表达可溶性的融合蛋白。结论 :获得了LZP3融合蛋白表达的最佳诱导条件 ,为大量诱导产生LZP3融合蛋白奠定了理论基础。; 张爱莲赵干王焱冰张富春; 关键词：草原兔尾鼠卵透明带3 原核表达融合蛋白

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王焱冰